Bài giảng Công nghệ sinh học đại cương: Chương 2 - ThS. Ninh Thị Thảo

Bài giảng "Công nghệ sinh học đại cương - Chương 2: Các kỹ thuật nền của CNSH hiện đại" cung cấp cho người học các kiến thức về chức năng và ứng dụng của các enzyme giới hạn bao gồm: Thành phần cấu tạo của DNA-các Bazơ, học thuyết trung tâm, phân loại các RE,... Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bài giảng Công nghệ sinh học đại cương: Chương 2 - ThS. Ninh Thị Thảo CHƯƠNG II: CÁC KỸTHUẬT NỀN CỦA CNSH HIỆN ĐẠI (9 TIẾT) Chức năng và ứng dụng của các enzyme giới hạn Giới thiệu các vector nhân dòng và kỹ thuật nhân dòng gen Các phương pháp lai phân tử Phương pháp PCR, ứng dụng Kỹ thuật xác định trình tự DNA Kỹ thuật tạo thư viện genome và cDNA8/26/2014 1 BM CNSH TV – Khoa CNSH Kiến thức ôn tập • Cấu trúc phân tử DNA8/26/2014 2Thành phần cấu tạo của DNA- các bazơ Purines Pyrimidines8/26/2014 3 ii). Structure Structure of theofDNA the DNA double chain polynucleotide helix 5’ 3’• polynucleotide chain•8/26/2014 3’,5’-phosphodiester bond 4 Nucleoside [structure of deoxyadenosine] Nucleotide8/26/2014 58/26/2014 6 Học thuyết trung tâm:The Central Dogma DNA  RNA  Protein  FunctionReplication Translation Work Transcription8/26/2014 7 Phân loại Gene intergenic region non-coding coding genes genesChromosome(simplified) Messenger RNA Structural RNA Proteins transfer ribosomal other RNA RNA RNA Structural proteins Enzymes 8/26/2014 8 2.1 ENZYME GIỚI HẠN (RESTRICTION ENZYME - RE) Khái niệm: là các enzyme có khả năng nhận dạng và cắt DNA ở những vị trí đặc hiệu. – Restriction enzymes = Restriction endonuclease Endo (bên trong), nuclease (cắt nucleic acid) – Trình tự nhận biết của RE được gọi là trình tự giới hạnVí dụ: trình tự nhận biết của EcoRI 8/26/2014 9 BM CNSH TV – Khoa CNSHLịch sử phát hiện • 1950s: một số dòng vi khuẩn có khả năng chống lại sự xâm nhiễm của một số bacteriophages. • 1962: phát hiện các vi khuẩn này có chứa hệ thống enzyme có khả năng nhận biết và phá huỷ DNA của phage, đồng thời có khả năng tự biến đổi DNA của bản thân để tránh bị phá huỷ • 1970: Haminton Smith at Johns Hopkins University, Phát hiện được enzyme HindII từ Haemophilus influenzae: có khả năng cắt đặc hiệu đồng thời tự methyl hoá DNA của tế bào chủ để tự bảo vệ. 8/26/2014 BM CNSH TV – Khoa CNSH 10 Restriction Endonucleases Why don’t bacteria destroy their own DNA with their restriction enzymes?8/26/2014 11 Methylation8/26/2014 12Phân loại các RE • Loại I: Cắt tại điểm cách vị trí giới hạn khoảng 1000-5000 nucleotide • Loại II: cắt ngay tại vị trí giới hạn. • Loại III: cắt ở vị trí cách vị trí giới hạn đó khoảng 20 nucleotide. 8/26/2014 BM CNSH TV – Khoa CNSH 13 Cách gọi tên Ví dụ: EcoRIGenus (Tên chi) EscherichiaSpecies (Tên loài) coliStrain (Chủng) RThứ tự tìm ra enzyme I(số La Mã) 8/26/2014 BM CNSH TV – Khoa CNSH 14 Đặc điểm của trình tự nhận biết của RE loại IITrình tự nhận biết là các Dont nodpalindrome. Đây là đoạn DNA Dogma: I am Godmạch kép, 2 mạch bổ sung có Never odd or even Too bad – I hid a boottrình tự giống nhau khi đọc theo Rats live on no evil starcùng chiều 5’3’ hoặc ngược lại No trace; not one carton Was it Eliots toilet I saw? Murder for a jar of red rum Some men interpret nine memos Campus Motto: Bottoms up, Mac Go deliver a dare, vile dog! Trục đối xứng ...