Thử nghiệp LaL phát hiện

Tài liệu Thử nghiệp LaL phát hiện thuộc giáo trình Các kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau nhằm mục tiêu: hiểu được nguyên tắc của thử nghiệm LaL, các chỉ định áp dụng để có thể đưa vào thành một phương diện chuẩn đoán.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Thử nghiệp LaL phát hiện Kyõ thuaät xeùt nghieäm vi sinh laâm saøng caùc beänh phaåm khaùc nhau THÖÛ NGHIEÄM LAL PHAÙT HIEÄN ENDOTOXIN (limulus amebocytes lysate)Muïc tieâu· Hieåu ñöôïc nguyeân taéc cuûa thöû nghieäm LAL phaùt hieän endotoxin vaø caùc chæ ñònh aùp duïng ñeå coù theå ñöa vaøo thaønh moät phöông tieän chaån ñoaùn vi sinh laâm saøng giuùp chaån ñoaùn phaùt hieän nhanh nhieãm truøng trong moät soá tröôøng hôïp caàn thieát.· Thöïc hieän ñöôïc xeùt nghieäm LAL vôùi keát quaû chính xaùc khoâng bò aâm tính hay döông tính giaû nhôø bieát ñöôïc caùc ñoøi hoûi ñaëc bieät veà vaät lieäu khi tieán haønh laáy, chöùa beänh phaåm, cuõng nhö khi tieán haønh laøm xeùt nghieäm.· Laøm ñöôïc thöû nghieäm LAL ñònh tính vaø ñònh löôïng moät caùch chính xaùc, khoâng sô soùt.Nguyeân taéc Endotoxin laø lipopolysaccharide coù nguoàn goác töø vaùch teá baøo cuûa vi khuaån Gram [-], coù moät tính chaát raát ñaëc tröng laø ly giaûi teá baøo amebocyte tuaàn hoaøn trong maùu con sam (horseshoes = Limulus polyphemus). Dòch ly giaûi amebocytes seõ bò ñuïc ñi cuõng nhö bò ñoâng laïi thaønh gel do ñoä nhôùt bò gia taêng, vaø ñoä ñuïc cuõng nhö ñoä ñoâng cöùng seõ tuøy thuoäc vaøo löôïng endotoxin coù trong maãu thöû. Cô cheá cuûa hieän töôïng naøy thaät ra chöa roõ, coù theå gioáng nhö hieän töôïng ñoâng maùu ôû ngöôøi trong ñoù coù hai quaù trình xaõy ra: (1) Endotoxin vôùi söï hieän dieän cuûa ion calcium kích hoaït moät heä thoáng men tieàn ñoâng gioáng trypsin. (2) Heä thoáng men bò kích hoaït naày seõ laøm bieán ñoåi chaát gaây ñoâng (coagulogen) baèng moät quaù trình ly giaûi protein coù giôùi haïn ñeå saûn sinh ra caùc protein coù theå ñoâng ñaëc ñöôïc. Ñeå ñoïc ñöôïc keát quaû cuûa thöû nghieäm LAL, coù theå coù hai phöông phaùp: 1. Phöông phaùp phaùt hieän dung dòch thöû nghieäm bò taêng ñoä nhôùt, keát quaû laø ñoä ñuïc taêng leân vaø bò ñoâng ñaëc laïi (ñoïc baèng maét thöôøng, hay ñoïc baèng maùy ño ñoä ñuïc) 2. Phöông phaùp sinh maøu döïa treân nguyeân taéc protein bò ly giaûi seõ laøm moät protein khaùc (coù maõ soá S-2423) trong dung dòch sinh maøu sinh ra maøu, ñoä ñaäm nhaït cuûa maøu seõ tuøy 136 Kyõ thuaät xeùt nghieäm vi sinh laâm saøng caùc beänh phaåm khaùc nhau thuoäc vaøo haøm löôïng endotoxin thöû nghieäm vaø chính nhôø vaäy coù theå ñònh löôïng ñöôïc endotoxin.Chæ ñònh aùp duïng Thöû nghieäm LAL ñöôïc chæ ñònh ñeå phaùt hieän vaø ñònh löôïng endotoxin trong caùc maãu dòch truyeàn hay thuoác tieâm trong saûn xuaát döôïc phaåm vì coù ñoä nhaïy cao hôn thöû nghieäm phaùt hieän chí nhieät toá thöïc hieän treân thoû. Thöû nghieäm LAL cuõng coù theå aùp duïng taïi caùc phoøng thí nghieäm vi sinh laâm saøng ñeå phaùt hieän moät caùch giaùn tieáp nhieãm truøng vi khuaån Gram [-] trong caùc dòch khoâng taïp nhieãm cuûa cô theå nhö : Dòch naõo tuyû, dòch maøng phoåi, dòch maät, dòch oå buïng. Phöông phaùp coù lôïi ñieåm laø coù keát quaû nhanh chæ vaøi giôø sau khi göûi maãi ñi laøm xeùt nghieäm. Tuy nhieân phöông phaùp naøy khoâng theå thay theá nuoâi caáy vì khoâng cho bieát vi khuaån gaây nhieãm truøng laø vi khuaån gì, vaø khoâng theå cho bieát ñöôïc keát quaû khaùng sinh ñoà. Ñeå coù theå coù keát quûa khoâng bò döông tính giaû vì maãu bò taïp nhieãm endotoxin trong laáy vaø chöùa maãu, caùc vaät lieäu duøng ñeå laáy vaø chöùa maãu phaûi thaät söï tinh saïch vaø khoâng coù endotoxin. Toát nhaát laø duøng caùc vaät lieäu baèng nhöïa polystyrene voâ truøng baèng gamma ñeå chöùa maãu (loï voâ truøng naép ñoû cuûa coâng ty Nam Khoa), vaø laáy maãu baèng oáng chích thuyû tinh voâ truøng (ñaõ xöû lyù nhö höôùng daãn ôû muïc tieáp theo). Ñeå keát quaû khoâng bò aâm tính giaû thì caùc vaät lieäu ñeå laáy vaø chöùa maãu cuõng khoâng coù ñaëc tính haáp phuï endotoxin, nghóa laø chuùng ta phaûi traùnh duøng caùc vaät lieäu baèng nhöïa polypropylene (nhöïa PP).Chuaån bò vaät lieäuVaät lieäu thuûy tinh Toát nhaát laø neân duøng caùc vaät lieäu thuûy tinh môùi. Vôùi caùc vaät lieäu thuûy tinh môùi, caàn boïc giaáy nhoâm roài haáp khöû truøng 121oC trong 1 giôø, sau ñoù saáy khoâ 175oC trong 3 giôø. Vôùi caùc vaät lieäu thuûy tinh ñaõ duøng roài, caàn phaûi ngaâm trong dung dòch 1% taåy kieàm, vd dung dòch 1% E-TOXA-CLEANâ cuûa Sigma (Catalog No. 210-3), thôøi gian ngaâm toát nhaát laø qua ñeâm. Khi ngaâm coù theå duøng choåi ñeå chaø saïch. Sau khi ngaâm röûa 8-10 laàn döôùi voøi nöôùc noùng ñang chaûy, sau ñoù röûa 5 laàn döôùi voøi nöôùc caát hay nöôùc khöû ion. Cuoái cuøng traùng laïi moät laàn vôùi nöôùc ñaõ khöû endotoxin. Saáy khoâ duïng cuï trong tuû saáy, sau ñoù boïc giaáy nhoâm roài khöû truøng gioáng nhö treân. 1 ...