Tổng hợp và nghiên cứu tác dụng của protein tái tổ hợp (rHIP) trên sự phát triển dòng tế bào sợi phân lập từ mô lợi phì đại

Heparan sulfate proteoglycans (HSPG) nằm ở trênbề mặt tế bào hoặc trong khoảng gian bào của tất cảcác mô động vật. HSPG và các protein liên kết vớichúng tham gia vào nhiều quá trình sinh học của tếbào như: sự liên kết tế bào - tế bào, quá trình phânbào, biệt hóa, sự di chuyển và các quá trình sinh bệnhlý của tế bào [1, 2, 6]. Khoảng gian bào là nơi lưu giữvà giải phóng các enzyme proteinase, các chất ức chếvà các yếu tố phát triển tế bào. Những tác nhân gâyra sự giải phóng các yếu tố...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Tổng hợp và nghiên cứu tác dụng của protein tái tổ hợp (rHIP) trên sự phát triển dòng tế bào sợi phân lập từ mô lợi phì đại TCNCYH phô b¶n 32 (6) - 2004 Tæng hîp vµ nghiªn cøu t¸c dông cña protein t¸i tæ hîp (rHIP) trªn sù ph¸t triÓn dßng tÕ bµo sîi ph©n lËp tõ m« lîi ph× ®¹i T¹ Thµnh V¨n1 vµ M. C. Farach - Carson2 1 , Bé m«n Hãa - Hãa sinh, §¹i häc Y Hµ Néi 2 , Phßng Sinh häc ph©n tö vµ Néi tiÕt, Khoa Sinh häc, Tr−êng §¹i häc Delaware, Hoa Kú I. §ÆT VÊN §Ò HP/HS, HIP tham gia ®iÒu hßa sù ph¸t triÓn tÕ bµo th«ng qua viÖc ®iÒu hßa qu¸ tr×nh l−u gi÷ vµ gi¶i Heparan sulfate proteoglycans (HSPG) n»m ë trªn phãng bFGF tõ kho¶ng gian bµo. §Ó chøng minh chobÒ mÆt tÕ bµo hoÆc trong kho¶ng gian bµo cña tÊt c¶ gi¶ thiÕt nµy, chóng t«i ®· sö dông dßng tÕ bµo sîic¸c m« ®éng vËt. HSPG vµ c¸c protein liªn kÕt víi ph©n lËp tõ m« lîi b×nh th−êng vµ lîi ph× ®¹i cña c¸cchóng tham gia vµo nhiÒu qu¸ tr×nh sinh häc cña tÕ bÖnh nh©n ghÐp t¹ng ®iÒu trÞ b»ng thuèc øc chÕ miÔnbµo nh−: sù liªn kÕt tÕ bµo - tÕ bµo, qu¸ tr×nh ph©n dÞch cyclosporine A (CsA) lµm m« h×nh nghiªn cøubµo, biÖt hãa, sù di chuyÓn vµ c¸c qu¸ tr×nh sinh bÖnh thùc nghiÖm. Sù ph× ®¹i cña m« lîi liªn quan víi viÖclý cña tÕ bµo [1, 2, 6]. Kho¶ng gian bµo lµ n¬i l−u gi÷ sö dông CsA ®−îc cho lµ do sù t¨ng c−êng ph¸t triÓnvµ gi¶i phãng c¸c enzyme proteinase, c¸c chÊt øc chÕ cña c¸c tÕ bµo sîi. §ång thêi t¹i c¸c m« nµy cã sùvµ c¸c yÕu tè ph¸t triÓn tÕ bµo. Nh÷ng t¸c nh©n g©y t¨ng c−êng tæng hîp c¸c yÕu tè ph¸t triÓn cïng víira sù gi¶i phãng c¸c yÕu tè ph¸t triÓn tõ kho¶ng gian c¸c receptor cña chóng vµ HSPG. ChÝnh v× vËy, ®©ybµo ®Òu dÉn ®Õn viÖc thóc ®Èy sù ph¸t triÓn cña tÕ lµ mét m« h×nh nghiªn cøu in vitro lý t−ëng ®Ó t×mbµo. Khi xö lý m« víi enzyme thñy ph©n hiÓu c¬ chÕ ph× ®¹i cña m« lîi ë nh÷ng bÖnh nh©n söheparin/heparan sulfate (HP/HS) hoÆc víi c¸c chÊt øc dông CsA còng nh− vai trß cña HIP. Trong nghiªnchÕ tæng hîp HSPG, tÕ bµo ph¸t triÓn m¹nh vµ trë cøu nµy chóng t«i ®· sö dông c«ng nghÖ gen ®Ó tængnªn cã ®é linh ®éng cao, dÔ dµng t¸ch rêi khái c¸c hîp HIP cña ng−êi t¸i tæ hîp trªn hÖ vi khuÈn E. coli.m«. §©y chÝnh lµ mét trong c¸c c¬ chÕ di c¨n cña HIP t¸i tæ hîp ®· ®−îc sö dông trong m« h×nh thùcung th−, trong ®ã c¸c tÕ bµo ph¸t triÓn rÊt m¹nh vµ dÔ nghiÖm in vivo ®Ó nghiªn cøu t¸c dông øc chÕ cñadi chuyÓn sang m« kh¸c. protein nµy trªn dßng tÕ bµo sîi ph©n lËp tõ m« lîi Protein g¾n ®Æc hiÖu víi heparan sulfate (HIP) b×nh th−êng vµ m« lîi ph× ®¹i cña bÖnh nh©n ghÐp®−îc x¸c ®Þnh lµ mét protein mµng, nhËn biÕt nh÷ng t¹ng sö dông CsA.vÞ trÝ ®Æc hiÖu trªn ph©n tö HP/HS. ADN cña HIP m·hãa 159 acid amine cã träng l−îng ph©n tö kho¶ng II. VËT LIÖU Vµ PH−¬NG PH¸P24 kDa. HIP ®−îc tæng hîp nhiÒu ë tÕ bµo néi m¹c 1. VËt liÖuvµ tÕ bµo biÓu m« tr−ëng thµnh [4, 5]. Protein nµy Heparin, imidazole, vµ bovine serum albuming¾n trùc tiÕp, ®Æc hiÖu víi HP/HS vµ heparan sulfate. ®−îc mua tõ Sigma (St. Louis, MO, USA). bFGFChuçi peptid ng¾n ®−îc tæng hîp m« pháng theo ®−îc mua tõ Becton Dickinson Labware (Bedford,vïng g¾n ®Æc hiÖu víi HP/HS cña HIP còng cã kh¶ MA, USA). Minimal essential medium (MEM),n¨ng g¾n ®Æc hiÖu vµ chän läc víi HP/HS. Thªm vµo penicillin/streptomycin, Fungizone®, fetal bovine®ã, HIP cßn cã kh¶ n¨ng øc chÕ heparanase, th«ng serum (FBS), c¸c thµnh ...