Xây dựng quy trình định lượng acid (E)-10-hydroxy-2-decenoic trong sữa ong chúa bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

Trong nghiên cứu này, mẫu nghiên cứu được lựa chọn là sữa ong chúa (SOC) – đây là thức ăn được sản sinh từ con ong thợ để nuôi ong chúa; và cũng là nguồn nguyên liệu quý trong sản xuất các dạng thực phẩm bổ sung do giá trị dinh dưỡng cao, và có tác dụng sinh học như kháng khuẩn, kháng viêm, điều hòa miễn dịch, chống oxy hóa, kháng ung thư, hạ huyết áp và tác dụng tương tự estrogen.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xây dựng quy trình định lượng acid (E)-10-hydroxy-2-decenoic trong sữa ong chúa bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 2 * 2019 XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ACID (E)-10-HYDROXY-2-DECENOIC TRONG SỮA ONG CHÚA BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO Nguyễn Minh Nguyệt*, Trương Văn Đạt*, Nguyễn Hữu Lạc Thủy* TÓMTẮT Mở đầu – Mục tiêu: Hiện nay, nhu cầu sử dụng các sản phẩm hỗ trợ sức khỏe có nguồn gốc thiên nhiên ngày càng phổ biến. Các sản phẩm dạng này với tên gọi là thực phẩm bổ sung, phần lớn có thành phần từ dược liệu, vitamin, khoáng chất, acid béo v.v... Trong nghiên cứu này, mẫu nghiên cứu được lựa chọn là sữa ong chúa (SOC) – đây là thức ăn được sản sinh từ con ong thợ để nuôi ong chúa; và cũng là nguồn nguyên liệu quí trong sản xuất các dạng thực phẩm bổ sung do giá trị dinh dưỡng cao, và có tác dụng sinh học như kháng khuẩn, kháng viêm, điều hòa miễn dịch, chống oxy hóa, kháng ung thư, hạ huyết áp và tác dụng tương tự estrogen. Để kiểm soát chất lượng của các nguồn SOC được cung cấp từ các trang trại nuôi ong và giúp nhà sản xuất trong công tác tiêu chuẩn hóa từ nguyên liệu đến sản phẩm, ứng dụng kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) với (E)-10-hydroxy-2-decenoic (10-HAD) là chất đối chiếu được lựa chọn làm phương pháp thử trong tiêu chuẩn kiểm nghiệm SOC và các sản phẩm từ SOC. Đối tượng – Phương pháp nghiên cứu: Đối tượng nghiên cứu: (E)-10-hydroxy-2-decenoic trong sữa ong chúa. Phương pháp nghiên cứu: khảo sát các điều kiện sắc ký để xây dựng và thẩm định quy trình định lượng (E)-10-hydroxy-2-decenoic bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao và sơ bộ đánh giá chất lượng một số mẫu sữa ong chúa thu thập. Kết quả: Các điều kiện sắc ký thích hợp để tách và định lượng (E)-10-hydroxy-2-decenoic trong sữa ong chúa: cột C8 Eurospher II (250 x 4,6 mm; 5 m); pha động là hỗn hợp methanol  acid phosphoric pH3 (55: 45), nhiệt độ cột 30 oC; tốc độ dòng 1 ml/phút; thể tích tiêm 10 µl; bước sóng 212 nm. Quy trình đã được thẩm định đạt tính phù hợp hệ thống; độ đặc hiệu; độ chính xác với RSD < 2%; độ đúng với tỷ lệ phục hồi trung bình 99,4%; khoảng tuyến tính rộng (5,0 – 160,0 µg/mL; ŷ = 58410x; R2 ≥ 0,9999). Hàm lượng (E)-10-hydroxy-2-decenoic trong mẫu thử là 0,95 ± 0,09%. Quy trình được ứng dụng để đánh giá chất lượng của 5 mẫu sữa ong chúa qua hàm lượng (E)-10- hydroxy-2-decenoic lần lượt là 0,56; 1,05; 0,95; 1,08 và 1,53% và mẫu sữa ong chúa đông khô (do nhóm nghiên cứu sản xuất) có hàm lượng là 0,93%. Kết luận: Quy trình định lượng (E)-10-hydroxy-2-decenoic bằng phương pháp HPLC-PDA đã được xây dựng và thẩm định đạt các yêu cầu thẩm định, là cơ sở khoa học để xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm sữa ong chúa và các sản phẩm từ sữa ong chúa. Từ khóa: sữa ong chúa, (E)-10-hydroxy-2-decenoic, sắc ký lỏng hiệu năng cao ABSTRACT QUANTITATIVE DETERMINATION OF (E)-10-HYDROXY-2-DECENOIC ACID IN ROYAL JELLY BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY Nguyen Minh Nguyet, Truong Van Đat, Nguyen Huu Lac Thuy * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol. 23 - No 2- 2019: 499 – 505 * Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: TS. Nguyễn Hữu Lạc Thủy ĐT: 091.551.7890 Email: nguyenhuulacthuy@ump.edu.vn 500 Chuyên Đề Dược Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 2 * 2019 Nghiên cứu Y học Background – Objectives: At present, the demand for natural health supplements becomes increasingly. These are called supplementary foods, most of which contain medicinal plants, vitamins, minerals, fatty acids, etc. In this study, Royal jelly (RJ) was selected as the test sample. RJ is the food produced by the worker bees for the nutrition of the queens. Royal jelly is also a precious material for production of supplementary foods due to high nutritional value and biological activities such as antibacterial, anti-inflammatory, immunomodulatory, antioxidant, anti-cancer, blood pressure lowering and estrogen-like effects. In order to control the quality of various RJ sources from bee farms and products, there of high performance liquid chromatography with (E)-10-hydroxy-2-decenoic as the reference compound was selected. Methods: the subject of the study was (E)-10-hydroxy-2-decenoic in RJ. Several chromatographic conditions was investigated to find out the suitable chromatographic parameters. Finally, the validated method was applied for assay of (E)-10-hydroxy-2-decenoic in several collected RJ samples. Results: The suitable chromatographic conditions for quantitation of (E)-10-hydroxy-2-decenoic acid were obtained using a stainless steel column (250 x 4.6 mm), packed with octadecylsilane bonded to porous silica (5 m); mixture of methanol and phosphoric acid pH3 (55 : 45) in isocratic mode as mobile phase; flow rate of 1 ml per minute, injection volume of 10 µl; column temperature at 30 oC and detection wavelength at 212 nm. This method was validated and showed system suitability, selectivity, accuracy with recovery in 99.4%; precision with RSD < 2%, wide linearity range (5.0 – 160.0 µg/mL; ŷ = 58410x; R2 ≥ 0.9999). The amount of (E)-10-hydroxy-2-decenoic in the test samples are 0.95 ± 0.09%. The validated method was applied for assay of (E)-10-hydroxy-2-decenoic in foru RJ samples that showed the content of 0.56; 1.05; 0.95; 1.08; và 1.53 (%), respectively and the one of 0.93% in phyolilized RJ sample. Conclusions: the HPLC-PDA method was successfully developed and validated for quantification of (E)-10-hydroxy-2-decenoic acid in RJ. Key words: Royal Jelly, (E)-10-hydroxy-2-decenoic acid, HPLC. ĐẶTV ...