Báo cáo bài Seminar: Chất kích kháng ở thực vật

Báo cáo bài Seminar với chủ đề "Chất kích kháng ở thực vật" trình bày các nội dung sau: khái niệm, các vấn đề kỹ thuật cơ bản cần biết của real-time PCR, máy PCR, tín hiệu huỳnh quang trong PCR, đọc kết quả real time PCR, ứng dụng trong chuẩn đoán và nghiên cứu.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Báo cáo bài Seminar: Chất kích kháng ở thực vật TỔNGLIÊNĐOÀNLAOĐỘNGVIỆTNAM TRƯỜNGĐẠIHỌCTÔNĐỨCTHẮNG KHOAKHOAHỌCVÀỨNGDỤNG  BÁOCÁOBÀISEMINAR CHỦĐỀ:CHẤTKÍCHKHÁNGỞTHỰCVẬTNhómsinhviênthựchiện: NguyễnMinhTuấn 61203172 LêThànhThiện 61203137 Khoá :2012 Giảngviênhướngdẫn:TSTRẦNTHỊDUNG1 Tp.HồChíMinh,tháng9năm2014 MỤCLỤC2 REALTIMEPCR I. KHÁINIỆM TrongkỹthuậtPCR,saukhihoàntấtkhuếchđạiđoạnDNAđích,ngườilàm thínghiệmphảitiếptụclàmmột số bước thínghiệmđểđọckếtquả xác địnhcósảnphẩmkhuếchđại mong muốn trong ống phản ứnghaykhông,vàgiaiđoạnnày gọilàgiaiđoạnthínghiệmsauPCR.Trong giaiđoạnnày,ngườilàmthínghiệmcóthể thựchiệnđiệndisảnphẩmPCRtrêngelagaroseđể xem có vạch sản phẩmkhuếch đạiđúngkíchthước mongmuốnhaykhông,cũngcó thể thực hiện thí nghiệm lai với các đoạn dò đặc hiệu (trênmàng,trêngiếnghayphiếnnhựa...)để xem sản phẩm khuếchđạicótrìnhtự mongmuốnhaykhông.Kỹ thuậtPCRmàcầnphảicó giaiđoạnthínghiệmđểđọcvàphântíchsaukhihoàntấtphảnứngkhuếchđại, ngàyhômnayđượcgọilàPCRcổđiển(classicalPCR). RealtimePCRlàkỹthuậtPCRmàkếtquảkhuếchđạiDNAđíchhiểnthịđược ngaysaumỗichukỳnhiệtcủaphảnứng,chínhvìvậynênđượcgọilàrealtime; vàdođặcđiểmnàynênvớirealtimePCRngườilàmthínghiệmkhôngcầnthiết phảilàmtiếpcácthínghiệmđể đọcvàphântíchkếtquả để xácđịnhcósản phẩmkhuếchđạiđíchhaykhôngvìkếtquả cuốicùngcủaphản ứngkhuếch đạicũngđượchiểnthị ngaysaukhihoàntấtphản ứngkhuếchđại.Như vậy, nêncóthểnóirealtimePCRlàkỹthuậtnhânbảnDNAđíchtrongốngnghiệm thànhhàngtỷbảnsaodựavàocácchukỳnhiệtvàkếtquảkhuếchđạitrongống phảnứngđượchiểnthịcùnglúcvớiphảnứngkhuếchđạixảyrađểngườilàm thínghiệmcóthểthấyđược.3II. CÁCVẤNĐỀKỸTHUẬTCƠBẢNCẦNBIẾTCỦAREALTIME PCR. 1. BiểuđồkhuếchđạicủarealtimePCR. TrongrealtimePCR,hiểnthị cơbảnđể ngườilàmthínghiệmcóthể quan sátđượctrongquátrìnhnhânbảnDNAcủacác ốngphản ứnglàmộtbiểuđồkhuếchđại(amplificationgraph).Biểuđồ nàycótrụctung(Y)làcườngđộ huỳnhquangphátratừcácốngphảnứngkhinhậnánhsángkíchthích,còntrụchoành(X)làcácchukỳnhiệt.Trênbiểuđồkhuếchđạinày(biểuđồ1),ngườilàmthínghiệmsẽthấyđốivớitừngốngphảnứng,cườngđộhuỳnhquangmàmáyghinhậnđượctrongnhữngchukỳđầusẽrấtthấpvàhầunhưkhôngthayđổi,hiểnthị bằngmột đườngthẳngnằmngang,chúngtacóthể gọiđâylà“giaiđoạn ủ”hay“giaiđoạn tiềmphục”,vìtronggiaiđoạnnàydùDNAđíchđãcóthểđượcnhânbảnthànhcác bảnsaonhưngdosốlượngchưađủđểgiúpchochấtpháthuỳnhquangnhậnđượcánhsángkíchthíchphátraánhsánghuỳnhquangđủ cườngđộ để máyghinhận.NhưngmộtkhisốlượngbảnsaocủaDNAđíchđạtđếnmộtngưỡngnhấtđịnhthìánhsánghuỳnhquangphátrasẽ đủ cườngđộ để đượcmáyghinhậnvàlúcnàychúngtasẽ thấyđườngbiểudiễnkhuếchđạibắtđầungóclên.Cườngđộ huỳnhquangtrongốngphảnứngtừlúcnàytrởđisẽtănggấpđôisaumỗichukỳnhiệtdo số lượngbảnsaocủaDNAđíchtănggấpđôisaumỗichukỳ.Chúngtagọigiai đoạnnàylà“giaiđoạnlũythừa”vềcườngđộhuỳnhquang,khôngphảilàgiaiđoạn tăngtrưởnglũythừavềsốlượngbảnsaocủaDNAđích.Cườngđộ huỳnhquangtrong ốngphản ứngsẽ tăngtrưởngđếnmộtmứcnàođóthìđộ tăngtrưởngsẽchậmdầnvàđạtđếnbìnhnguyênvìcácbảnsaocủaDNAđích,dophản ứngđã cạndầndNTPvàenzymeTaqpolymerasekhônghoạtđộnghiệuquả nữa,nênsẽkhôngcòngiatăngsốlượngtheocấpsố2nữa.Chúngtagọigiaiđoạnnàylà“giai đoạnbìnhnguyên”. Phântíchmộtđườngbiểudiễnkhuếchđại(amplificationcurve)củamột ốngphảnứngsaukhihoàntấtđượccácchukỳ nhiệt,chúngtasẽ thấymộtthôngsốhếtsứcquantrọngluônđikèmvớinó,đólàchukỳngưỡng(Ct,thresholdcycle). ChukỳngưỡnghayCtlàchukỳnhiệtmàởtạithờiđiểmnàythiếtbịrealtimeghi nhậnđượctínhiệuhuỳnhquangphátratừốngphảnứngbắtđầuvượtquacường độhuỳnhquangnền.Đểcóthểxácđịnhđượccườngđộ ...