Buớc đầu ứng dụng kỹ thuật giải trình tự gen các locus STR phân tích thể khảm ADN đánh giá tình trạng mọc ghép sau ghép tế bào gốc đồng loài tại Viện Huyết học Truyền máu Trung ương

Nội dung bài viết trình bày về ghép TBG tạo máu là một phương pháp điều trị mới có thể chữa khỏi nhiều bệnh máu lành tính và ác tính. Sự xuất hiện các tế bào người cho trong máu người nhận sau ghép đồng loài là một chỉ số quan trọng cho phép tiên lượng khả năng thải ghép, tái phát, hoặc bệnh ghép chống chủ. Do vậy mục tiêu của ghép TBG tạo máu đồng loài là mảnh ghép (tức tế bào người cho) mọc 100% trong máu người nhận.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Buớc đầu ứng dụng kỹ thuật giải trình tự gen các locus STR phân tích thể khảm ADN đánh giá tình trạng mọc ghép sau ghép tế bào gốc đồng loài tại Viện Huyết học Truyền máu Trung ươngTẠP CHÍ Y – DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 6 - 2013BƯíC ĐÇU ỨNG DôNG KY THUËT GI¶I TR×NH Tù GEN C¸CLOCUS STR PH©N TÝCH THÓ KH¶M ADN иNH GI¸ T×NH TR¹NGMäC GHÐP SAU GHÐP tÕ bµo gèc ĐåNG LOµIT¹I VIÖN HUYÕT HO C TRUYÒN M¸U Trung Ư¬ngLê Xuân Hải*TãM T¾TADN từ người cho và người nhận trước ghép được khuếch đại bằng kít AmpF/STR Identifilerkhuếch đại 15 dấu ấn STR và 1 dấu ấn giới tính. Giải trình tự các dấu ấn này. Căn cứ vào đặc điểmkhác biệt giữa các alen STR người cho và người nhận, xác định alen mang thông tin tốt nhất để tínhtoán mức độ khảm. Để xác định chính xác mức độ khảm, trộn hỗn hợp ADN người cho và ngườinhận trước ghép theo tỷ lệ xác định từ 0 - 100%, sau đó phân tích tính toán % ADN người cho bằngcách tính % donor peak area (% diện tích đỉnh người cho) rồi dựng đường cong chuẩn tương quangiữa % ADN người cho thực tế và % ADN người cho tính toán. Thông qua đường cong chuẩn này,có thể nội suy kết quả % khảm của mẫu bệnh nhân (BN) sau ghép. Kết quả: bằng k thuật giải trìnhtự gen các locus STR cho 8 cặp ghép tế bào gốc (TBG) đồng loài, đ xác định được 6 trường hợpkhảm hoàn toàn và 2 trường hợp khảm hỗn hợp vào ngày D30 sau ghép. Kết luận: Lần đầu tiênở Việt Nam, đ áp dụng thành công phương pháp giải trình tự gen để xét nghiệm phân tích tìnhtrạng khảm. Phương pháp này có độ tin cậy, độ chính xác cao, cho phép đánh giá tình trạng mọcghép/thải ghép ở BN sau ghép tủy/ghép TBG tạo máu đồng loài.* Từ khoá: Tế bào gốc đång loài; Giải trình tự gen; Thể khảm AND.Applying sequence genetic loci STR technique inanalysis of DNA chimerism to evaluate statusof gemmation after hematopoietic stem celltransplantation at National Hospital ofHematology and TransfusionSUMMARYDNAs from pretransplant recipients and donors were amplified with the AmpF/STR Identifiler kitthat contain 15 STR markers and 1 sex marker. The fluorescent PCR products were the fractionatedon polyacrylmide gels in an ABI DNA sequencer. Results were analyzed using Genemapper ID 3.2softwear. We selected the best markers as informative alens which can distinguish donor fromrecipient. For quantitative analysis of the engraftment, we prepared a mixed chimeric sampleby mixing pretransplant recipient and donor DNAs in different ratios to produce a standard curve.* ViÖn HuyÕt häc TruyÒn m¸u TWNg-êi ph¶n håi (Corresponding): Lª Xu©n H¶i (xuanhaile@gmail.com)Ngµy nhËn bµi: 17/5/2013;Ngµy ph¶n biÖn ®¸nh gi¸ bµi b¸o: 10/6/201370TẠP CHÍ Y – DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 6 - 2013Ngµy bµi b¸o ®-îc ®¨ng: 21/6/2013After amplifying the posttransplant recipient DNA, we were able to detect the extent of engraftmentby interpolating the percent peak area of the informative alens from this standard curve. Results: Weretrospectively analyzed 8 patients who had received allogenic PSCT at D30 post-transplant. At D30,75% of patients had complete chimerism, 25% of patients only have mix chimerism. Conclusion: It isthe firt time such kind of engraftment analysis is established in Vietnam. This method provides anuseful tool in assessment of chimerism in posttransplant patients.* Key words: Hematopoietic stem cell transplantation; Short tendem repeat; Chimerism.ĐÆT VÊN ®ÒGhép TBG tạo máu là một phương phápđiều trị mới có thể chữa khỏi nhiều bệnhmáu lành tính và ác tính [6, 7]. Sự xuất hiệncác tế bào người cho trong máu người nhậnsau ghép đồng loài là một chỉ số quan trọngcho phép tiên lượng khả năng thải ghép, táiphát, hoặc bệnh ghép chống chủ [2]. Chod chỉ c n một tỷ lệ nhỏ tế bào máu, BN sphải đối mặt với nguy cơ tái phát. Do vậymục tiêu của ghép TBG tạo máu đồng loàilà mảnh ghép (tức tế bào người cho) mọc100% trong máu người nhận [3].Thể khảm trong ghép TBG tạo máu làmột trạng thái đặc biệt về miễn dịch và ditruyền, đặc trưng bởi sự c ng tồn tại củacác quần thể tế bào có nguồn gốc từ hai cáthể khác nhau. Các dạng thể khảm trongghép TBG tạo máu có thể gặp, bao gồm thểkhảm hoàn toàn (mọc ghép hoàn toàn trongghép TBG tạo máu) hoặc thể khảm hỗnhợp hay khảm một phần (mọc ghép mộtphần hoặc trong trường hợp thải ghép) [5].Có nhiều phương pháp khác nhau được sửdụng nhằm xác định dạng thể khảm. Vềnguyên lý, các phương pháp này đều phảidựa vào những điểm khác biệt về miễn dịchhoặc di truyền giữa người cho và người nhận.Trong ghép TBG tạo máu, nhất là ghép từngười cho là anh/chị em c ng huyết thốngthì khác biệt về hệ kháng nguyên HLA ít cógiá trị trong phân tích thể khảm, các khácbiệt về hệ kháng nguyên hồng cầu và nhiễms c thể giới tính chỉ có thể sử dụng trongcác trường hợp người cho và người nhậnkhác nhóm máu và khác giới. So với nhữngphương pháp khác, phương pháp phân tíchthể khảm dựa vào sự khác biệt giữa cácdấu ấn ADN đặc trưng cá thể người cho vàngười nhận có ưu thế là sử dụng được chotất cả ...