Vai trò của hócmôn leptin trong nuôi cấy phôi trong ống nghiệm

Leptin là một mạch peptide gồm 167 axit amin và có trọng lượng phân tử 16 kD. Leptin là một hócmôn do mô mỡ tiết ra và do Zhang và cs phát hiện ra năm 1994. Khi mới được phát hiện, hócmôn leptin được coi là có ảnh hưởng đến cân bằng năng lượng bằng cách tác động lên thần kinh trung ương để ức chế lượng thức ăn thu nhận. Receptor của hocmôn leptin được tìm thấy ở não, tuyến yên, buồng trứng, nhau thai cũng như ở mô mỡ. Leptin ảnh hưởng lên trao đổi năng lượng...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Vai trò của hócmôn leptin trong nuôi cấy phôi trong ống nghiệm Vai trò của hócmôn leptin trong nuôi cấy phôi trong ống nghiệm I. Đặt vấn đề Leptin là một mạch peptide gồm 167 axit amin và có trọng lượngphân tử 16 kD. Leptin là một hócmôn do mô mỡ tiết ra và do Zhang và csphát hiện ra năm 1994. Khi mới được phát hiện, hócmôn leptin được coi làcó ảnh hưởng đến cân bằng năng lượng bằng cách tác động lên thần kinhtrung ương để ức chế lượng thức ăn thu nhận. Receptor của hocmôn leptinđược tìm thấy ở não, tuyến yên, buồng trứng, nhau thai cũng như ở mô mỡ. Leptin ảnh hưởng lên trao đổi năng lượng bằng cách tăng mức tiêu thụôxy, tăng vận động và tăng nhiệt độ cơ thể. Leptin cũng được chứng minh làcó nhiều vai trò trong sinh sản. Điều trị leptin có thể phục hồi sinh sản ởchuột. Leptin được coi là làm tăng chức năng sinh sản, thành thục sinh dụcsớm ở chuột. Trong quá trình chửa của người, leptin được chứng minh là cóliên quan vào điều khiển sự phát triển của thai, nhau thai và sinh tổng hợphócmôn. ở lợn, leptin ở nhau thai nhiều thì thai phát triển bình thường cònleptin ít thì lợn chậm phát triển. Dựa trên những phát hiện trên đây, chúng tôi giả thiết rằng leptin cóthể có vai trò trong sự phát triển của phôi nuôi cấy trong ống nghiệm. Đểkiểm tra giả thuyết này, chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng củacác nồng độ leptin khác nhau lên sự phát triển của phôi trong ống nghiệm.Ngoài ra chúng tôi cũng nghiên cứu ảnh hưởng của mùa vụ thu phôi lên sựphát triển của phôi trong ống nghiệm. II. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu 1. Phôi Phôi hai tế bào được thu ở ngày thứ 2 sau khi phối giốngbằng phươngpháp phẫu thuật 2. Nuôi cấy phôi trong ống nghiệm Chuẩn bị môi trường dịch ống dẫn trứng tổng hợp (mSOF) có thay đổitheo công thức của Tervit và cs (1972). Đầu tiên phôi được nuôi cấy trong mSOF có bổ xung axit amin khôngthay thế trong 48 giờ. Sau đó phôi được chuyển sang môi trường mSOF cóbổ xung axit amin không thay thế, axit amin thay thế và Albumin huyếtthanh bò thêm 3 ngày nữa. Độ pH của môi trường được điều chỉnh để đạt tới7,4. áp xuất thẩm thấu được duy trì ở 270-300 mOsmol. Thành phần chi tiếtcủa môi trường được trình bày ở bảng 1. Bảng 1: Thành phần môi trường mSOF Thành phần g/100ml NaCL 5.830 KCL 0.534 KH2PO4 0.162 MgCL2.H2O 0.100 Na Lactate 0.616 Glucose 0.270 Penicillin 0,060 Streptomicin 0.050 NaHCO3 2.102 Phenol Red 0.010 Pyruvate 0.360 CaCL2.2H2O 2.520 Gluthamine 1.460 Axit Amin không 1.0 mlthay thế 2.0 ml Axit Amin thay thế 0.8 Albumin huyết thanhbò Sau khi phân loại, hợp tử được rửa 3 lần trong mSOF trước khi đặtvào đĩa nuôi cấy. Mỗi nhóm 5-10 phôi được nuôi cấy trong 50ml ở 4 môitrường khác nhau (mSOF, SOF+1,0ng/ml leptin, mSOF+10,0ng/ml leptin vàmSOF+100,0ng/ml leptin) và phủ dầu khoáng. Phôi được nuôi cấy trong tủnuôi cấy có 5% CO2, 5%O2 và 90%N2 trong 5 ngày ở 38,80C. Tất cả môitrường được để cân bằng trong đĩa nuôi cấy trong 5% CO2, 5%O2 và 90%N2trong 1 đêm trước khi được đưa ra dùng. 3. Đánh giá chất lượng phôi Sau 5 ngày nuôi cấy, phôi được đánh giá theo hình thái và chất lượngtheo phương pháp của Lindner và Wright (1983). Phôi được phân loại theogiai đoạn phát triển gồm 8 tế bào, phôi dâu, phôi nang và phôi nang thoátmàng 4. Sử lý số liệu Số liệu được sử lý theo chương trình thống kê REG, Version 90.12của Gilmour 1990. III. Kết quả ảnh hưởng của mùa vụ thu phôi ảnh hưởng của mùa thu phôi lên sự phát triển của phôi nuôi cấy trongống nghiệm được trình bày ở bảng 2 Bảng 2: ảnh hưởng của mùa thu phôi lên sự phát triển của phôi nuôicấy trong ống nghiệm Tỷ lệ phôi phát triển đến 4 giai đoạn nuôi cấy(%) Mùa N tế 8 Phôi Phôi Phôi bào dâu nang thoát màng 94,6b Mùa 47 62,2 43,2 8,1xuân ...