Xây dựng quy trình khảo sát gen RB1 trong ung thư nguyên bào võng mạc (Retinoblastoma)

U nguyên bào võng mạc (UNBVM), một trong những loại ung thư thường gặp nhất ở trẻ nhỏ trong khoảng độ tuổi từ 1-5 tuổi. Tỷ lệ mắc phải trong khoảng từ 1/14000 đến 1/20000 trẻ em sinh ra trên toàn thế giới. Đột biến trên gen RB1 được cho là nguyên nhân quan trọng nhất dẫn đến UNBVM.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xây dựng quy trình khảo sát gen RB1 trong ung thư nguyên bào võng mạc (Retinoblastoma)Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 20 * Phụ bản của Số 1 * 2016 XÂY DỰNG QUY TRÌNH KHẢO SÁT GEN RB1 TRONG UNG THƯ NGUYÊN BÀO VÕNG MẠC (RETINOBLASTOMA) Nguyễn Thế Vinh*, Hoàng Anh Vũ*TÓM TẮT Mở đầu: U nguyên bào võng mạc (UNBVM), một trong những loại ung thư thường gặp nhất ở trẻ nhỏtrong khoảng độ tuổi từ 1-5 tuổi. Tỷ lệ mắc phải trong khoảng từ 1/14000 đến 1/20000 trẻ em sinh ra trên toànthế giới. Đột biến trên gen RB1 được cho là nguyên nhân quan trọng nhất dẫn đến UNBVM.Việc phát hiện sớmđột biến trên gen RB1 giúp phòng ngừa, chẩn đoán sớm và hạn chế hậu quả không chỉ UNBVM mà còn một sốung thư khác (có liên quan đến đột biến trên gen RB1)cho bệnh nhân cũng như thân nhân người bệnh. Mục tiêu: Xây dựng được quy trình ứng dụng kỹ thuật giải trình tự khảo sát đột biến trên gen RB1. Đối tượng và phương pháp: Sử dụng phương pháp khuếch đại chuỗi DNA (PCR) và giải trình tự Sangertoàn bộ các exon trong vùng mã hóa protein gen RB1 trên genomic DNA từ mẫu khối u và máu ngoại vi được lấytừ bệnh nhân UNBVM. Kết quả: Thiết kế thành công 19 cặp mồi và quy trình PCR khuếch đại 27 exon gen RB1. Phát hiện đột biếndòng mầm g.69681C>T (NG_009009) gen RB1. Kết luận: Nghiên cứu đã hoàn thiện quy trình và ứng dụng thành công kỹ thuật giải trình tự trong chẩnđoán đột biến gen RB1. Từ khóa: u nguyên bào võng mạc, genRB1, kỹ thuật giải trình tự.ABSTRACT DEVELOP A PROTOCOL FOR SCREENING RB1 MUTATIONS IN RETINOBLASTOMA PATIENTS. Nguyen The Vinh, Hoang Anh Vu * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 20 - Supplement of No 1 - 2016: 94 - 100 Background: Retinoblastoma is one of the most frequent cancer in children age 1-5. The incidence isbetween 1/14000 -1/20000 live births all over the world. The RB1 mutations aremajor cause lead toretinoblastoma. Early identifying mutations on RB1 gene is important for prevention, diagnosis and controllingthe outcomes of retinoblastoma and several other cancers (related to mutations on RB1 gene) as well for patientsand their family. Objective: Develop a sequencing protocol for RB1mutations screening. Method: Use PCR method and Sanger sequencing to all of exons of RB1 coding site of genomic DNAextracted from tumor tissue and blood of retinoblastoma patients. Results: Successfully designed 19 pairs of primer and PCR protocol that amplifies 27 exons of RB1.Identified a nonsense mutation g.69681C>T (NG_009009) of exon 12 of RB1. Conclusion: Our research has developed and applied successfully a sequencing protocol to identifymutations of RB1. Keywords: Retinoblastoma, RB1, sequencing. * Trung tâm Y sinh học Phân tử, Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: CN.Nguyễn Thế Vinh ĐT: 0935827668 email:vinhnguyen29391@gmail.com94 Chuyên Đề Tai Mũi Họng – MắtY Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 20 * Phụ bản của Số 1 * 2016 Nghiên cứu Y họcĐẶT VẤN ĐỀ RB1 đột biến mang tính trạng lặn do đó UNBVM thường phát sinh khi có đột biến gây bất hoạt cả U nguyên bào võng mạc xuất phát từ tế bào 2 alen của gen RB1(3, 6). Đột biến ở alen đầu tiêntiền thân của nhóm tế bào thụ quan ánh sáng thường là các đột biến sinh dưỡng, đột biến de-trong võng mạc mắt, thường xảy ra với tần suất novo trong trường hợp dạng ngẫu nhiên, hoặc1/14000 đến 1/20000 trẻ trong độ tuổi dưới 5 tuổi, đột biến dòng mầm trong trường hợp dạng giasau độ tuổi này bệnh hiếm khi được phát hiện(4). đình. Đột biến trên alen còn lại thường xảy ra ởBệnh xảy ra ở hai dạng: dạng ngẫu nhiên (không tế bào trên võng mạc(12).có tính di truyền từ gia đình) và dạng gia đình(có tính di truyền)(3). Dạng gia đình của UNBVM Việc sử dụng phương pháp giải trình tựxuất hiện ở những trẻ có cha mẹ đã từng mắc Sanger rất thích hợp cho nghiên cứu này vì phổbệnh này, bệnh nhân thường có nhiều ổ khối u ở đột biến rộng của gen RB1 và các đột biến đacả hai mắt, tần suất của dạng này khoảng 20%(10). phần là những đột biến nhỏ. Phát hiện đột biếnHơn thế nữa việc chữa trị khối u ở mắt với gen RB1 có ý nghĩa quan trọng đối với bệnhphương pháp xạ trị hoặc phẫu thuật, cũng nhân đang đượ ...