Tạo dòng, biểu hiện và tinh sạch protein tái tổ hợp tPMT-C780 của Pasteurella multocida

Bài viết nghiên cứu tạo dòng, biểu hiện và tinh sạch protein tái tổ hợp tPMT-C780 của Pasteurella multocida làm nguyên liệu ban đầu cho các nghiên cứu tiếp theo để chế tạo vắc xin tái tổ hợp phòng bệnh tụ huyết trùng lợn do vi khuẩn Pasteurella multocida gây ra.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Tạo dòng, biểu hiện và tinh sạch protein tái tổ hợp tPMT-C780 của Pasteurella multocida62 Tr÷íng ¤i håc Næng L¥m TP. Hç Ch½ Minh Cloning, expressing and purification of recombinant C-terminal PMT of Pasteurella multocida Hung K. Vu1∗ , Thinh T. Nguyen1 , Hang T. T. Trinh1 , Thuy T.T. Nguyen1 , Giang T. T. Nguyen1 , Anh T. T. Do2 , & Truong X. Nguyen1 1 Institute of Veterinary Research and Development of Central Vietnam, Khanh Hoa, Vietnam 2 Biotechnology and Environment Institute, Nha Trang University, Khanh Hoa, VietnamARTICLE INFO ABSTRACTResearch Paper Pasteurella multocida strains produce heat-stable toxin Pasteurella Multocida Toxin (PMT) which is the main virulence factor causingReceived: March 19, 2019 pasteurellosis in pigs. Therefore, PMT protein is considered as aRevised: September 10, 2019 promising candidate to study recombinant vaccine against pasteurellosisAccepted: October 15, 2019 in pigs. In this study, we cloned the nucleotide sequence coding C-terminal fragment of PMT (tPMT-780), from acid amine 506 toKeywords acid amine 1285, into pRSET-A vector and expressed it on Escherichia coli BL21 bacteria. The SDS-PAGE result showed that tPMT-C780Escherichia coli BL21 was well-expressed by IPTG 1mM induction and determined to bePasteurella multocida insoluble protein, therefore it was purified by denaturation methodPMT using Ni-NTA beads. The protein elution samples contained only onetPMT-C780 protein band similar with the size of tPMT-C780 and positively reacted with PMT-specific antibody. These results suggested that we were∗ Corresponding author successful in expressing and purifying C-terminal protein of PMT toxin, tPMT-C780. This is the primary material for further studies to produce recombinant vaccine against pasteurellosis in pigs.Vô Khc HòngEmail: vukhac68@hotmail.comCited as: Vu, H. K., Nguyen, T. T., Trinh, H. T. T., Nguyen, T. T. T., Nguyen, G. T. T., Do,A. T. T., & Nguyen, T. X. (2019). Cloning, expressing and purification of recombinant C-terminalPMT of Pasteurella multocida. The Journal of Agriculture and Development 18(5), 62-69.T¤p ch½ Næng nghi»p v Ph¡t triºn 18(5) www.jad.hcmuaf.edu.vnTr÷íng ¤i håc Næng L¥m TP. Hç Ch½ Minh 63 T¤o dáng, biºu hi»n v tinh s¤ch protein t¡i tê hñp tPMT-C780 cõa Pasteurella multocida Vô Khc Hòng1∗ , Nguy¹n Thà Thành1 , Trành Thà Thu H¬ng1 , Nguy¹n Thà Thu Thõy1 , Nguy¹n Thà Thu Giang1 , é Thà Trung Anh2 & Nguy¹n Xu¥n Tr÷íng1 1 Ph¥n Vi»n Thó Y Mi·n Trung, Kh¡nh Háa 2 Vi»n Cæng Ngh» Sinh Håc v Mæi Tr÷íng, Tr÷íng ¤i Håc Nha Trang, Kh¡nh HáaTHÆNG TIN B€I BO TÂM TTBi b¡o khoa håc Chõng ëc lüc Pasteurella multocida ti¸t ra nëi ëc tè chàu nhi»t Pasteurella Multocida Toxin (PMT), l y¸u tè ëc lüc chõ y¸u g¥y b»nh tö huy¸t tròng tr¶n lñn. V¼ vªy, ëc tè PMT l mët y¸u tèNgy nhªn: 19/03/2019 ti·m n«ng cho c¡c nghi¶n cùu ch¸ t¤o vc xin t¡i tê hñp pháng b»nhNgy ch¿nh sûa: 10/09/2019 tö huy¸t tròng lñn. Trong nghi¶n cùu ny, chóng tæi ¢ ti¸n hnhNgy ch§p nhªn: 15/10/2019 t¤o dáng, biºu hi»n o¤n protein ¦u C cõa PMT (tPMT-C780) (tø amino axit 506 ¸n 1285 cõa PMT) tr¶n vi khu©n EscherichiaTø khâa coli BL21 b¬ng vector biºu hi»n l plasmid pRSET-A. K¸t qu£ SDS-PAGE cho th§y protein t¡i tê hñp tPMT-C780 biºu hi»n m¤nhEscherichia coli BL21 khi c£m ùng vîi IPTG 1 mM, v ÷ñc x¡c ành l protein khæng tanPasteurella multocida n¶n ¢ ÷ñc tinh s¤ch theo ph÷ìng ph¡p bi¸n t½nh qua cët Ni-NTA.PMT Dàch protein thu ÷ñc sau khi tinh s¤ch ch¿ chùa mët v¤ch proteintPMT-C780 câ k½ch th½ch t÷ìng ÷ìng vîi tPMT-C78 ...