Bài thuyết trình: Các phương pháp phân tích vi sinh vật

Bài thuyết trình: Các phương pháp phân tích vi sinh vật trình bày phương pháp nuôi cấy, phương pháp trên cơ sở kỹ thuật sinh học phân tử, phương pháp trên cơ sở miễn dịch học. Mời các bạn cùng tham khảo tài liệu để nắm vững nội dung chi tiết. Hi vọng tài liệu sẽ giúp ích cho các bạn trong quá trình học học phần này.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bài thuyết trình: Các phương pháp phân tích vi sinh vật CAÙCPHÖÔNGPHAÙP PHAÂNTÍCHVISINH VAÄT1. Phöôngphaùpnuoâicaáy2. Phöôngphaùptreâncôsôûkyõthuaät sinhhoïcphaântöû3. Phöôngphaùptreâncôsôûmieãndòch hoïc PHAÂNTÍCHVSVBAÈNG PHÖÔNGPHAÙPNUOÂICAÁY• Phöông phaùp ñoå ñóa (pour plate)• Phöông phaùp caáy beà maët (spread)• Phöông phaùp MPN (most probable number)• Phöông phaùp nuoâi caáy kî khí PHÖÔNGPHAÙPÑOÅÑÓA• MuïcñíchsöûduïngtrongñònhlöôïngVSV• Kyõthuaät – Moâi tröôøng agar ñöôïc ñun chaûy vaø laøm nguoäi ñeán 45±1oC – Caáy tối ña 1ml dòch maãu hay dòch pha loaõng vaøo ñóa petri troáng voâ truøng (Þ 9 – 10cm) – Ñoå 10-15ml moâi tröôøng vaøo ñóa – Laéc ngöôïc vaø xuoâi chieàu kim ñoàng hoà – Ñaët ñóa leân maët phaúng ngang cho moâi tröôøng ñoâng ñaëc PHÖÔNGPHAÙPÑOÅÑÓA• Öuñieåm – Caáy ñöôïc theå tích maãu lôùn (1ml) – Xaùc ñònh ñöôïc caùc VSV caàn dinh döôõng tieáp xaùc töø nhieàu phía – Cho pheùp ñeám ñöôïc maät ñoä VSV cao, khoaûng 150 - 300 khuaån laïc Nhöôïcñieåm - Khoâng ñònh löôïng ñöôïc nhöõng VSV quaù nhaïy nhieät - Khoâng xaùc ñònh ñöôïc hình daïng khuaån PHÖÔNG PHAÙP CAÁY BEÀ MAËT• Moâitröôøngphaûiñöôïcchuaånbòtreân ñóatröôùc12ngaøyñeåkhoâmaët• Phöôngphaùp – Caáy 0,1 – 0,3ml vaøo ñóa moâi tröôøng (ñóa Þ 90mm) Caáy toái ña 1ml vaøo ñóa moâi tröôøng (ñóa Þ 140mm) – Traûi ñeàu maãu leân beà maët moâi tröôøng baèng que trang tam giaùc – Ñeå ôû nhieät ñoä phoøng 15-20 phuùt PHÖÔNG PHAÙP CAÁY BEÀ MAËT• Öuñieåm – Ñònh löôïng ñöôïc caùc VSV nhaïy nhieät – Coù theå nhaän daïng ñöïôc daïng khuaån laïc ñaëc tröng – Deã daøng laøm thuaàn chuûng VSV muïc tieâu Nhöôïcñieåm - Chæ caáy ñöïôc theå tích maãu nhoû (neáu duøng ñóa thoâng thöôøng Þ90- PHÖÔNG PHAÙP MPN (MOST PROBABLE NUMBER)• Khaùinieäm – Coøn goïi laø phöông phaùp pha loaõng tôùi haïn – Giaù trò keát quaû nhaän ñöôïc laø soá löôïng VSV muïc tieâu coù xaùc suaát cao nhaát theo nguyeân taéc thoáng keâ – Giaù trò MPN laø giaù trò coù xaùc xuaát cao nhaát• HeäthoángMPN – Goàm 3 hoaëc 5 laàn laëp laïi ôû moãi noàng ñoä – Laëp laïi ôû 3 noàng ñoä pha loaõng lieân tieáp – Choïn caùc ñoä pha loaõng sao cho trong heä PHÖÔNG PHAÙP MPNChiatheosoálöôïngoángtrongheäthoáng - Heäthoáng9oáng: moãi ñoä pha loaõng laëp laïi 3 laàn - Heäthoáng15oáng: moãi ñoä pha loaõng laëp laïi 5 laànNguyeântaéc - Döïa treân keát quaû ñònh tính VSV muïc tieâu ôû caùc laàn laëp laïi treân cuøng moät ñoä pha loaõng vaø ôû caùc ñoä pha loaõng khaùc nhau - Vi sinh vaät muïc tieâu phaûi coù nhöõng bieåu hieän ñaëc tröng treân moâi tröôøng nuoâi caáy loûng nhö Söïtaïohôi: Coliforms, E. coli … HEÄ THOÁNG MPN• Heäthoáng9oáng Heä thoáng 15 oáng 10mlmoâi tröôøngnoàng ñoäthöôøng (ñôn)HEÄ THOÁNG MPN 10mlmoâi tröôøngnoàng ñoäñoâi 10mlmoâitröôøng noàngñoäñôn (thöôøng) ÑÒNHLÖÔÏNGF.COLIFORMBAÈNGPP MPN 1ml 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5101 1ml 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5102 10mlLSB 1ml 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5103ÑÒNHLÖÔÏNGF.COLIFORMBAÈNGPPMPN(tt) 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.1 1.2 1.5 2.2 2.3 Endo/EMB10mlEC 2.2 3.3 1.1 1.2 2,0,04,5 Indol MPN/g Keát quaû 2,0,0  = 4,5 CoângthöùctínhchæsoáMPN gjMPN / g t jmj (t j gj) mj• Trongñoù: – ∑ gj : soá löôïng oáng döông tính trong daõy daõ choïn – ∑ tjmj :Khoái löôïng maãu trong daõy ñaõ choïn – ∑ (tj-gj)mj Khoái löôïng maãu trong taát caû caùc maãu aâm tính. GIỚIHẠNTINCẬYTrongñoù: ∑ gj : soá löôïng oáng döông tính trong daõy daõ choïn ∑ tjmj :Khoái löôïng maãu trong daõy ñaõ choïn ∑ (tj-gj)mj Khoái löôïng maãu trong taát caû caùc maãu aâm tính. CHÆ SOÁ MPN CÔ BAÛN• LaøchæsoátrañöôïctöøbaûngkeátquaûMPN c o ù s o á lö ô ïn g m a ã u t r o n g t ừn g d a õ y la ë p la ïin h ö s a u :• D a õ y 1 : 1 g h o a ë c 1 m lm a ã u• D a õ y 2 : 0 , 1 g h o a ë c 0 , 1 m l• D a õ y 3 0 , 0 1 g h o ...