Xây dựng quy trình kỹ thuật phát hiện đột biến gen KCNJ5 trên bệnh nhân cường aldosteron nguyên phát do adenoma tuyến thượng thận

Cường aldosterone nguyên phát là bệnh lý hàng đầu gây ra tăng huyết áp thứ phát với nguyên nhân chủ yếu là do adenoma tuyến thượng thận sản xuất aldosterone (APA: aldosterone producing adenoma). Cơ chế phân tử của cường aldosterone nguyên phát được cho là có liên quan đến đột biến gen KCNJ5. Nghiên cứu này nhằm thiết lập và ứng dụng quy trình kỹ thuật giải trình tự chuỗi DNA nhằm xác định các đột biến của gen KCNJ5 trên quần thể bệnh nhân APA Việt Nam.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xây dựng quy trình kỹ thuật phát hiện đột biến gen KCNJ5 trên bệnh nhân cường aldosteron nguyên phát do adenoma tuyến thượng thận Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 21 * Số 2 * 2017 XÂY DỰNG QUY TRÌNH KỸ THUẬT PHÁT HIỆN ĐỘT BIẾN GEN KCNJ5 TRÊN BỆNH NHÂN CƯỜNG ALDOSTERON NGUYÊN PHÁT DO ADENOMA TUYẾN THƯỢNG THẬN Đỗ Đức Minh*, Trần Viết Thắng**, Mai Phương Thảo*** TÓM TẮT Mục tiêu: Cường aldosterone nguyên phát là bệnh lý hàng đầu gây ra tăng huyết áp thứ phát với nguyên nhân chủ yếu là do adenoma tuyến thượng thận sản xuất aldosterone (APA: aldosterone producing adenoma). Cơ chế phân tử của cường aldosterone nguyên phát được cho là có liên quan đến đột biến gen KCNJ5. Nghiên cứu này nhằm thiết lập và ứng dụng quy trình kỹ thuật giải trình tự chuỗi DNA nhằm xác định các đột biến của gen KCNJ5 trên quần thể bệnh nhân APA Việt Nam. Đối tượng và phương pháp: Chúng tôi thiết kế các cặp mồi đặc hiệu khuếch đại 2 exon 2, 3 và vùng tiếp giáp exon-intron của gen KCNJ5. DNA được tách chiết từ mô tươi bệnh phẩm u tuyến thượng thận của bệnh nhân được chẩn đoán APA. Các mẫu DNA này sau đó được khuếch đại và giải trình tự bằng kỹ thuật Sanger. Kết quả: Chúng tôi đã khuếch đại thành công được 2 exon 2, 3 và vùng tiếp giáp exon-intron của gen KCNJ5. Kết quả giải trình tự cho thấy đột biến L168R ở 2 trong số 3 bệnh nhân được chẩn đoán APA. Kết luận: Kỹ thuật giải trình tự DNA phát hiện được đột biến trên gen KCNJ5 từ đó giúp tăng cường hiểu biết về sinh lý bệnh của bệnh lý APA. Từ khóa: cường aldosteron nguyên phát, adenoma tuyến thượng thận, gen KCNJ5, đột biến gen, PCR, giải trình tự DNA ABSTRACT TECHNICAL PROTOCOL TO IDENTIFY KCNJ5 SOMATIC MUTATION IN ADRENAL ALDOSTERONE-PRODUCING ADENOMA Do Duc Minh, Tran Viet Thang, Mai Phuong Thao * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Supplement of Vol. 21 - No 2 - 2017: 84 - 89 Objectives: Primary hyperaldosteronism is the most common cause of secondary hypertension and usually the consequence of adrenal aldosterone-producing adenoma (APA). Recently, molecular mechanism of APA has been shown to be associated with mutation in KCNJ5 gene. We conduct this study to set up a DNA sequencing procedure to investigate the mutation of KCNJ5 gene in Vietnamese APA patients. Material - Methods: Primers for amplification of exon 2,3 and the exon-intron boundaries of KCNJ5 gene were designed. Genomic DNA was extracted from fresh adrenal tissue of APA patients. These DNA were respectively amplified and sequenced by Sanger technique. Results: The whole coding site and the exon-intron boundaries of KCNJ5 gene were successfully amplified. After sequencing, 2 out of 3 patients with APA carry L168R somatic mutation. Conclusion: DNA sequencing can detect somatic mutation in KCNJ5 gene. This information can cast more light in the pathophysiology of APA. *Trung tâm Y sinh học phân tử, **Bộ môn Nội tiết, ***Bộ môn Sinh lý học, Đại học Y Dược TP.HCM Tác giả liên lạc: TS.BS. Đỗ Đức Minh ĐT: 0932999989 Email: mdt14284@yahoo.com 84 Chuyên Đề Nội Khoa Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 21 * Số 2 * 2017 Nghiên cứu Y học Keywords: primary aldosteronism, adrenal adenoma, KCNJ5 gene, somatic mutation, PCR, DNA sequencing ĐẶT VẤN ĐỀ bệnh sinh của bệnh lý này mà còn rất cần Cường aldosterone nguyên phát là bệnh thiết cho việc đánh giá và tiên lượng bệnh vì lý hàng đầu gây ra tăng huyết áp thứ phát nhóm bệnh nhân có đột biến gen KCNJ5 có với tỷ lệ khoảng 6-10% trên tổng số bệnh khuynh hướng trẻ hơn, có nồng độ nhân tăng huyết áp và lên tới 20% ở nhóm aldosterone cao hơn và có cải thiện tim bệnh tăng huyết áp kháng trị(4, 7). Nguyên mạch tốt hơn sau điều trị phẫu thuật(6). nhân thường gặp của cường aldosterone là ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU do adenoma tuyến thượng thận sản xuất aldosterone (APA: adrenal aldosterone- Đối tượng nghiên cứu producing adenoma) hoặc tăng sản tuyến Chúng tôi tiến hành khảo sát đột biến thượng thận hai bên (bilateral adrenal gen KCNJ5 cho 3 bệnh nhân được chẩn đoán hyperplasia). Cơ chế phân tử của cường adenoma tuyến thượng thận sản xuất aldosterone nguyên phát vẫn chưa được aldosterone. Các bệnh nhân này đều có biểu hiểu biết rõ ràng và cho đến gần đây, một số hiện lâm sàng của tình trạng tăng huyết áp, nghiên cứu đã chỉ ra rằng đột biến gen hạ kali máu, có nồng độ aldosterone máu KCNJ5 có liên quan mật thiết với nhóm tăng cao và không bị ức ...