Thẩm định quy trình định lượng steroid niệu bằng kỹ thuật sắc ký khí khối phổ

Kỹ thuật sắc ký khí - khối phổ (gas chromatography/ mass spectrometry: GC/MS) được áp dụng rất hiệu quả trong chẩn đoán rối loạn sinh tổng hợp hormon steroid trên thế giới nhưng chưa được triển khai tại Việt Nam. Nghiên cứu này nhằm ứng dụng và thẩm định phương pháp định lượng steroid niệu bằng kỹ thuật GC/MS tại Việt Nam.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Thẩm định quy trình định lượng steroid niệu bằng kỹ thuật sắc ký khí khối phổY Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 21 * Số 3 * 2017 Nghiên cứu Y học THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG STEROID NIỆU BẰNGKỸ THUẬT SẮC KÝ KHÍ KHỐI PHỔ Trần Thị Ngọc Anh*, Trần Thị Chi Mai**,***, Trần Minh Điển***TÓM TẮT Đặt vấn đề: Kỹ thuật sắc ký khí - khối phổ (gas chromatography/ mass spectrometry: GC/MS) được áp dụngrất hiệu quả trong chẩn đoán rối loạn sinh tổng hợp hormon steroid trên thế giới nhưng chưa được triển khai tạiViệt Nam. Nghiên cứu này nhằm ứng dụng và thẩm định phương pháp định lượng steroid niệu bằng kỹthuậtGC/MS tại Việt Nam. Phương pháp: Các steroid niệu được thủy phân nhờ enzym glucuronidase và arylsulphatase, tách chiếtrồi tạo dẫn xuất với methoxyamin và trimethylsilylimmidazol (TMSI), phân tách và định lượng các steroidtrên máy GC/MS. Kết quả:Độ chính xác ngắn hạn CV đạt 1,01-7,72(%) ở mẫu nước tiểu bình thường và 0,78-9,2(%) ở mẫubệnh lý. Độ chính xác dài hạn CV đạt 10,16-14,53(%) ở mẫu bình thường và 12,51-16,95(%) ở mẫu bệnh lý. Giớihạn định lượng 0,05 - 0,16(μmol/L) ở phần lớn các sản phẩm chuyển hóa steroid. Độ thu hồi của các sản phẩmchuyển hoá steroid đạt 90-115(%). Kết luận: Quy trình kỹ thuật định lượng steroid niệu bằng GC/MS xây dựng được là chính xác và xác thực,có thể sử dụng để chẩn đoán và theo dõi điều trị một số rối loạn sinh tổng hợp hormon steroid. Từ khóa: steroid niệu, sắc ký khí khối phổ, rối loạn tổng hợp steroid, thẩm định phương phápABSTRACT VALIDATION OF URINE STEROID PROFILING BY GAS CHROMATOGRAPHY/MASS SPECTROMETRY Tran Thi Ngoc Anh, Tran Thi Chi Mai, Tran Minh Dien * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 21 - No 3 - 2017: 73 - 78 Backgrounds: This study aimed to develop and validate the urinary steroid profiling by gaschromatography/mass spectrometry (GC/MS). Methods: The urine samples are subjected to enzyme hydrolysis using β-glucuronidase/ arylsulfatase. Theunconjugated steroids are extracted, derivatized using methoxyamine and trimethylsilylimmidazol (TMSI). Thederivatives were separated and quantified on GCMS. Results: The short-term imprecision were 1.01-7.72(%) and 0.78-9.2(%) for the pooled normal urine andpooled abnormal urine respectively, the long-term imprecision were10.16-14.54(%) and 12.51-16.95(%) for thepooled normal urine and pooled abnormal urine respectively. The limits of quantitation were 0.05-0.16 (μmol/L)for most of steroid metabolites except α-Cortol. The recovery percentages ranged from 90% to 115(%). Conclusions: This method was accurate, precise and can be applied to the routine diagnosis and treatmentmonitoring of patients with congenital adrenal hyperplasia due to various enzyme defects. Keys words: urinary steroids, GC/MS, abnormal steroidogenesis, method validation * Bệnh viện HN Việt Đức, ** Trường ĐH Y Hà nội, ***Bệnh viện Nhi trung ương Tác giả liên lạc: BS. Trần Thị Ngọc Anh ĐT: 0904395444 Email: ngocanhbm@gmail.com 73Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 21 * Số 3 * 2017ĐẶT VẤN ĐỀ Agilent. Cột sắc ký HP-5MSkích thước 30m x 0,25mm x 0,25 µm (Agilent). Định lượng các sản phẩm chuyển hoá của Hoá chất: Chuẩn steroid của SKML, cácsteroid trong nước tiểu bằng sắc ký khí khối phổ steroid tinh khiếtvà chuẩn nội Androstanol củađược sử dụng như một tiêu chuẩn vàng trong hãng Sigma Aldrich, enzymeglucuronidase/chẩn đoán nhiều rối loạn sinh tổng hợp và sulphatase của hãngKura Biotec (Chi lê).chuyển hoá hormon steroid(4). Kỹ thuật phân tích Methoxyamine, Pyridine vàsteroid niệu bằng GC/MS đặc biệt phù hợp với Trimethylsilylimmidazol (TMSI), hóa chất cầntrẻ em vì mẫu nước tiểu không thâm nhập và có thiết khác của Merck đều có độ tinh khiết ở mứcđộ nhạy, độ đặc hiệu cao(2). Phân tích steroid phân tích.niệu bằng GC/MS đã được xem như công cụdùng để chẩn đoán xác định tăng sản thượng Cột Bond Elut C18 của Agilent và các trangthận bẩm s ...