Ảnh hưởng ph đến hoạt tính xúc tác của enzyme lipasecandida rugosa và porcine pacreas

Bài viết này báo cáo kết quả nghiên cứu sự ảnh hưởng của pH đến hoạt tính xúc tác của 2 enzyme lipase (Candida rugosa và Porcine pancreas) trên cơ chất là dầu olive, xác định pH tối ưu của 2 enzyme, và độ bền pH của 2 loại enzyme này.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Ảnh hưởng ph đến hoạt tính xúc tác của enzyme lipasecandida rugosa và porcine pacreas HOẠT ĐỘNG NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐỊA PHƯƠNG >> HOẠT ĐỘNG NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐỊA PHƯƠNG - Enzyme lipase Candida rugosa (LCR), Type 2.3.2. Ảnh hưởng của pHVII ký hiệu L1754, do công ty Sigma-Aldrich * Thông số khảo sát:cung cấp. - Enzyme lipase Candida rugosa pH = 5.5 - 6.0 - - Enzyme lipase Porcine pacreas (LPP), Type 6.5 - 7.0 - 7.5 - 8.0, sử dụng đệm PhosphatII, ký hiệu L3126 do công ty Sigma-Aldrich cung - Enzyme lipase Porcine pancreas pH = 6.5 - 7.0cấp. - 7.5 - 8.0 - 8.5 - 9.0, sử dụng đệm Borat 2.1.2. Nguyên liệu và hóa chất khác * Thông số cố định: * Dầu olive: được nhập khẩu từ Italia, sản phẩm - Dung dịch đệm: 6 ml (đệm Phosphat pH 7.2được đóng chai tại Việt Nam bởi công ty TNHH đối với LCR, đệm Borat pH 7.7 đối với LPP)Dầu Thực vật Cái Lân, Hiệp Phước, Thành phố - Dung dịch enzyme: 1 ml (3.04 mg enzyme /mlHồ Chí Minh. Sản xuất theo công nghệ chiết xuất với LPP, 0.32 mg enzyme/ml đối với LCR)lạnh. - Nhũ tương dầu olive: 3 ml * Hóa chất khác - Thời gian phản ứng: 1 giờ - Gum Arabic, H3PO4 85%, NaOH, KOH, H2SO4, - Nhiệt độ: 37oCEtanol 99.5%, chất chỉ thị màu Phenoltalein, - Tốc độ khuấy: 250 rpmKH2PO4, Na2HPO4, AlCl3, CaCl2, MgCl2, và một Khi kết thúc phản ứng, để bất hoạt enzyme bổsố hóa chất khác (China). sung thêm 3ml etanol 99.5%. Sau đó nhỏ 3 giọt - Nước cất được sử dụng trong suốt quá trình phenoltalein 0.1% làm chất chỉ thị màu rồi chuẩnlàm thí nghiệm. độ bằng NaOH 0.1M. 2.2. Thiết bị Hoạt tính của enzyme được tính theo công thức - Máy đo pH - Bể điều nhiệt (1) ở mục 2.3.1. - Máy khuấy từ có gia nhiệt - Máy đồng hóa 2.3.3. Độ bền pH - Tủ lạnh - Tủ sấy Để khảo sát độ bền pH của 2 enzyme tiến hành Và một số thiết bị thông thường khác như sau: 2.3. Phương pháp nghiên cứu * Thông số thay đổi là: 2.3.1. Chuẩn bị nhũ tương dầu olive pH = 6.5 - 7.0 - 7.5 - 8.0 đối với LCR Thành phần gồm: 73 ml nước cất, 7 gam Gum pH = 7.5 - 8.0 - 8.5 - 9.0 đối với LPPArabic, 93 ml dầu olive. Đầu tiên trộn đều Gum * Thông số cố định:với nước cất sau đó cho dần dần dầu vào và thực - Dung dịch đệm: 6 mlhiện nhũ hóa 10 - 15 phút trong máy đồng hóa. - Dung dịch enzyme: 1 ml (3.04 mg enzyme/mlHỗn hợp sau đồng hóa được cho là đạt là khi để với LPP; 0.32 mg enzyme/ml đối với LCR)yên trong 1 thời gian không thấy hiện tượng bị - Nhũ tương dầu olive: 3 mlphân lớp. - Nhiệt độ: 37oC * Hoạt tính của enzyme (U/mg enzyme) được Với từng giá trị pH, đo hoạt tính của enzymetính theo công thức sau: sau 30phút - 1h - 2h - 3h - 4h - 5h xảy ra phản ứng. Khi kết thúc phản ứng, để bất hoạt enzyme bổ sung thêm 3ml etanol 99.5%. Sau đó nhỏ 3 giọt phenoltalein 0.1% làm chất chỉ thị màu và chuẩn độ bằng NaOH 0.1M. Trong đó: Hoạt tính của enzyme được tính theo công thức a: Lượng NaOH chuẩn độ ở mẫu có enzyme (ml) (1) ở mục 2.3.1. b: Lượng NaOH chuẩn độ ở mẫu trắng (ml) * Xác định thời gian bán hủy t1/2 m: Khối lượng enzyme (mg) Hệ số ức chế kd, và thời gian bán hủy t1/2 được Hoạt tính riêng của enzyme. Được xác định tính theo công thức sau (Bailey et al., 1986;thông qua hoạt tính tổng (U) và hàm lượng protein Bayramolu et al.,2003) [19]có trong mẫu thí nghiệm, tức là số đvht/mg protein [A] = [Ao]. (2)enzyme. k d: hệ số ức chế (1/phút)2 > ĐẶC SAN THÔNG TIN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ HOẠT ĐỘNG NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐỊA PHƯƠNG 0.05 thì sự khác biệt giữa các mẫu không có ýnghĩa về mặt thống kê.III. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1. Ảnh hưởng của pH đến hoạt tính hai Hình 2. Ảnh hưởng của pH đến hoạt tính LPP và LCRenzyme pH có ảnh hưởng khá lớn đến vận tốc phản ứng ứng 100% hoạt tính) khi tăng pH lên 8.0 hoạtcủa enzyme, mỗi enzyme hoạt động mạnh trong 1 tính LCR giảm đi chỉ còn một nửa (864 ...