Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng diclofenac diethylamin bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

Nghiên cứu này được tiến hành với mục đích xây dựng quy trình định lượng diclofenac diethylamin (DDEA) bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) với đầu dò PDA. Nghiên cứu đã sử dụng quy trình trên để kiểm nghiệm 3 loại thuốc gel chứa diclofenac diethylamin đang lưu hành trên thị và kết quả cho thấy cả 3 mẫu thuốc đều có hàm lượng diclofenac diethylamin đạt theo quy định của Dược điển Việt Nam V.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng diclofenac diethylamin bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng caoTẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ, Trường Đại học Khoa học, ĐH Huế Tập 23, Số 2 (2023) XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG DICLOFENAC DIETHYLAMIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO Huỳnh Thị Như Quỳnh, Lê Trung Khoảng, Hoàng Thị Thu Huyền, Hoàng Thuý Bình, Trần Lưu Phúc, Huỳnh Văn Chung* Khoa Dược, Trường Đại học Y Dược Buôn Ma Thuột *Email: hvchung@bmtuvietnam.com Ngày nhận bài: 3/02/2023; ngày hoàn thành phản biện: 8/02/2023; ngày duyệt đăng: 4/12/2023 TÓM TẮT Nghiên cứu này được tiến hành với mục đích xây dựng quy trình định lượng diclofenac diethylamin (DDEA) bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) với đầu dò PDA. Quá trình phân tích được thực hiện trên cột sắc ký Reliant C18 5µm (4.6x250 mm), sử dụng pha động là hỗn hợp acid formic 0,1% : acetonitril (35 : 65, v/v) với tốc độ dòng là 1,0 ml/ phút và được phát hiện tại bước sóng 276 nm. Quy trình định lượng đã được thẩm định đáp ứng các yêu cầu của hội nghị quốc tế về hài hòa hóa các thủ tục đăng ký dược phẩm sử dụng cho con người (ICH) với khoảng tuyến tính 0,2-50 µg/ml, giới hạn phát hiện (LOD) 0,05 µg/ml, giới hạn định lượng (LOQ) 0,15 µg/ml. Phương pháp đạt được độ đúng với độ thu hồi nằm trong khoảng 99,19 – 102, 53 %, độ lặp lại cao với RSD là 0,170 % đối với diện tích peak và 0,279 % đối với thời gian lưu. Nghiên cứu đã sử dụng quy trình trên để kiểm nghiệm 3 loại thuốc gel chứa diclofenac diethylamin đang lưu hành trên thị và kết quả cho thấy cả 3 mẫu thuốc đều có hàm lượng diclofenac diethylamin đạt theo quy định của Dược điển Việt Nam V Từ khóa: diclofenac diethylamin, gel, sắc ký lỏng hiệu năng cao.1. MỞ ĐẦU Diclofenac diethylamin là một trong những thuốc giảm đau, hạ sốt, chống viêmkhông steroid. Diclofenac được sử dụng rộng rãi để điều trị viêm xương khớp, viêmcột sống, chấn thương cơ xương và giảm đau sau phẫu thuật ở người và thú y [1]. Tuynhiên việc sử dụng thuốc không steroid (NSAIDs) lâu dài bằng đường uống có thể bịhạn chế bởi tác dụng phụ như độc tính với dạ dày, gan, thận và có nguy cơ dẫn tới mộtsố bệnh tim mạch và biến chứng mạch máu não [2]. 1Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng diclofenac diethylamin bằng phương pháp sắc ký lỏng … So với thuốc dạng uống, dạng thuốc dùng ngoài da có một số ưu điểm: hiệuquả giảm đau tương đương nhưng ít gây tác dụng phụ trên dạ dày, cũng như các biếnchứng về tim mạch, gan, thận [3]. Thuốc dùng ngoài da được bào chế dưới nhiều dạngkhác nhau như dạng thuốc mỡ, kem, thuốc dán,… phổ biến nhất là các dạng thuốc mỡhoặc kem bôi da. Có hai dạng muối diclofenac thường được sử dụng bào chế các chếphẩm dưới dạng bôi ngoài da là: diclofenac natri và diclofenac diethylamin. Trong đó,diclofenac diethylamin là dạng muối được cho là hấp thu tốt hơn khi dùng ngoài da[4]. Sản phẩm chứa diclofenac diethylamin trên thị trường thường được bào chế dướidạng emulgel và gel. Hiện nay, Dược điển Việt Nam V chỉ có chuyên luận định lượngdiclofenac diethylamin bằng phương pháp chuẩn độ đo điện thế với đối tượng ápdụng là gel mà chưa có phương pháp HPLC [5]. Hơn thế nữa cũng chưa có nhiều côngbố về định lượng diclofenac diethylamin trong gel và emulgel bằng phương phápHPLC . Vì vậy mục tiêu của nghiên cứu này là xây dựng và thẩm định quy trình địnhlượng diclofenac dimethylamin bằng phương pháp HPLC nhằm cung cấp dữ liệu choviệc áp dụng quy trình phân tích này tại các cơ sở sản xuất dược phẩm trong nướccũng như góp phần phong phú phương pháp kiểm nghiệm dược phẩm để kiểm soátchất lượng sản phẩm được tốt hơn.2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU2.1. Đối tượng nghiên cứu Voltaren Emulgel của nhà sản xuất Novartis Consumer Health S.A – Thụy Sĩ,Diclofenac Stella Gel của Stellapharm – Việt Nam, D – Emulgel của Công ty dượcphẩm VCP – Việt Nam2.2. Hóa chất, dung môi Chất chuẩn diclofenac diethylamine (99,7% của Sigma-Aldrich), acetonitril(HPLC grade, Fisher), acid formic (LC/MS grade, Fisher), nước cất (Merk), ethanol(96% của Merk grade, Fisher), acid phosphoric (Merk).2.3. Thiết bị, dụng cụ Thiết bị được sử dụng là hệ thống HPLC Waters e2695 (Hoa kỳ) trang bị bộbơm cao cao áp và bộ tiêm mẫu tự động. Đầu dò PDA với khoảng bước sóng từ 190-1100 nm, cột sắc ký Reliant C18 5µm (4.6x250 mm).2.4. Phương pháp nghiên cứu Điều kiện sắc ký Qua tham khảo quy trình định lượng theo tài liệu [6-8]; chúng tôi cố định điềukiện sắc ký ban đầu như sau: cột sắc ký Reliant C18 5µm (4.6x250 mm), sử dụng dung 2TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ, Trường Đại học Khoa học, ĐH Huế Tập 23, Số 2 (2023)môi pha động là hỗn hợp dung môi (50:50, v/v) với tốc độ dòng là 1,0 ml/ phút và đượcphát hiện tại bước sóng 276 nm. Sau đó tiến hành khảo sát lần lượt từng yếu tố: loạidung môi H3PO4 0,1% : acetonitril: (50:50, v/v), H2O : acetonitril: (50:50, v/v), HCOOH0,1% : acetonitril: (50:50, v/v); tỷ lệ dung môi (20:80, 35:65, 50:50) và tốc độ dòng (0,6;1,0; 1,5 ml/phút). Chuẩn bị mẫu thử Hòa tan một lượng gel tương ứng 0,01 g DDEA trong 100 ml nước cất, sau đólấy 1 ml dung dịch trên pha vừa đủ với 10 ml ethanol 96% để thu được dung dịch cónồng độ DDEA 10 µg/ml. Chuẩn bị mẫu chuẩn Cân chính xác 0,01 g DDEA chuẩn trong 100 ml nước cất để thu được dungdịch để thu được dung dịch có nồng độ 100 µg/ml. Sau đó ti xác 0,01 g DDEA chuẩntrong 100 ml nước cất để thu được dung dịc ...