Tài liệu tập huấn lỹ thuật PCR chuẩn đoám bệnh trên tôm cá

AN TOÀN PHÒNG THÍ NGHIỆM Luôn mặc quần áo bảo hộ trong khi làm việc tại phòng thí nghiệm. 1. Hóa chất Hóa chất sử dụng trong phòng thí nghiệm sinh học phân tử phần lớn là những chất độc hại vì thế, luôn xem kỹ tên hóa chất trước khi sử dụng và cần ghi chú rõ ràng bên ngoài bao bì mỗi loại hóa chất. Trước khi sử dụng một loại hóa chất mới, cần phải tham khảo thông tin của chúng từ các tài liệu của nhà sản xuất....
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Tài liệu tập huấn lỹ thuật PCR chuẩn đoám bệnh trên tôm cá Viện Nghiên Cứu Và Nuôi Trồng Thủy Sản IITrung Tâm Quốc Gia Quan Trắc, Cảnh Báo Môi TrườngVà Phòng Ngừa Dịch Bệnh Thủy Sản Khu Vực Nam BộTÀILIỆUTẬPHUẤNKỸTHUẬTPCRCHẨN ĐOÁNBỆNHTRÊNTÔMCÁ Lưu hành nội bộ Tp. Hồ Chí Minh 2007 1 CHƯƠNG I: LÝ THUYẾT PHÒNG THÍ NGHIỆMI. AN TOÀN PHÒNG THÍ NGHIỆMLuôn mặc quần áo bảo hộ trong khi làm việc tại phòng thí nghiệm.1. Hóa chấtHóa chất sử dụng trong phòng thí nghiệm sinh học phân tử phần lớn là những chất độchại vì thế, luôn xem kỹ tên hóa chất trước khi sử dụng và cần ghi chú rõ ràng bên ngoàibao bì mỗi loại hóa chất.Trước khi sử dụng một loại hóa chất mới, cần phải tham khảo thông tin của chúng từcác tài liệu của nhà sản xuất. Ví dụ: Phenol – rất dễ gây cháy Acrylamide – tác động độc lên hệ thần kinh Ethidium bromide – tác nhân gây ung thưLuôn đeo găng tay khi làm việc với các hóa chất và không bao giờ được hút chúng bằngmiệng. Nếu tiếp xúc trực tiếp với những chất độc này phải nhanh chóng rửa vùng tiếpxúc dưới vòi nước và tuân theo chỉ dẫn của người hướng dẫn.Các hóa chất cần phải được bảo quản đúng nhiệt độ quy định: nhiệt độ phòng, trong tủmát (40C) hoặc tủ lạnh âm (-200C) và được ghi nhãn cẩn thận.2. Đèn tử ngoại (UV)Tiếp xúc trục tiếp với tia UV có thể gây hại mắt. Luôn luôn đeo kính bảo vệ khi sửdụng đèn UV.3. Nguồn điệnĐiện thế sử dụng trong quá trình điện di có thể gây giật điện. Đậy nắp bồn điện ditrong suốt quá trình điện di để tránh bị điện giật. Luôn tắt nguồn điện trước khi lấybản gel ra khỏi bồn điện di.4. Các vật dụngVật dụng thủy tinh và nhựa dùng trong sinh học phân tử phải sạch và vô trùng. Ốngnghiệm bẩn như nhiễm khuẩn hoặc dính các chất tẩy đều có thể ức chế phản ứnghoặc làm hỏng vật liệu di truyền (nucleicacid).Vật dụng thủy tinh (ống nghiệm, bình tam giác…) tốt nhất cần được rửa bằng nướccất, hấp thanh trùng hoặc sấy 1500C trong vòng 1 giờ. Đối với thí nghiệm liên quanRNA, vật dụng thủy tinh cần được xử lý bằng diethyl-pyrocarbonate để ức chế enzymeRNases là một loại enzyme rất bền đối với việc hấp thanh trùng. Vật dụng nhựa (pipetsvà ống nuôi cấy, ống nghiệm nhỏ…) cần được thanh trùng trước khi sử dụng. 25. Rác thải và hóa chất thừaEthidium bromide là một tác nhân gây ung thư vì thế khi thao tác với những vật dụng códính chất này cần phải đeo găng tay bảo hộ. Gel agarose có chứa Ethidium bromide cầnphải được vứt bỏ trong một túi riêng có đánh dấu.Quy định túi rác cho từng khu vực, từng công đoạnHóa chất nguy hiểm cần có túi để riêngII. PHA CHẾ DUNG DỊCHNồng độ mole, % và dung dịch mẹ X.Nồng độ mole Dung dịch có nồng độ mole 1 M là một dung dịch có thể tích 1 lít vàchứa số gram hóa chất tương đương với trong lượng phân tử của chất đó.Ví dụ: Chuẩn bị 100ml dung dịch NaCl 5M (trọng lượng phân tử: 58.456 đvc) Cân 29.29 g NaCl (cách tính: 58.456 g/mol x 5 moles/lít x 0.1 lít) Pha trong 100ml nước cất hoặc dung dung môi.Nồng độ phần trăm: Nồng độ phần trăm (trong lượng/thể tích) = trọng lượng chất tan(g) pha trong 100 ml nước cất hoặc dung dung môi.Ví dụ: Chuẩn bị dung dịch agarose 0.7% trong đệm điện di TBE Cân 0.7 g agarose Thêm dung dịch TBE 1X sao cho thể tích cuối cùng là 100ml.Dung dịch mẹ X. Nhiều loại hóa chất, dung dịch cần được chuẩn bị ở nồng độ cao(dung dịch mẹ) 5 lần (5X) hoặc mười lần (10X) so với nồng độ cần thiết khi sử dụng.Trước khi sử dụng chúng sẽ được pha loãng thích hợp để đưa về nồng độ cần thiết(1X của dung dịch làm việc).Ví dụ: Chuẩn bị dung dịch điện di TBE 1X: 100ml dung dịch TBE 10X Thêm 900ml nước cất để thể tích cuối cùng là 1000 ml dung dịch TBE 1X.Chuẩn bị dung dịch làm việc từ dung dịch mẹNhiều dung dịch trong nghiên cứu và ứng dụng sinh học phân tử đòi hỏi sử dụng cùngmột thành phần hóa chất nhưng lại khác nhau về nồng độ. Vì thế để tránh ph ải phứctạp khi pha chế riêng rẽ các hóa chất này chúng ta tốt nhất nên chuẩn bị sẵn một vàidung dịch gốc để dễ dàng pha loãng chúng khi cần thiết.Ví dụ: có thể pha đệm TBE (10 mM Tris, 1 mM EDTA) bằng cách phối hợp 1ml dungdịch Tris 1M và 2 ml dung dịch EDTA 0.5 M cộng với 98.8 ml nước cất vô trùng.Công thức chung dùng để tính toán nồng độ cần thiết như sau: 3 Ci x Vi = Cf x Vf C i = nồng độ ban đầu, hoặc nồng độ của dung dịch mẹ; V i = thể tích ban đầu, hoặc lượng dung dịch mẹ cần thiết, C f = nồng độ cuối, hoặc nồng độ mong muốn sau khi pha; V f = thể tích cuối, hoặc thể tích mong muốn sau khi phaIII. SỬ DỤNG THIẾT BỊYêu cầu học viên giữ gìn c ...