Chiến lược sử dụng kháng thể để định tỷ lệ phần trăm TCD4, TCD8 một cách chính xác và rẻ tiền

Nghiên cứu nhằm xây dựng cho Labo miễn dịch một chiến lược dùng kháng thể để định tỷ lệ % TCD4, % TCD8 một cách chính xác và rẻ tiền. Mẫu của 38 người được chia thành 2 nhóm: nhóm có mẫu bình thường: thấy rõ 3 nhóm tế bào lympho, mono, bạch cầu hạt trên cửa sổ FSC, SSC. Và nhóm có mẫu bất thường: không thấy rõ 3 nhóm tế bào như trên. Hai bộ kháng thể được sử dụng: Với phương pháp 4 màu: CD3 (FITC)/CD8 (PE)/CD45 (PerCP)/CD4 (APC) và với phương pháp 3 màu: CD4 (FITC)/CD3...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Chiến lược sử dụng kháng thể để định tỷ lệ phần trăm TCD4, TCD8 một cách chính xác và rẻ tiền ChiÕn l−îc sö dông kh¸ng thÓ ®Ó ®Þnh tû lÖphÇn tr¨m TCD4, TCD8 mét c¸ch chÝnh x¸c vµ rÎ tiÒn TrÇn Khiªn Hïng Phßng MiÔn dÞch tÕ bµo, ViÖn Pasteur tp Hå ChÝ Minh Nghiên cứu nhằm xây dựng cho Labo miễn dịch một chiến lược dùng kháng thể để địnhtỷ lệ % TCD4, % TCD8 một cách chính xác và rẻ tiền. Mẫu của 38 người được chia thành 2nhóm: nhóm có mẫu bình thường: thấy rõ 3 nhóm tế bào lympho, mono, bạch cầu hạt trêncửa sổ FSC, SSC. Và nhóm có mẫu bất thường: không thấy rõ 3 nhóm tế bào như trên. Hai bộ kháng thể được sử dụng: Với phương pháp 4 màu: CD3 (FITC)/CD8 (PE)/CD45 (PerCP)/CD4 (APC) và vớiphương pháp 3 màu: CD4 (FITC)/CD3 (PE)/CD8 (PerCP). Giá trị % TCD4, %TCD8 của từng mẫu được ghi nhận ở cả 2 phương pháp. Dùng phần mềm Excell để xác định hệ số tương quan ở cả 2 phương pháp của các mẫunghiên cứu. Kết quả: + Trong nhóm tế bào bình thường hệ số tương quan giữa PP 4 màu và PP 3 màu đốivới: * TCD4: r = 0.96. * TCD8: r = 0.87. + Trong nhóm có tế bào bất thường hệ số tương quan giữa PP 4 màu và PP 3 màu đốivới * TCD4: r = 0.66. * TCD8: r = 0.57. Với nhóm tế bào bình thường có sự tương quan tốt giữa hai phương pháp 3 và 4 màuvà chúng ta có thể xử dụng phương pháp 3 màu để định tỷ lệ % TCD4, % TCD8 với độ chínhxác không kém gì đối với phương pháp 4 màu. Điều này dẫn chóng tôi đến một chiến lược:Trước tiên dùng phương pháp 3 màu. Nếu có gì bất thường xảy ra lúc xử lý mẫu (còn nhiềuhồng cầu sau khi ly giải), lúc chạy mẫu (thấy nhiều mảnh vụn) thì mới chuyển sang phươngpháp 4 màu. I. ĐẶT VẤN ĐỀ + Đối với bệnh nhân ghép cơ quan thì Trong lâm sàng việc đánh giá tỷ lệ % việc theo dõi định kỳ các tỷ lệ này giúp tacủa lympho TCD4, TCD8 có một giá trị thực dự báo đến tình trạng thải ghép [2]…tiễn vì đối với HIV/AIDS thì nó giúp xác định Trong thực tế để làm được việc này,bệnh nhân nhiễm HIV đang ở giai đoạn chúng ta có nhiều chọn lựa khác nhau vềnào? Có chỉ định dùng thuốc ức chế men cách thức xử lý mẫu, loại kháng thể sửsao chép ngược chưa? Hiệu quả của việc dụng, cách thức phân tích …, tuy nhiênđiều trị bằng thuốc hay những liệu pháp trong phạm vi nghiên cứu này chúng tôi tậpkhác như thế nào? [1]. 51trung vào việc lựa chọn kháng thể để làm 1. Vật liệu và đối tượng nghiên cứu:xét nghiệm. - Ống chống đông bằng EDTA- TRI K Với 2 loại kháng thể sau tương ứng với cung cấp bởi LMD Paris.phương pháp 4 màu, 3 màu. - Ống nghiệm 5ml, cỡ 12 x 75mm do + CD3 (FITC)/CD8 (PE)/CD45 hãng BD cung cấp.(PerCP)/CD4 (APC) {4 màu} - Kháng thể của BD: + CD4 (FITC)/CD3 (PE)/CD8 (PerCP) {3 + PP 4 màu: CD3 (FITC)/CD8màu} (PE)/CD45 (PerCP)/CD4 (APC). Thì độ chính xác của thử nghiệm và giá + PP 3 màu: CD4 (FITC)/CD3cả cũng khác nhau. (PE)/CD8 (PerCP). Loại đầu tiên giá cho mỗi mẫu thử là - Dung dịch ly giải hồng cầu.19.12 USD (theo khuyến cáo xử dụng của - Máy FASCalibur của BD.hãng- báo giá ngày 21- 05- 2002) và nóchính xác hơn loại kế tiếp nếu được kết - Phần mềm Cellquest, Excelhợp với phương pháp phân tích đúng…(1) - Mẫu nghiên cứu gồm 38 người lấy từ Loại thứ hai thì giá tiền cho mỗi mẫu thử những người thấy rõ 3 nhóm quần thểchỉ có 6.44 USD nhưng kém tin cậy hơn. lympho, mono, bạch cầu hạt ở cửa sổ FSC,Mục đích nghiên cứu là nhằm đưa ra được SSC theo quy định của chúng tôi, trongchiến lược xử dụng kháng thể như thế nghiên cứu này gọi là nhóm bình thường vànào để đảm bảo tính chính xác và rẻ tiền ngược lại là nhóm bất thường.trong việc xác định tỷ lệ % CD4, CD8. II. VËt liÖu vµ PHƯƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU A. B. C. BC HAT MONO LYMPHO Hình 1: Nhóm bình thường và nhóm bất thường. A. Nhóm bình thường thấy rõ 3 nhóm cũng phân biệt các nhóm quần thể tế bàodân số lympho, mono, bạch cầu hạt ở cửa như ở hình 1- A.sổ FSC, SSC. 2. Ph−¬ng ph¸p nghiªn cøu: B. Nhóm quần thể bất thường không thể +Xử lý mẫu:xác định chính xác vị trí các nhóm. *1 ml máu tươi chống đông bằng EDTA C. Cũng là mẫu của nhóm quần thể bất được xử lý trong vòng 4 giờ.thường nhưng được ủ v ...