Tạo phôi bò nhân bản không có zona pellucida

Mục tiêu của nghiên cứu này là tạo phôi bò nhân bản bằng phương pháp cấy chuyển nhân tế bào soma (nguyên bào sợi da tai bò) vào tế bào trứng bò không có zona pellucida. Phương pháp này bao gồm các bước: Loại nhân tế bào trứng bò thành thục không có zona pellucida bằng dao vi phẫu thuật hoặc micro pipette; dung hợp tế bào trứng nhận với tế bào cho (nguyên bào sợi da tai bò); nuôi in vitro trong hệ thống nuôi microwell.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Tạo phôi bò nhân bản không có zona pellucidaKhoa học Nông nghiệpTạo phôi bò nhân bản không có zona pellucidaNguyễn Khánh Vân, Quản Xuân Hữu, Vũ Thị Thu Hương, Nguyễn Thị Hương,Nguyễn Thị Lệ Hương, Phạm Doãn Lân*Phòng thí nghiệm trọng điểm công nghệ tế bào động vật, Viện Chăn nuôiNgày nhận bài 20/10/2017; ngày chuyển phản biện 25/10/2017; ngày nhận phản biện 27/11/2017; ngày chấp nhận đăng 4/12/2017Tóm tắt:Mục tiêu của nghiên cứu này là tạo phôi bò nhân bản bằng phương pháp cấy chuyển nhân tế bào soma (nguyên bàosợi da tai bò) vào tế bào trứng bò không có zona pellucida. Phương pháp này bao gồm các bước: Loại nhân tế bàotrứng bò thành thục không có zona pellucida bằng dao vi phẫu thuật hoặc micro pipette; dung hợp tế bào trứngnhận với tế bào cho (nguyên bào sợi da tai bò); nuôi in vitro trong hệ thống nuôi microwell. Kết quả nghiên cứu chothấy, tỷ lệ tế bào trứng được loại nhân thành công đạt 84,89%, tỷ lệ tế bào trứng dung hợp thành công với tế bào chođạt 86,91%. Sau khi dung hợp, các tế bào trứng đã dung hợp với tế bào cho được lựa chọn cho quá trình hoạt hóa vànuôi in vitro trong môi trường SOFaa. Tại thời điểm 18 giờ sau hoạt hóa, 88,89% tế bào trứng đã được tái cấu trúc ởgiai đoạn 2 tiền nhân. Tỷ lệ phát triển phân chia và tạo phôi nang bò nhân bản tương ứng đạt 87,61 và 24,78%. Kếtquả này cho thấy, các tác giả đã thực hiện thành công phương pháp tạo phôi bò nhân bản không có zona pellucida.Phương pháp tạo phôi bò nhân bản không có zona pellucida đơn giản, dễ sử dụng và hiệu quả.Từ khóa: Cấy chuyển nhân, microwell, phôi bò nhân bản không có zona pellucida.Chỉ số phân loại: 4.2Production of zona-free cloned bovine embryosKhanh Van Nguyen, Xuan Huu Quan, Thi Thu Huong Vu,Thi Huong Nguyen, Thi Le Huong Nguyen, Doan Lan Pham*Key Laboratory of Animal Cell Biotechnology, National Institute of Animal ScienceReceived 20 October 2017; accepted 4 December 2017Abstract:The objective of this work was to apply a new zona-free cloning method forproducing cloned bovine embryos. The procedure of the method includedenucleation of matured oocytes without zona pellucida using a microbladeor micropipette; electrofusion of oocyte-donor cell pairs; in vitro culture inmicrowell system. By this method, the percentage of enucleated oocytes was84.89%, and the percentage of fused oocytes with donor cells was 86.91%.After fusion, oocytes fused with donor cells were selected for activation andin vitro culture in SOFaa medium. At 18 hours after activation and culture,the rate of reconstructed oocytes was 88.89%. The development ratesof cleavage and blastocyst embryos were 87.61 and 24.78%, respectively.In conclusion, the method of zona-free cloning of bovine embryos wasconducted successfully in our lab. This method could be an easy, simple,fast, and efficient operation.Keywords: Microwell, nuclear transfer, zona-free cloned bovine embryos.Classification number: 4.2Đặt vấn đềNhân bản động vật bằng phươngpháp cấy chuyển nhân tế bào soma(SCNT) đã và đang được áp dụng ởnhiều phòng thí nghiệm trên thế giới.Tuy nhiên, hiệu quả của phương phápnày vẫn thấp và tỷ lệ tạo con non daođộng 5-10% tùy thuộc loài [1]. Hiệnnay quy trình tạo phôi nhân bản bằngSCNT vẫn chỉ thực hiện ở trong cácphòng thí nghiệm, đòi hỏi những kỹnăng vi thao tác phức tạp và chi phícao. Để giúp cho việc tạo phôi nhânbản trở thành một phương pháp dễ ápdụng phục vụ nghiên cứu, một số nhàkhoa học đã cải tiến làm cho quy trìnhtạo phôi nhân bản bằng SCNT trở nênđơn giản và dễ áp dụng hơn [2, 3].Điểm nổi bật trong cải tiến của các nhàkhoa học chính là việc sử dụng tế bàotrứng không có zona pellucida (ZP).Các phôi nang tạo ra từ phương phápnày có chất lượng tương tự như phôinang có ZP.Phương pháp tạo phôi nhân bảnkhông có ZP là một phương pháp đơngiản, hiệu quả và dễ sử dụng hơn khi*Tác giả liên hệ: Email: pdlanvn@yahoo.com60(2) 2.201836Khoa học Nông nghiệpđược so sánh với phương pháp nhânbản truyền thống [4]. Quá trình chuẩnbị tế bào chất bằng cách loại nhân tếbào trứng không có màng có thể đượcthực hiện mà không cần phải nhuộmtế bào trứng với thuốc nhuộm huỳnhquang, hiệu quả loại nhân lên tới 95100% và bảo tồn được 96-97% thể tíchtế bào trứng [5]. Tỷ lệ dung hợp giữatế bào trứng nhận không có ZP với tếbào soma lên tới 95-100% khi đượcso sánh với 60-70% của phương phápnhân bản truyền thống [6]. Số lượngphôi nang được tạo ra bằng phươngpháp không ZP bằng hoặc cao hơnso với phương pháp nhân bản truyềnthống [7]. Kết quả cấy truyền phôicũng đã được so sánh đối với cả haiphương pháp. Phương pháp nhân bảnkhông có ZP có thể làm tăng số lượngphôi nhân bản và con non nhân bản bởitính đơn giản và hiệu quả cao [7].Tại Việt Nam, việc nghiên cứu tạophôi bò nhân bản bằng kỹ thuật SCNTtruyền thống đã được thực hiện tạiViện Công nghệ sinh học (Viện Hànlâm KH&CN Việt Nam) với sự hợptác của Viện Nghiên cứu nông nghiệpquốc gia Pháp (INRA) và Đại h ...