Ứng dụng kỹ thuật MLPA phát hiện đột biến mất đoạn gen APC

Bệnh đa polyp tuyến gia đình (Familial adenomatous polyposis – FAP) là bệnh di truyền trội với biểu hiện lâm sàng là sự xuất hiện của hàng trăm đến hàng ngàn polyp trong đại trực tràng. Nếu không được điều trị thì 100% bệnh nhân sẽ bị ung thư đại trực tràng vào năm 35-40 tuổi. Nguyên nhân gây ra bệnh FAP là đột biến trên gen APC. Hiện nay, kĩ thuật MLPA là kĩ thuật có nhiều ưu điểm trong chẩn đoán các dạng đột biến mất đoạn gen.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Ứng dụng kỹ thuật MLPA phát hiện đột biến mất đoạn gen APCNghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 20 * Phụ bản của Số 1 * 2016 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT MLPA PHÁT HIỆN ĐỘT BIẾN MẤT ĐOẠN GEN APC Nguyễn Hữu Huy*, Đoàn Nam Khánh*, Lê Minh Khôi**, Nguyễn Thị Băng Sương**TÓMTẮT Mở đầu: Bệnh đa polyp tuyến gia đình (Familial adenomatous polyposis – FAP) là bệnh di truyền trội vớibiểu hiện lâm sàng là sự xuất hiện của hàng trăm đến hàng ngàn polyp trong đại trực tràng. Nếu không đượcđiều trị thì 100% bệnh nhân sẽ bị ung thư đại trực tràng vào năm 35-40 tuổi. Nguyên nhân gây ra bệnh FAP làđột biến trên gen APC. Hiện nay, kĩ thuật MLPA là kĩ thuật có nhiều ưu điểm trong chẩn đoán các dạng đột biếnmất đoạn gen. Mục tiêu: Ứng dụng kỹ thuật MLPA phát hiện đột biến mất đoạn gen APC gây bệnh FAP Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Chúng tôi nghiên cứu trên 35 bệnh nhân có dấu hiệu lâm sàng củabệnh FAP. Thực hiện tách chiết ADN từ mẫu máu, kiểm tra độ tinh sạch của ADN, chạy phản ứng MLPA, điệndi mao quản và phân tích kết quả bằng phần mềm GeneMaker v1.92 Kết quả: Phát hiện 1 bệnh nhân có đột biến mất đoạn. 3 thân nhân của bệnh nhân cũng có đột biến tương tự. Kết luận: Chúng tôi đã ứng dụng thành công quy trình MLPA phát hiện đột biến mất đoạn gen APC. Cầntiếp tục nghiên cứu trên nhiều bệnh nhân nữa nhằm khẳng định giá trị của MLPA trong phát hiện và xác địnhcác đột biến gây bệnh FAP. Từ khoá: Hội chứng Gardner, APC, Giải trình tự.ABSTRACT APPLICATION OF MULTIPLEX LIGATION-DEPENDENT PROBE AMPLIFICATION TECHNIQUE FOR DETECTING MICRODELETION OF APC GENE Nguyen Huu Huy, Đoan Nam Khanh, Le Minh Khoi, Nguyen Thi Bang Suong * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 20 - Supplement of No 1 - 2016: 80 - 85 Introduction: Familial adenomatous polyposis (FAP) is an autosomal dominant inherited disordercharacterized by the early onset of hundreds to thousands of adenomatous polyps throughout the colon. If leftuntreated, all patients with this syndrome will develop colon cancer by age 35-40 years. In addition, an increasedrisk exists for the development of other malignancies. Familial adenomatous polyposis results from mutations inthe APC gene. Multiplex Ligation-Dependent Probe Amplification (MLPA) techique has many advantages indetecting genomic microdeletions or duplications. Objective: We studied the application of MLPA technique to diagnose mutations in APC gene causeFamilial adenomatous polyposis. Patients and Methods: 35 patients with clinical manifestations of FAP. DNA extracted from whole bloodsamples was tested for purity then MLPA and capilary electrophoresis were performed. The results were analysedby GeneMaker software version 1.92 Results: One patient showed deletion. Three relatives’s patient had deletion. Conclusions: We have sucessfully applied the MLPA technique in detecting microdeletion of APC gene. * Đại học Khoa học tự nhiên Tp. Hồ Chí Minh ** Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc : PGS TS. Nguyễn Thị Băng Sương ĐT: 0914007038 Email: suongnguyenmd@gmail.com80 Chuyên Đề Khoa học Cơ bản – Y tế Công cộngY Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 20 * Phụ bản của Số 1 * 2016 Nghiên cứu Y họcMore investigations of larger scale need to be done to verify the value of MLPA in detecting and characterizing themutations causing FAP. Keywords: Familial adenomatous polyposis, APC gene, MLPA.ĐẶT VẤN ĐỀ ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Bệnh đa polyp tuyến gia đình (Familial Đối tượng nghiên cứuadenomatous polyposis – FAP) là bệnh di truyền Nhóm nghiên cứu: 35 bệnh nhân đa polyptrội với biểu hiện lâm sàng là sự xuất hiện của đại trực tràng không phát hiện đột biến điểmhàng trăm đến hàng ngàn polyp trong đại trực gen APC và gia đình của một bệnh nhân pháttràng. Các polyp này ban đầu là lành tính nhưng hiện đột biến mất đoạn gen APC.dần trở thành ác tính, nếu không được điều trị Nhóm chứng: gồm 10 người bình thường,thì 100% bệnh nhân sẽ bị ung thư đại trực tràng tiền sử gia đình không có ai mắc bệnh di truyền.vào năm 35-40 tuổi (8). Bệnh đa polyp tuyến gia Phương pháp nghiên cứuđình khởi phát sớm, trung bình vào khoảng 16 Kỹ thuật tách chiết ADN từ 200 μl máu ngoạituổi. Bên cạnh nguy cơ ung thư đại trực tràng, vibệnh còn làm gia tăng nguy cơ mắc nhiều loại Máu tươi được chống đông bằng EDTA,ung thư khác như ung thư dạ dày, tá tràng, ung được tách trong vòng 24 giờ. Quy trình tách chiếtthư nguyên bào gan, ung thư tụy, ung thư tuyến ADN từ 200μl máu ngoại vi được tiến hành theogiáp,...(5). Nguyên nhân gây bệnh FAP là do đột QiAgen Kit. Đo nồng độ và độ tinh sạch củabiến trên gen APC. Gen APC nằm ở vị trí 5q22.2, ADN. Những mẫu có giá trị tỷ lệ về mật độmã hóa cho protein APC tham gia vào phức hợp quang đo ở bước sóng 260/280 đạt 1,8-2,0 mớiphân hủy β-catenin. Khi đột biến xảy ra trên gen được sử dụng để tiến hành phản ứng MLPA.APC sẽ làm β-catenin tích tụ và đi vào nhân, kích Phản ứng MLPAhoạt yếu tố phiên mã TCF/LEF hoạt động, kích Sử dụng SALSA MLPA Kit P043-APCthích sự tăng sinh mất kiểm soát của tế bào dẫn probemix (MRC- Holland) chứa 29 probe lai đặcđến ung thư(4). hiệu với 15 exon của gen Dystrophin, ngoài ra Về mặt di truyền học, có nhiều kiểu đột còn có 11 probe nội chuẩn giúp kiểm tra sai sótbiến trên gen APC, ngoài các dạng ...