Bài thuyết trình Các phương pháp sắc kí cột

Sự tinh sạch của protein rất quantrọng vì từ protein tinh sạch chúng tacó thể xác định được trình tự acidamin, mối liên hệ về tiến hóa giữa cácprotein trong những cá thể khác nhauvà khảo sát các chức năng sinh hóa củacác protein đó. Để tinh sạch protein, người ta thườngdựa vào các đặc điểm tương đồng và cáctính chất khác nhau vốn có của nó.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bài thuyết trình Các phương pháp sắc kí cộtTS:NgôĐạiNghiệpLớp:SHO7B1Nhóm4 MSSVNguyễnĐinhDiễmThụy 30700514HuỳnhThịLệPhươngSựtinhsạchcủaproteinrấtquan trọngvìtừproteintinhsạchchúngta cóthểxácđịnhđượctrìnhtựacid amin,mốiliênhệvềtiếnhóagiữacác proteintrongnhữngcáthểkhácnhau vàkhảosátcácchứcnăngsinhhóacủa cácproteinđó.Đểtinhsạchprotein,ngườitathường dựavàocácđặcđiểmtươngđồngvàcác tínhchấtkhácnhauvốncócủanó.Trongmộtsốtrườnghợp,đểdễdàng hơnchoviệctinhsạch,ngườitagắnTủaproteinThẩmtíchSiêulọcSắcký(Sắckýgiấy,sắckýcột,Sắc kýlỏng–khí,Sắclýáilựcmiễndịch, Sắckýáilực,Sắckýtraođổiion, Sắckýcaoáplỏng…)Điệndiprotein(điệnđitrêngel Agarose,điệnditrêngel Polyacrylamide,điệndiproteintheo điểmđẳngđiện…)PhươngpháptốtnhấtđểphânđoạnSắc ký (Chromatography) là một phương pháp phân tách quan trọng nhất trong sinh học phân tử vì nó thích hợp với nhiều loại hợp chất và sản phẩm tinh sạch có thể được sử dụng ngay cho việc định lượng và định danh.Sắckýcộtlàphươngphápmà chấtnhồi(làphatĩnh:hấpphụ, traođổiion,phânbốgen)được nhồivàocột,dùngđểphânchia cácchấttronghỗnhợpvàtinh chếcácchất.Thôngthường,người tahoàtanhỗnhợpchấtnghiên cứuvàomộtdungmôi(phađộng) vớilượngvừađủ,rồinạplên cộttheocáchphùhợpsaocho chấtnghiêncứulanthànhmộtlớpPhươngphápsắckýdựavào sựphânbốkhácnhaucủacác chấtgiữahaiphađộngvàtĩnh. Cónhiềunguyênnhânđưađếnsự phânbốkhácnhaucủacácchất, nhưngchínhsựlặpđilặplại hiệntượnghấpphụphảnhấp phụcủacácchấtkhidòngpha độngchuyểnđộngquaphatĩnhlà nguyênnhânchủyếucủaviệc táchsắcký.K=Cs/Cm=Nồngđộcủahợpchấttrong phatĩnh/Nồngđộcủahợpchấttrong phađộng.Dụngcụ:Cộtsắckí(giốngnhưcáiburet), gồm1ốngthủytinhvà1cáikhóa, nhưngkhôngcầnvạchchiađộ,kích thướclớnhoặcnhỏtùyyêucầusử dụngChấtnhồicột(phatĩnh,stationary phase,thườngdùngsilicagel,)Chất nhồicộtquyếtđịnhquátrìnhsắckí.Dungmôi:thôngthườngchọndungmôi phụthuộcvàochấtnhồicột. Thựchiện:Bước1lànhồicột:Saukhiđãchọn cột,làmkhôvàcânsilicagelcần dùng,phadungmôichạyhệrồithìhòa tansilicagelvàodungmôiđó.Bước2nạpmẫuchấtvào:Có2loại nạpmẫulànạpmẫukhôvànạpmẫuướt.Bước3:saukhihoàntấtviệcnạp mẫurồithìlót1miếngbônggònởbên trênmẫuchấtđểổnđịnhhệrồitiếp tụcchâmdungmôivào,từtừthayđổi độphâncựccủahệ,Bước4mởkhóa: lúcnàycộtbắtđầutáchchất,hứng lượngdungmôichảyra,mỗilầnhứng khoảng1/5hũ.Sauđóđemchấmbảncáchủ bi,nhữnghủcóvệttươngtựnhausẽđược gomlại,đólà1chất.TiếptụcnhưvậyĐâylàphươngphápsắckýđơn giảnnhất.vídụ,haichấtAvà Bliêntụcchảyquacộtcónạp sẵncáccácchấthấpphụ.Người taxácđịnhnồngđộcáccấutử trongdungdịchchảyrakhỏicột vàxâydựngđồthịtheohệtoạ độ:nồngđộcấutửthểtích dungdịchchảyquacột.đồthị nàythườnggọilàsắckýđồhay đườngcongthoát(cótácgiảTrongphươngpháprửagiải,đầu tiênngườitachoVmldungdịch chứahỗnhợpcáccấutử(vídụ,hỗn hợphaicấutửAvàB,trongđóA cóáilựcvớicộtnhỏhơnB)chạy quacột.CáccấutửA,Bchứatrong Vmltrướchếtsẽbịgiữlạiởphần trêncủacột.Sauđóchodungdịch rửa(thườnglàdungmôihoàtancác cấutử)chảyquacột.Lúcđócác cấutửbịgiữởphầntrêncủacộtTrongphươngpháprửađẩy, saukhiđưamẫuvàocột,tacho chảyquacộtmộtdungdịchrửa chứachấtcóáilựcvớiphatĩnh lớnhơncáccấutửcầntách. Cáccấutửcầntáchsẽbịchuyển dầnxuốngphíadướikhitatiến hànhquátrìnhrửacộtvàtuần tựthoátrakhỏicột.Cấutử thoátrakhỏicộtđầutiênlà cấutửtươngtácvớiphatĩnhV. PHÂN LOẠI CÁCPHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ:Phatĩnh:cóthểlàchất rắnhoặcchấtlỏng.Phatĩnhlàchấtrắn: thườnglàaluminhoặcsilica gelđãđượcxửlý,nócó thểnạpnénvàotrongmột cộtPhatĩnhlàchấtlỏng:có thểlàmộtchấtlỏngđược tẩmlênbềmặtmộtchấtmangPhađộng:cóthểlàchất lỏnghoặcchấtkhí.Phađộnglàchấtkhí:thí dụtrongkỹthậtsắckýkhí. Trongtrườnghợpnàychất khíđượcgọilàkhímanghay khívecto.Phađộnglàchấtlỏng:thí dụtrongkỹthuậtsắcký giấy,sắckýlớpmỏng,sắc kýcột.TrongtrườnghợpnàySắckýphânchia(Partition chromatography)Phađộnglàchấtlỏnghoặcchấtkhí (trongsắckýkhí).Phatĩnhlàchấtlỏng,lớpchấtlỏng vớichiềudàyrấtmỏng,chấtlòng nàyđượcnốihóahọclênbềmặtcủa nhữnghạtrắn,nhuyễnmịnvàcótínhSắckýhấpthu(Adsorption chromatography)PhađộnglàchấtlỏnghoặcchấtkhíPhatĩnhlàchấtrắn:đólànhững hạtrắnnhuyễnmịn,cótínhtrơ, đượcnhồitrongmộtcáiống.bản thânhạtrắnlàphatĩnh,phatĩnh thườngsửdụnglànhữnghạtsilica gelhoặcalumin. ...