Đánh giá tác dụng kháng virut viêm gan B của các nhóm hoạt chất từ rễ cây nhó đông (Morinda longissima) in vitro

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm đánh giá tác dụng kháng virut viêm gan B (HBV) của các nhóm hoạt chất tách chiết từ rễ cây Nhó đông. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết của tài liệu.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Đánh giá tác dụng kháng virut viêm gan B của các nhóm hoạt chất từ rễ cây nhó đông (Morinda longissima) in vitroTẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2016ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG KHÁNG VIRUT VIÊM GAN B CỦACÁC NHÓM HOẠT CHẤT TỪ RỄ CÂY NHÓ ĐÔNG(Morinda longissima) IN VITROĐặng Thành Chung*; Trần Thu Hường**; Nguyễn Công Thùy Trâm**Đoàn Thị Vân**; Vũ Thị Hà**; Nguyễn Trung Hưng*; Lương Cao Đồng*Hồ Anh Sơn*; George B Lenon***; Nguyễn Mạnh Cường**; Nguyễn Lĩnh Toàn*TÓM TẮTMục tiêu: đánh giá tác dụng kháng virut viêm gan B (HBV) của các nhóm hoạt chất tách chiếttừ rễ cây Nhó đông. Phương pháp: tác dụng kháng HBV của hoạt chất HCTN-213, HCTN-214,HCTN-215, HCTN-216 và HCTN-217 từ rễ cây Nhó đông trên tế bào (TB) Hep3B nhiễm HBVđược đánh giá bằng kỹ thuật realtime-PCR. Kết quả: nồng độ HBV-ADN trong TB Hep3B giảmrõ rệt dưới tác dụng của các nhóm hoạt chất từ rễ cây Nhó đông: HCTN-213 giảm 90,68%;HCTN-215 giảm 93,77% và HCTN-216 giảm 98,11%, mạnh hơn so với nhóm lamivudine là86,64% ở thời điểm 72 giờ sau thử thuốc, so với chứng không điều trị (p < 0,05). Kết luận: hoạtchất tách chiết từ rễ Nhó đông có tác dụng ức chế nhân lên của HBV in vitro.* Từ khóa: Virut viêm gan B; Nhó đông; Morinda longissima; Kháng virut; Hep3B.Anti-Hepatitis B Virus Activity of Components from the Roots ofthe Morinda longissima in Vitro ModelSummaryObjectives: To evaluate anti-HBV activity of components produced from the roots of Morindalongissima. Methods: Anti-HBV activity of components HCTN-213, HCTN-214, HCTN-215,HCTN-216 and HCTN-217, produced from the roots of Morinda longissima on human HBVinfected Hep3B cell line were examined by using realtime-PCR. Results: The HBV-DNA levels inHep3B cells were significantly reduced after treament with components. Components HCTN-213(90.68%), HCTN-215 (93.77%) and HCTN-216 (98.11%) and lamivudine (86.64%) remarklyreduced HBV-DNA levels in comparison to untreated control groups (p < 0.05) after 72h of posttreatments. Conclusion: The components produced from the roots of Morinda longissima weresignificantly redution of HBV replication in vitro.* Key words: HBV; Morinda longissima; Antivirus; Hep3B.* Học viện Quân y** Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam*** Đại học RMITNgười phản hồi (Corresponding): Nguyễn Lĩnh Toàn (toannl@vmmu.edu.vn)Ngày nhận bài: 20/10/2015; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 27/12/2015Ngày bài báo được đăng: 05/01/201685TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2016ĐẶT VẤN ĐỀVirut viêm gan B (HBV) thuộc họHepadnaviridae, là loại virut hướng gancó cấu trúc ADN. Bệnh có thể biểu hiệnviêm gan cấp tính với những thể nặngdẫn đến tử vong hoặc thể viêm gan mạndẫn đến xơ gan và ung thư gan [4, 5].Viêm gan virut B mạn là nguyên nhânhàng đầu của bệnh gan ở nhiều khu vựctrên thế giới, đặc biệt ở khu vực châu Á Thái Bình Dương, khoảng > 400 triệu ngườicó nguy cơ dẫn đến xơ gan và carcinomaTB gan (HCC) [3]. Hiện nay có nhiều loạithuốc điều trị viêm gan B mạn. Các thuốcnày chia làm 2 nhóm chính, có thể sửdụng điều trị riêng lẻ hay phối hợp. Nhóm1: các thuốc được gọi là điều hoà miễndịch, vì chúng tác động lên hệ thống miễndịch của cơ thể đối với kháng nguyên củaHBV trên bề mặt TB gan như interferon(IFN)... Nhóm thứ 2: các thuốc chống virut,có tác dụng ức chế sự nhân lên của virut,ngăn cản hiện tượng nhiễm virut lên cácTB gan bình thường, không ảnh hưởngtrực tiếp lên hệ thống điều hoà miễn dịch,mà chỉ ảnh hưởng gián tiếp. Hiện nay, có4 thuốc kháng virut loại nucleotit và cácchất tương đồng nucleotit là lamivudin,adefovir, entecavir và telbivudine, là nhữngthuốc hàng đầu điều trị viêm gan virut Bmạn [7].Việc nghiên cứu tìm kiếm thuốc cónguồn gốc tự nhiên đang được các nhàkhoa học trên thế giới quan tâm. Gầnđây, các nhà khoa học Trung Quốc tiếnhành nghiên cứu sàng lọc 171 mẫu thựcvật của 76 loài, phát hiện 13 hợp chất và9 dịch chiết có tác dụng kháng viêm ganvirut B trên dòng HepG2.2.15. Đặc biệt,2 hợp chất chrysophanol 8-O-beta-D-glucosidephân lập từ cây Rheum palmatum và wogonin86phân lập từ cây Scutellaria baicalensisthể hiện tác dụng mạnh nhất [8]. Hiện ởViệt Nam chưa có công bố khoa học nàovề mô hình thử viêm gan virut B in vitrovà tác dụng ức chế nhân lên của câythuốc Việt Nam. Tuy có khá nhiều côngtrình nghiên cứu đánh giá tác dụng củaNhó đông trong việc hỗ trợ bảo vệ TB ganvà chữa viêm gan mạn tính do độc [1, 3].Nhưng chưa có công trình nào công bốvề thành phần phần hoạt chất nào cótrong rễ cây Nhó đông có tác dụng khángHBV. Vì thế chúng tôi tiến hành đề nàynày nhằm: Đánh giá thay đổi nồng độHBV-ADN dưới tác dụng của các nhómhoạt chất HCTN-213, HCTN-214, HCTN215, HCTN-216 và HCTN-217 tách chiếttừ rễ cây Nhó đông trên mô h nh TB ungthư gan Hep3B nhiễm HBV.ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU1. Tách chiết các hoạt chất từ rễ câyNhó đông.Bột rễ khô cây Nhó đông được ngâmchiết tạo cao cồn (HCTN-210). Tiến hànhxử lý cao chiết bằng phương pháp hóahọc thu được sản phẩm A dạng bột màuvàng (HCTN-211). Sản phẩm A tiếp tụcđược chiết tổng anthranoid thu được sảnphẩm B màu nâu đỏ (HCTN-212). Sảnphẩm B được phân tách sắc ký cột thuđược nhóm hoạt chất số 1 (HCTN-213),2 (HCTN-214), 3 (HCTN-215), 4 (HCTN216), 5 (HCTN-217).2. Mô hình thử tác dụng kháng viêmgan virut B trên in vitro.* Nuôi cấy TB Hep3B (ATCC):Để đánh giá hoạt tính kháng viêm ganvirut B in vitro, chúng tôi sử dụng TB Hep3BTẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2016nhiễm HBV. TB được nuôi cấy trong môitrường nuôi cấy chuẩn Dulbecco’s ModifiedEagle Medium (DMEM/F12) (Invitrogen,Mỹ) với 100 U/ml penicillin và 100 mg/mlstreptomycin (Hãng Invitrogen, Mỹ), ở nhiệtđộ 37oC trong môi trường 5% CO2. Khi TBnuôi cấy đạt tỷ lệ 70 - 80% diện tích đĩanuôi, tiến hành cấy chuyển sử dụng 0,05%trypsin/EDTA (Hãng Invitrogen, Mỹ), 5 phútở 37°C để tách TB khỏi đĩa nuôi cấy vàchuyển sang đĩa nuôi cấy mới với môi trườngnhư trên.* Chuẩn bị thuốc thử:Để đánh giá tác dụng các nhóm ho ...