Bảo quản lạnh tế bào trứng bò giai đoạn túi mầm bằng phương pháp thủy tinh hóa trong cọng rạ và vi giọt

Nghiên cứu này được tiến hành nhằm đánh giá khả năng nuôi chín in vitro và tạo phôi bằng kĩ thuật thụ tinh trong ống nghiệm (TTTON) từ nguồn TBT GV sau khi bảo lạnh bằng phương pháp thủy tinh hóa trong cọng rạ và vi giọt.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bảo quản lạnh tế bào trứng bò giai đoạn túi mầm bằng phương pháp thủy tinh hóa trong cọng rạ và vi giọtTẠP CHÍ SINH HỌC 2014, 36(1se): 195-202BẢO QUẢN LẠNH TẾ BÀO TRỨNG BÒ GIAI ĐOẠN TÚI MẦMBẰNG PHƯƠNG PHÁP THỦY TINH HÓA TRONG CỌNG RẠ VÀ VI GIỌTNguyễn Thị Thương Huyền1, 2, Lâm Sơn Bích Trâm3, Nguyễn Quốc Đạt4,Hoàng Nghĩa Sơn5, Phan Kim Ngọc11Đại học Khoa học tự nhiên tp. Hồ Chí Minh, *thuonghuyen78@yahoo.com2Trường Đại học Sư phạm tp. Hồ Chí Minh3Bệnh viện Phụ sản Hùng Vương tp. Hồ Chí Minh4Viện Chăn nuôi Quốc gia5Viện Sinh học nhiệt đới, Viện Hàn lâm KH & CN Việt NamTÓM TẮT: Đề tài tiến hành nhằm đánh giá việc nuôi chín in vitro và tạo phôi bằng kĩ thuật thụ tinh trongống nghiệm (TTTON) từ nguồn tế bào trứng (TBT) bò giai đoạn túi mầm (GV) sau khi được bảo quản lạnhbằng phương pháp thủy tinh hóa trong cọng rạ và trong vi giọt. Chọn các TBT có từ 3 lớp cumulus trở lên vàđồng nhất về tế bào chất đem bảo quản lạnh qua 2 bước: TBT được cân bằng trong dung dịch cân bằng 45giây, chuyển qua dung dịch thủy tinh hóa 25 giây, sau cùng nạp các TBT vào cọng rạ hoặc tạo các vi giọt,chuyển các cọng rạ và vi giọt chứa TBT vào bình nitơ lỏng trong vòng 30 giây. Giải đông TBT qua 3 bước:môi trường rã đông thứ nhất trong 1,5 phút, môi trường rã đông thứ hai khoảng 1,5 phút và môi trường rãđông thứ ba trong 5 phút. Quá trình giải đông tiến hành ở 25-28oC. Ðánh giá tỷ lệ sống chết theo quan sáthình thái, sau đó một số được đánh giá theo phương pháp nhuộm AO/PI, số còn lại được nuôi chín in vitrotrong môi trường 1 và 2 ở 38,5oC, 5% CO2 trong 20-24 giờ. Chọn các TBT chín đem TTTON. Kết quả xéttheo thứ tự từ nguồn cọng rạ và vi giọt lần lượt như sau: tỷ lệ sống theo hình thái đạt 68,52±1,19% và73,53±1,17% (p0,05), tỷ lệ chín đạt 20,79±1,38% và 12,79±1,13% (p0,05). Sốlượng TBT bị thất thoát trong quá trình thu hồikhông đáng kể (3-4%). Hiện nay, các nghiêncứu trên thế giới đều thu hồi TBT sau giải đôngđạt 95-100%. Như vậy, kết quả thu hồi TBT saugiải đông trong nghiên cứu của chúng tôi đạtkhá cao.Bảng 1. Kết quả đông lạnh tế bào trứng giai đoạn túi mầmTỷ lệ TBT thu hồiTỷ lệ TBT(%)sống/đông lạnh (%)96,01±0,5068,52±1,19*Cọng rạ1528(1467 TBT)(1047 TBT)97,13±0,4473,53±1,17*Vi giọt2151(2097 TBT)(1574 TBT)*: khác nhau theo cột, có ý nghĩa về mặt thống kê với p