Xây dựng kỹ thuật multiplex-PCR sử dụng chung mồi để phát hiện một số tác nhân gây nhiễm khuẩn trong thực phẩm

Mục tiêu nghiên cứu nhằm xây dựng bộ kit xét nghiệm multiplex PCR sử dụng chung mồi ñể phát hiện đồng thời nhiều tác nhân vi sinh gây nhiễm trùng thực phẩm bao gồm: Listeria monocytogenes, Vibrio cholerae, và Shigella spp. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xây dựng kỹ thuật multiplex-PCR sử dụng chung mồi để phát hiện một số tác nhân gây nhiễm khuẩn trong thực phẩmY Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ bản của Số 2 * 2010Nghiên cứu Y họcXÂY DỰNG KỸ THUẬT MULTIPLEX-PCR SỬ DỤNG CHUNG MỒIĐỂ PHÁT HIỆN MỘT SỐ TÁC NHÂN GÂY NHIỄM KHUẨNTRONG THỰC PHẨM*Nguyễn Đỗ Phúc , Hoàng Hoài Phương*, Trần Thị Ngọc Phương*, Phạm Hùng Vân**TÓM TẮTĐặt vấn ñề: Kỹ thuật multiplex-PCR cho phát hiện các tác nhân gây nhiễm khuẩn trong thực phẩm nhưListeria monocytogenes, Vibrio choleare và Shigella spp. ñồng thời cùng một lúc nhằm góp phần cho công tác xétnghiệm nhanh phục vụ cho giám sát và ngộ ñộc thực phẩm là một nhu cầu cấp thiết hiện nay.Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng bộ kit xét nghiệm multiplex PCR sử dụng chung mồi ñể phát hiện ñồng thờinhiều tác nhân vi sinh gây nhiễm trùng thực phẩm bao gồm: Listeria monocytogenes, Vibrio cholerae, và Shigellaspp.Phương pháp nghiên cứu: Các chủng vi khuẩn chuẩn Listeria monocytogenes, Vibrio cholerae, và Shigellaspp sau khi tăng sinh trên môi trường TSB ñược sử dụng ñể tách chiết DNA và kỹ thuật multiplex-PCR sử dụngchung mồi ñể phát hiện các tác nhân này.Kết quả nghiên cứu: Trong phản ứng multiplex-PCR sử dụng chung mồi có nồng ñộ Mg2+ là 3,5mM, nồngñộ các cặp mồi ñể phát hiện các vi khuẩn Listeria monocytogenes, Vibrio cholerae, và Shigella spp là 2pM vànồng ñộ mồi chung là 5pM cho một phản ứng. - Độ nhạy của bộ kít multiplex-PCR chung mồi, khi phát hiệnListeria monocytogene, Vibrio cholerae, và Shigella spp là 103 vi khuẩn/ml. - Độ ñặc hiệu của bột kít multiplexPCR là ñặc hiệu với các vi khuẩn ñích Listeria monocytogene, Vibrio cholerae, và Shigella spp và không ñặc hiệuñối với các vi khuẩn không ñích: Listeria innocua, Listeria ivanovii, Listeria seewil, Vibrio parahamolyticus,Salmonella enteritidis, Salmonella typhymurium và E.coli.Kết luận: Sử dụng phương pháp multiplex-PCR chung mồi ñể phát hiện 3 vi khuẩn Listeriamonocytogenes, Vibrio cholerae, và Shigella spp. gây ô nhiễm thực phẩm cùng một lúc có thể áp dụng tạiphòng thử nghiệm vi sinh thực phẩm trong công tác giám sát và ñiều tra một số vi khuẩn gây tiêu chảy dothực phẩm bi ô nhiễm gây nên.Từ khóa: vi khuẩn gây ô nhiễm thực phẩm, multiplex-PCR.ABSTRACTSET UP A TECHNIQUE OF MULTIPLEX-PCR USING THE GENERAL PRIMER FOR DETECTION SOMEPATHOGENIC BACTERIA CONTAIMINATION IN FOODNguyen Do Phuc, Hoang Hoai Phuong, Tran Thi Ngoc Phuong, Pham Hung Van* Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 14 - Supplement of No 2 – 2010: 327 - 336Background: The multiplex-PCR for detection of the bacteria contaiminated in food such as Listeriamonocytogenes, Vibrio choleare và Shigella spp. at the same time helping for supervise and investigate the foodborn outbreak is necessaryObjectives: Set up a technique of multiplex-PCR using the general primer for detection the pathogenicbacteria: Listeria monocytogenes, Vibrio cholerae, and Shigella spp.Method: The strains of Listeria monocytogenes, Vibrio cholerae and Shigella spp after enrichment in TSBmedium that used for extraction DNA and using technique multiplex-PCR with the general primer for detectionthose bacterias.Results: In the kit of multiplex-PCR have Mg2+ content is 3.5mM, primer for detection Listeriamonocytogenes, Vibrio cholerae, and Shigella spp is 2pM and the general primer is 5pM for one reaction. - Thesensitivity of the multiplex-PCR kit for detection Listeria monocytogene, Vibrio cholerae, and Shigella spp is là103 bacteria/ml. - The specificity of the multiplex-PCR kit can detection of Listeria monocytogene, Vibrio*Viện Vệ sinh - Y tế Công cộng TP Hồ Chí Minh** Trường Đại học Y Dược TP. Hồ Chí MinhLiên lạc: Ths. Nguyễn Đỗ PhúcĐT: 0907 669 008Email: nguyendophuc@ihph.org.vnHội nghị Khoa học Kỹ thuật Viện Y Tế Công Cộng năm 2009 - 2010327Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ bản của Số 2 * 2010Nghiên cứu Y họccholerae, và Shigella spp. but not detection of Listeria innocua, Listeria ivanovii, Listeria seewil, Vibrioparahamolyticus, Salmonella enteritidis, Salmonella typhymurium và E.coli.Conclusion: Using the technique of multiplex-PCR with the general primer for detection of Listeriamonocytogenes, Vibrio cholerae, and Shigella spp. at the same time can apply in microbiological laboratory forsupervise and investigate the food born outbreak.Keywords: bacteria contaminated in food, multiplex-PCR.- Cặp mồi ñặc hiệu có kí hiệu: MLP-Sh1-MLPĐẶT VẤN ĐỀSh2 (phát hiện Shigella spp.); MLP-CTX2-MLPNhờ ñặc ñiểm là kỹ thuật mở, PCR ñang ñượcCTX3 (phát hiện Vibrio cholerae); MLP-List F1triển khai nghiên cứu và áp dụng ñể phát hiện cácMLP-List R1 (phát hiện Listeria monocytogenes);tác nhân vi sinh trong các mẫu thử tại nhiều phòngKY78 -KY80 (mồi khuyếch ñại chung).thử nghiệm vi sinh ở trong nước. Do khả năng phát- Mater Mix 2 X: 100 Mix: PCR buffer 10x:hiện cùng một lúc từ hai loại tác nhân vi sinh trở500µl;MgCl2 50 mM: 350- 450µl (khảo sát hailên nên multip ...