XÁC ĐỊNH TỶ LỆ GEN p53 TRÊN NHỮNG NGƯỜI CÓ NGUY CƠ PHƠI NHIỄM DIOXIN

Tác động của dioxin gây hậu quả hết sứcnghiêm trọng đối với môi trường sinh thái và đặcbiệt là đối với sức khoẻ con người. Những hậu quảdo dioxin gây ra trên người và động vật bao gồm:ung thư, suy giảm miễn dịch, rối loạn chức năngthần kinh, quái thai, dị tật bẩm sinh và nhiều bệnhtật khác [1].Những năm gần đây, với sự phát triển củakhoa học kỹ thuật, công nghệ và sinh học phân tửđã và đang làm sáng tỏ những vấn đề về hậu quảcủa dioxin đối với cấu trúc và chức năng của gen.Chúng tôi đã...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
XÁC ĐỊNH TỶ LỆ GEN p53 TRÊN NHỮNG NGƯỜI CÓ NGUY CƠ PHƠI NHIỄM DIOXIN TCNCYH 38 (5) - 2005 XÁC ĐỊNH TỶ LỆ GEN p53 TRÊN NHỮNG NGƯỜI CÓ NGUY CƠ PHƠI NHIỄM DIOXIN Bạch Khánh Hoà, Trần Thị Phương, Nguyễn Văn Tường Trường Đại học Y Hà Nội Những bệnh do dioxin gây ra chủ yếu là rối loạn sinh sản và ung thư; p53 là một trong những gen cóvai trò quan trọng trong nhóm gen ức chế ung thư, do vậy chúng tôi tiến hành nghiên cứu tỷ lệ gen p53trên đối tượng có NCPND. Mục tiêu: Xác định ảnh hưởng của dioxin đến tỷ lệ gen p53 trên những ngườicó NCPND. Đối tượng và phương pháp: Nghiên cứu được tiến hành trên 50 người có NCPND và 30người bình thường, áp dụng kỹ thuật PCR để xác định gen p53. Kết quả: Ở nhóm người bình thường tầnsuất gen p53 là 100% trong khi đó ở nhóm người có NCPND là 82%, sự khác biệt có ý nghĩa với p < 0,05.Kết luận: 18% đối tượng của nhóm có NCPND không xác định được gen p53 gợi ý rằng những đối tượngnày gen p53 bị tổn thương lớn (mất đoạn…). Từ khoá: Nguy cơ phơi nhiễm dioxin (NCPND), p53, đột biến gen.I. ĐẶT VẤN ĐỀ Nhóm 2: 30 người bình thường khoẻ mạnh, không có bệnh mạn tính, cho máu tự nguyện tại Tác động của dioxin gây hậu quả hết sức viện Huyết học – Truyền máu Trung ương.nghiêm trọng đối với môi trường sinh thái và đặcbiệt là đối với sức khoẻ con người. Những hậu quả 2. Phương pháp nghiên cứudo dioxin gây ra trên người và động vật bao gồm: Tách ADN → Phản ứng PCR → Điện di → Đọcung thư, suy giảm miễn dịch, rối loạn chức năng kết quả.thần kinh, quái thai, dị tật bẩm sinh và nhiều bệnh - Tách AND: Tách ADN theo kỹ thuật của S. A.tật khác [1]. Miller, D. D. Dykes và H. F. Polesky có cải tiến cho Những năm gần đây, với sự phát triển của phù hợp với điều kiện của phòng thí nghiệm [3].khoa học kỹ thuật, công nghệ và sinh học phân tử - Phản ứng PCRđã và đang làm sáng tỏ những vấn đề về hậu quả 1. Sử dụng bead của hãng Amershamcủa dioxin đối với cấu trúc và chức năng của gen. Biosciences: thành phần của bead bao gồm: dNTPChúng tôi đã tiến hành nghiên cứu gen p53 trong 200µM, Taq polymerase 2,5 Units, Tris – HCLtế bào máu ngoại vi của người có NCPND dựa trên 10µM, KCL 50µM, MgCl2 1,5µM.giả thuyết về cơ chế phá huỷ DNA do dioxin gây rathông qua việc tạo ra các gốc tự do, ảnh hưởng từ 2. Mồi sử dụng có trình tự như sau: [4]quá trình sửa chữa DNA bị hỏng lên chu trình phân P18: GTC AAT CAG CAG GAA TCA TCG Gbào, sự phát sinh ung thư và đột biến gen [5]. M10: GGA ACA TCA AAG CCC TCT TCA GCMục tiêu: Xác định ảnh hưởng của dioxin đến Mồi P18 nằm ở vị trí 639 đến 660 của gen p53tỷ lệ gen p53 trên những người có NCPND. Mồi M10 nằm ở vị trí 1368 đến 1390 của gen p53.II. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 3. Chu kỳ khuyếch đại của phản ứng PCRNGHIÊN CỨU Biến tính 95oC trong 2 phút, sau đó chạy 35 1. Đối tượng: gồm hai nhóm chu kỳ: 95oC/1 phút, 54oC/1 phút, 72oC/1 phút; Nhóm 1: 50 người NCPND, đây là những người cuối cùng là 72 oC trong 10 phút và 4oC.sống trong khu vực bị nhiễm dioxin từ thời kỳ - Điện di: Sản phẩm của PCR khoảng 600bp vàchiến tranh chống Mỹ. Nhóm này đã được xác định được điện di trên gen agarose 1,5%,hàm lượng dioxin trong mẫu máu trộn (có hàm III. KẾT QUẢlượng lớn hơn mức nền của người Việt Nam: >2pg/g lipid) Trên hình 1 cho thấy sản phẩm PCR từ gen p53 được điện di trên agarose 1,5% có độ dài khoảng 600bp. Kết quả của chúng tôi là: trên nhóm người 1TCNCYH 38 (5) - 2005bình thường 100% có băng ADN của gen p53 xuất chức năng của p53. Phản ứng PCR để phát hiệnhiện, còn ở nhóm người có nguy cơ phơi nhiễm chỉ gen p53 có thể thực hiện với các cặp mồi kháccó 82% (41/50) người có băng ADN của gen p53 nhau, Nông Văn Hải và cộng ...