Bước đầu nghiên cứu nattokinase của chủng vi khuẩn Bacillus sp. phân lập từ nem chua

Trong nghiên cứu này, ảnh hưởng của pH, nhiệt độ và một số ion kim loại đến hoạt độ của nattokinase sinh tổng hợp từ chủng Bacillus sp. phân lập từ nem chua được bước đầu nghiên cứu. Mời các bạn cùng tham khảo.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bước đầu nghiên cứu nattokinase của chủng vi khuẩn Bacillus sp. phân lập từ nem chua TAP CHI SINH HOC 2015, 37(1se): 129­133 Bướ DOI:     10.15625/0866­7160/v37n1se. c đầu nghiên cứu nattokinase BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU NATTOKINASE  CỦA CHỦNG VI KHUẨN Bacillus sp. PHÂN LẬP TỪ NEM CHUA Nguyễn Quỳnh Uyển, Hoàng Thu Hà, Nguyễn Hồng Nhung,  Phan Thị Hà, Nguyễn Huỳnh Minh Quyên* Viện Vi sinh vật và Công nghệ sinh học, ĐHQG Hà Nội, *quyennhm@vnu.edu.vn TÓM TẮT: Nattokinase thu hút sự quan tâm của nhiều nhà khoa học do enzyme này có tác dụng   ngăn ngừa cục máu đông trong cơ thể người. Đây là một serine protease có khả  năng phân hủy   huyết khối  và khả  năng này của nattokinase mạnh gấp 4 lần plasmin .  Trong nghiên cứu của  chúng tôi, nattokinase sinh tổng hợp từ ch ủng vi khu ẩn phân lập từ nem chua đượ c sơ  bộ tinh   sạch qua cột Hitrap Q. Ngoài ra, ảnh hưởng của pH, nhiệt độ và một số ion kim loại đến hoạt   độ của enzyme này cũng đượ c bước đầu nghiên cứu. Từ khóa: Bacillus, máu đông, nattokinase, nhồi máu cơ tim, phân hủy huyết khối.  MỞ ĐẦU Trong nghiên cứu này, ảnh hưởng của pH,  Hiện   nay,  bệnh  nghẽn  mạch   như   chứng   nhiệt độ  và một số  ion kim loại đến hoạt độ  nhồi máu cơ  tim hay tai biến mạch máu não  của  nattokinase   sinh   tổng   hợp   từ   chủng  đang gia tăng không những ở Việt Nam mà còn  Bacillus  sp. phân lập từ  nem chua  được bước  trên   toàn   thế   giới.   Các   bệnh   liên   quan   đến  đầu   nghiên   cứu.   Qua   đó   có   thể   thấy   đây   là  nghẽn mạch thường có nguyên nhân là huyết  enzyme   khá   bền   với   nhiệt   và   hoạt   độ   của   khối.  Sự  ngăn ngừa hình thành huyết khối và  enzyme   đạt   cao  nhất   tại   pH  9.   Đối   với   ảnh  phân hủy huyết khối tích lũy trong máu có vai  hưởng của các ion kim loại, duy nhất Mg2+ có  trò quan trọng trong việc phòng ngừa và điều  tác dụng hoạt hóa enzyme, còn K+, Na+ hầu như  trị các bệnh này. Có nhiều nhóm thuốc điều trị  không có  ảnh hưởng đến hoạt tính trong khi  các  bệnh   gây   ra   do   huyết   khối   nhưng   Ni2+, Co2+, Mn2+, Ca2+, Zn2+, Ag+, Fe2+, Cu2+  thì  nattokinase thu hút sự quan tâm hơn cả do hoạt  ức chế  hoạt tính enzyme  ở  các mức độ  khác   độ  phân hủy huyết khối của nó mạnh gấp 4  nhau.  Enzyme này cũng được sơ  bộ  tinh sạch  lần   plasmin   (enzyme   nội   sinh   làm   tan   máu  qua cột Hitrap Q và đỉnh có hoạt tính được điện  đông)   và   hấp   thụ   nattokinase   qua   đường   ăn  di trên gel SDS­PAGE có cơ  chất nhằm cung  uống là tuyệt đối an toàn [4]. cấp những thông tin bước đầu về số lượng các  băng protease có trong đỉnh này.  Nattokinase   (còn   được   gọi   là   subtilisin  NAT) là một serine protease thuộc họ enzyme   VẬT   LIỆU   VÀ   PHƯƠNG   PHÁP   NGHIÊN  subtilisin.   Nattokinase   gồm   một   chuỗi   CỨ U polypeptide sợi đơn có 275­380 acid amin và  có trọng lượng phân tử  26­42 kDa. Cấu trúc  Vật liệu là chủng Bacillus sp. (NC2) phân  của nó gồm 2 xoắn  α  và 7 phiến  β. Trình tự  lập từ nem chua có hoạt tính nattokinase được  bảo   thủ   trong   trung   tâm   hoạt   động   của  cung   cấp   từ   phòng   Công   nghệ   Enzyme­ nattokinase   bao   gồm   các   gốc   acid   amin  Protein, Viện Vi sinh vật và Công nghệ  sinh  aspartate (D32), histidine (H64), serine (S221)  học, Đại học Quốc gia Hà Nội. Các hóa chất  và asparagine (N155). Trình tự  nattokinase có  đều đạt độ tinh sạch cần thiết cho nghiên cứu. mức tương đồng lớn với các enzyme của họ  Phương pháp nuôi cấy vi khuẩn subtilisin và đặc biệt là  ở mức DNA nó có độ  tương đồng 99,5% với subtilisin E [4]. 129  Nguyen Quynh Uyen et al. Chủng   NC2   được   cấy   ria   trên   đĩa   chứa  trùng dùng để  nuôi cấy vi khuẩn có bổ  sung  môi   trường   NA   (pepton:   5   g,   cao   th ịt:   3   g,   ion kim loại tương  ứng với nồng độ  0,01 M;  thạch: 18 g, nước: 1 lít). Các khuẩn lạc đơn  0,005 M và 0,001 M. Đối chứng d ...