BÁO CÁO KHOA HỌC : ẢNH HƯỞNG CỦA TẦN SUÂT SIÊU ÂM ĐẾN KẾT QUẢ THU TẾ BÀO TRỨNG TỪ BÒ SỐNG ĐỂ TẠO PHÔI IN VITRO

Sản xuất phôi in vitro bằng nguồn tế bào trứng khai thác từ bò sống là một trong nhữngphương pháp mới nâng cao hiệu quả công nghệ phôi. Phương pháp siêu âm thu tế bào trứngcho phép thu được những tế bào trứng chưa thành thục từ những gia súc cái đã được biết rõnguồn gốc. Khi siêu âm thu tế bào trứng lặp lại kết hợp với việc cải tiến kỹ thuật tạo phôiin vitro có thể khai thác nhiều lần để tận dụng tối đa tiềm năng sinh sản của con cái, đặc biệtlà những con có giá...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
BÁO CÁO KHOA HỌC : ẢNH HƯỞNG CỦA TẦN SUÂT SIÊU ÂM ĐẾN KẾT QUẢ THU TẾ BÀO TRỨNG TỪ BÒ SỐNG ĐỂ TẠO PHÔI IN VITRO PHAN LÊ SƠN – Ảnh hưởng của tần suất siêu âm ...ẢNH HƯỞNG CỦA TẦN SUÂT SIÊU ÂM ĐẾN KẾT QUẢ THU TẾ BÀO TRỨNG TỪ BÒ SỐNG ĐỂ TẠO PHÔI IN VITRO (Kết quả bước đầu thực hiện năm 2006 ) Phan Lê Sơn1*, Nguyễn Văn Lý2, Nguyễn Thị Thoa2, Nguyễn Khánh Vân2 Vũ Ngọc Hiệu1 và Lưu Thị Ngọc Anh2 1 Bộ môn Sinh lý Sinh hóa và Tập tính vật nuôi 2 Phòng Thí nghiệm trọng điểm Tế bào động vật *Tác giả liên hệ: Phan Lê Sơn - Bộ môn Sinh lý Sinh hóa và Tập tính vật nuôi Viện Chăn nuôi - Thụy Phương - Từ Liêm - Hà Nội Tel: (04) 38.385.940 /0914.551.149; Email: sonphanle@yahoo.com ABSTRACT Effect of ovum pick up frequence on oocyte number and embryo production Phan Le Son*, Nguyen Van Ly, Nguyen Thi Thoa, Nguyen Khanh Van, Vu Ngoc Hieu and Lưu Thi Ngoc AnhOne experiment aiming at examining the possible effect of two frequences of ovum pick up (one times vs twotimes/weeks) on oocyte number and embryo production was under taken. Ovum pick up was conducted usingnon surgical method with the ultra sound equipment. It was found that , there was no significant dif ferentes innumber of oocytes obtained between two frequences (5.1 vs 5.28). However, there was a significant differentesin number of embryos at morular and/on blastocyst stages between two frequences of ovum pick up (38.83% vs42.48%).Key words: Ovum pick-up, oocyte number, embryo production , TTON ĐẶT VẤN ĐỀSản xuất phôi in vitro b ằng nguồn tế bào trứng khai thác từ bò sống là một trong nhữngp hương pháp mới nâng cao hiệu quả công nghệ phôi. Phương pháp siêu âm thu tế bào trứngcho phép thu được những tế bào trứng chưa t hành thục từ những gia súc cái đã được biết rõngu ồn gốc. Khi siêu âm thu tế b ào trứng lặp lại kết hợp với việc cải tiến kỹ thuật tạo phôiin vitro có thể khai thác nhiều lần để tận dụng tối đa tiềm năng sinh sản của con cái, đặc biệtlà những con có giá trị di truyền cao.P hương pháp siêu âm hút tế b ào tr ứng tr ên bò sống và tạo phôi in vitro lần đầu tiên đượcn ghiên cứu tại Viện Chăn nuôi từ năm 2005. Đây l à phương pháp tiên tiến, đ òi hỏi thiết bịsiêu âm đ ắt tiền và trình đ ộ cao của người thao tác. Kết q u ả thu tế bào tr ứng và chất lư ợngt ế b ào trứng thu đ ược phụ thuộc vào nhiều yếu tố. Để nâng cao hiệu quả kỹ thuật si êu âmt hu t ế b ào tr ứng và tạo phôi in vitro , chúng tôi đã tiến hành đ ề tài: Nghiên cứu ảnh hư ởngcủa khoảng cách siêu âm đ ến kết quả thu tế bào trứng từ b ò sống để tạo phôi in vitro .Nhằm xác đ ịnh khoảng cách siêu âm hút tế b ào tr ứng cho số lượng và chất lượng tế b àot rứng là tốt nhất. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUVật liệu nghiên cứuGồm 5 bò lai hướng sữa (F2, n=2; F3, n = 3) , có năng su ất sữa trên 5000 lít/chu k ỳ, thể trọng> 400kg. Những bò này được cho ăn 40kg cỏ tươi và 4kg thức ăn tinh/ngày và được nuôi nhốttại Trạm nghiên cứu thử nghiệm thức ăn chăn nuôi - Viện Chăn nuôi.Tinh cọng rạ HF nhập từ Mỹ có hoạt lực trên 40%, có năng suất sữa trên 10.000 lít/chu kỳ.Loại tinh này đ ã đ ược kiểm tra năng suất qua đời sau. Bò nhận phôi là bò Lai Sind và bò lai 53 VIỆN CHĂN NUÔI - Tạp chí Khoa học Công nghệ Chăn nuôi - Số 21-Tháng 12-2009hướng sữa (F2, F3) có thể trọng >250kg, có chu kỳ sinh lý sinh sản b ình thường và khôngmắc các bệnh về đường sinh dục.Nội dung nghiên cứuXác định ảnh hưởng của tần suất siêu âm đ ến số lượng tế b ào trứng thu đ ượcXác định ảnh hưởng của tần suất siêu âm đ ến kết quả tạo phôi in vitro.Phương pháp nghiên cứuNhững con b ò tốt đ ã được chọn lựa về mặt di truyền sẽ đ ược sử dụng máy siêu âm ho ặc khámqua trực tràng để xác định khả năng cho tế bào trứng, từ đó tiến hành thu tế bào trứng. Hút tếb ào trứng đ ược thực hiện mỗi tuần một lần và 2 lần.Quá trình hút tế bào trứng đư ợc tiến hành như sau:Cho bò vào giá cố định, lấy hết phân ra, rửa sạch, sát khu ẩn âm hộ và khu vực xung quanh.Chuẩn bị hệ thống máy siêu âm, nối đầu dò âm đ ạo vào máy siêu âm. Nối kim hút tế b àotrứng (kim 16G dài 55 cm), đ ặt máy tạo áp suất ở 120 mmHg, tương đương tốc độ dòng chảy25 ml/phút. Chuẩn bị môi trường hút tế bào trứng (mDPBS của Sigma) có bổ sung 50 iu/mlheparin và 5% huyết thanh bê và kháng sinh (100.000 UI penicilin/ml + 100mgstreptomycin/ml) duy trì ở nhiệt độ 370C bằng máy ổn nhiệt.Nhẹ nhàng cho đầu dò siêu âm có gắn hệ thống dẫn kim vào âm đạo, cho tay q ua trực tràngxác định vị trí của buồng trứng, vị trí các nang trứng rồi đ ưa buồng trứng về phía đầu quét củađ ầu dò, quan sát các nang trứng trên màn hình máy siêu âm, đếm số nang trứng có mặt trênbuồng trứng, Trước khi hút dịch nang trứng, hút một ít môi trường hút trứng để làm trơn hệthống kim và ống dẫn. Sau khi chọc hút 2 - 4 nang trứng, rút kim ra, hút dung dịch thu tế b àotrứng để tế b ào trứng chảy vào ống falcon, tiến hành hút lặp lại đến khi không còn nhìn thấynang trứng nào trên buồng trứng thì chuyển qua buồng trứng đối diện. Dịch hút được thu vàoố ng ly tâm 50ml và duy trì ở nhiệt độ 370C b ằng máy ổn nhiệt.Sau khi hút xong một buồng trứng, đưa ngay về phòng thí nghiệm, lọc bằng cốc lọc Emcon cóđ ường kính lỗ lọc 20m, 10ml dung dịch còn lại đ ược chuyển vào đĩa pet ...