Các kháng thể đơn dòng

Các tế bào bạch huyết (lymphocytes) là các tế bào máu trắng cần cho các phản ứng miễn dịch. Các B-lymphocyte, loại sản xuất kháng thể, hiện diện trong lá lách, các u bạch huyết (lympho nodes) và máu. Khi một chất ngoại lai đi vào trong cơ thể của động vật có xương sống, thì các tuyến Blymphocyte sản xuất nhanh và tiết ra các phân tử protein gọi là immunoglobulin hay còn gọi là kháng thể (antibody). ...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Các kháng thể đơn dòng Các kháng thể đơn dòngCác tế bào bạch huyết (lymphocytes) là các tế bào máu trắng cần cho cácphản ứng miễn dịch. Các B-lymphocyte, loại sản xuất kháng thể, hiện diệntrong lá lách, các u bạch huyết (lympho nodes) và máu. Khi một chất ngoạilai đi vào trong cơ thể của động vật có xương sống, thì các tuyến B-lymphocyte sản xuất nhanh và tiết ra các phân tử protein gọi làimmunoglobulin hay còn gọi là kháng thể (antibody).Các kháng thể có các vị trí kết hợp có thể nhận ra hình dạng của yếu tố quyếtđịnh đặc hiệu trên bề mặt của chất ngoại lai, còn gọi là kháng nguyên(antigent). Kết quả là các kháng thể có thể liên kết với kháng nguyên đặchiệu, trung hòa và đào thải các chất ngoại lai. Do tính đặc hiệu của chúngtrong việc nhận dạng các tế bào hoặc phân tử đặc biệt nên kháng thể đã lànhững công cụ rất quan trọng để các nghiên cứu viên và thầy thuốc lâm sàngphát hiện sự hiện diện và nồng độ của thuốc, các sản phẩm của virus và vikhuẩn, hormone và các kháng thể khác trong máu.Có 5 loại kháng thể là immunoglobulin G, A, M, D và E. Hình 1 minh họacấu trúc của một loại kháng thể immunoglobulin G (IgG), có cấu trúc proteindạng hình chữ Y bao gồm một cặp chuỗi nặng (heavy chain)9 và một cặpchuỗi nhẹ (light chain)10 được liên kết bởi các cầu nối disulfide. Mỗi chuỗicó 2 vùng: (1) vùng có thể thay đổi được, vùng này khác nhau tùy thuộc vàomỗi loại kháng thể và chúng chứa các vị trí liên kết đặc hiệu với các khángnguyên khác nhau, (2) vùng không thể thay đổi được, đặc trưng cho cáckháng thể của một phân lớp nhất định. Bản chất của liên kết kháng thể-khángnguyên tương tự với bản chất của phức hợp cơ chất- enzyme.Có nhiều dòng khác nhau của B-lymphocyte và mỗi dòng sản xuất ra cáckháng thể khác nhau nhận ra các yếu tố quyết định kháng nguyên đặc hiệu.Vì thế, khi một động vật được tiêm một tác nhân miễn dịch, thì nó phản ứngbằng cách sản xuất ra một hỗn hợp kháng thể đa dạng hầu như không thểphân chia được. Để sản xuất một lượng lớn kháng thể đồng nhất (kháng thểđơn dòng) chỉ nhận ra một cấu trúc hóa học, chúng ta phải cho sinh trưởngđược một dòng tế bào đặc biệt của B-lymphocyte. Tuy nhiên, người ta nhậnthấy là các tế bào tiết (tạo) ra kháng thể không thể duy trì được trên môitrường nuôi cấy. Hình 1. Cấu trúc kháng thể immunoglobulin G (IgG).1. Dung hợp tế bàoKhông giống như các tế bào tiết ra kháng thể, các tế bào myeloma (u tủy) làloại tế bào khối u ác tính của hệ thống miễn dịch, có thể được nuôi cấy liêntục. Kehler và Milstein (1975) đã phát triển một phương pháp dung hợp cáctế bào B-lymphocyte của lá lách với tế bào myeloma của chuột để lai hai loạitế bào này với nhau, tế bào lai myeloma (hay hybridoma), có thể có đặc điểmcủa cả hai dòng tế bào: đó là sản xuất các kháng thể đặc hiệu và bất tử. Vìhybridoma được bắt nguồn từ một tế bào B-lymphocyte đơn, nên nó chỉ sảnxuất một loại kháng thể gọi là kháng thể đơn dòng.Phương thức đặc trưng để dung hợp tế bào như sau::- Tiêm kháng nguyên được chọn vào trong chuột. Hệ thống miễn dịch trongchuột đáp ứng bằng cách sản xuất các tế bào B-lymphocyte để tiết ra khángthể.- Lấy lá lách của chuột và tách các tế bào B-lymphocyte.- Nuôi các tế bào myeloma thích hợp thiếu HPGRT (hypoxanthine guaninephosphoribosyl transferase), đột biến HPGRT-, một marker di truyền để chọncác tế bào lai sau khi dung hợp.- Dung hợp các tế bào B-lymphocyte với các tế bào myeloma bằng cách trộnchúng trong môi trường chứa 40-50% polyethylene glycol (PEG). Môitrường sẽ chứa các hỗn hợp của B-lymphocyte, myeloma, và các tế bàohybrid-myeloma. Các B-lymphocyte chứa HPGRT, như vậy các hybridomacũng chứa HPGRT. Vì thế, các tế bào myeloma được coi như là HPGRT-,trong khi các tế bào B-lymphocyte và hybridoma là HPGRT+.- Chọn lọc các tế bào HPGRT+ bằng cách nuôi cấy hỗn hợp trên môi trườngchứa HAT (hypoxanthine, aminopterin và thymidine) là chất ức chế sinhtrưởng các tế bào HPGRT-. Do đó, các tế bào myeloma sẽ chết trên môitrường này, trong khi các tế bào hybridoma sẽ phân chia. Các B- lymphocytekhông dung hợp sẽ chết do khoảng thời gian sống bị hạn chế của chúng. Phương thức dung hợp các tế bào B-lymphocyte.2. Thử nghiệm kháng thểCác kháng thể đơn dòng có thể được phân tích bằng kỹ thuật thử nghiệm pharắn như các thử nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết enzyme (enzyme linkedimmunosorbent assays-ELISA) hoặc các thử nghiệm miễn dịch phóng xạ(radioimmuno assays-RIA). Các phương thức thử nghiệm đặc trưng như sau:- Đưa dung dịch kháng nguyên đặc hiệu (Ag) vào các giếng của đĩa microtitrecó khả năng hút bám kháng nguyên bằng sự tương tác kỵ nước không đặchiệu. Bổ sung một loại protein không gây cản trở liên kết kháng nguyên-kháng thể sau này, như là bovine serum albumin (BSA) để chiếm các vị trígắn còn lại trên giếng.- Bổ sung dung dịch kháng thể đơn dòng thứ nhất (Mab1) là kháng thể đặchiệu vào giếng. Kháng thể sẽ liên kết với kháng nguyên trên ...