Đánh giá tính an toàn của Adenovirus tái tổ hợp mang gen mã hóa IL-12 người trên chuột nhắt

Bài viết trình bày đánh giá tính an toàn của Adenovirus tái tổ hợp mang gen mã hóa IL-12 người trên chuột nhắt. Đối tượng và phương pháp: chuột nhắt BALB/c được chia 3 nhóm, mỗi nhóm 9 con, gồm nhóm chứng, nhóm tiêm adenovirus tái tổ hợp mang gen mã hóa IL-12 người liều 106 vp/con, nhóm tiêm adenovirus tái tổ hợp mang gen mã hóa IL-12 người liều 107 vp/con.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Đánh giá tính an toàn của Adenovirus tái tổ hợp mang gen mã hóa IL-12 người trên chuột nhắt T¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 8-2019 ĐÁNH GIÁ TÍNH AN TOÀN CỦA ADENOVIRUS TÁI TỔ HỢP MANG GEN MÃ HÓA IL-12 NGƯỜI TRÊN CHUỘT NHẮT Nguyễn Thái Biềng1; Hoàng Quốc Trường2; Đặng Quang Chung3; Hồ Anh Sơn1 TÓM TẮT Mục tiêu: đánh giá tính an toàn của Adenovirus tái tổ hợp mang gen mã hóa IL-12 người trên chuột nhắt. Đối tượng và phương pháp: chuột nhắt BALB/c được chia 3 nhóm, mỗi nhóm 9 con, gồm nhóm chứng, nhóm tiêm adenovirus tái tổ hợp mang gen mã hóa IL-12 người liều 6 7 10 vp/con, nhóm tiêm adenovirus tái tổ hợp mang gen mã hóa IL-12 người liều 10 vp/con. Chuột được theo dõi tình trạng toàn thân, đánh giá chức năng gan thận, kiểm tra Adenovirus tái tổ hợp mang gen mã hóa IL-12 người có mặt trong các tạng chuột. Kết quả: chuột tiêm Adenovirus tái tổ hợp mang gen mã hóa IL-12 người khỏe mạnh, không có chuột chết. Chức năng gan thận ở các nhóm chuột tiêm Adenovirus tái tổ hợp mang gen mã hóa IL-12 người không có khác biệt đáng kể thông qua các chỉ số ALT, AST, bilirubin, ure, creatinin. Không phát hiện thấy Adenovirus tái tổ hợp mang gen mã hóa IL-12 người có mặt trong các tạng chuột bằng kỹ thuật PCR. Kết luận: Adenovirus tái tổ hợp mang gen mã hóa IL-12 người 7 an toàn đối với chuột nhắt với mức liều 10 vp/con. * Từ khóa: Adenovirus; IL-12; Tái tổ hợp mang gen mã hóa IL-12 người; Chuột nhắt. ĐẶT VẤN ĐỀ protein trung gian như IP-10 và Mig được cảm ứng bởi IFN-γ. Vector Adenovirus tái Interleukin-12 (IL-12) là một trong tổ hợp gắn gen mã hóa IL-12 là sản phẩm những cytokine triển vọng đối với liệu của đề tài cấp nhà nước “Nghiên cứu ứng pháp miễn dịch chống ung thư. IL-12 kích dụng gen mã hóa IL-12 trong điều trị ung hoạt và khơi mào các tế bào T hỗ trợ týp 1 thư tế bào gan”, tích hợp vector Ad thế hệ (Th1); kích thích biệt hóa tế bào T gây độc 3 và gen mã hóa IL-12 người đã được (TCD8+); thúc đẩy tế bào T duy trì sản chứng minh có thể chuyển vào tế bào xuất interferon-gamma (IFN-γ) cần thiết ung thư gan, cũng như tạo được IL-12 cho ức chế khối u; tác động trực tiếp đến người trên thực nghiệm. Để có thể sử tế bào giết tự nhiên tiêu diệt ung thư. dụng trong nghiên cứu tiếp theo, chúng Ngoài ra, IL-12 còn có tác dụng chống tôi tiến hành: Đánh giá tính an toàn của tăng sinh mạch gián tiếp thông qua chế phẩm này trên động vật thực nghiệm. 1. Học viện Quân y 2. Bệnh viện Trung ương Quân đội 108 3. Bệnh viện Việt Tiệp Hải Phòng Người phản hồi (corresponding): Hồ Anh Sơn (hoanhsonhp@gmail.com) Ngày nhận bài: 19/09/2019; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 17/10/2019 Ngày bài báo được đăng: 18/10/2019 9 T¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 8-2019 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP - Đánh giá chức năng gan, thận: xác NGHIÊN CỨU định hoạt độ/nồng độ của AST, ALT, 1. Đối tượng nghiên cứu. bilirubin toàn phần, ure, creatinin huyết thanh chuột (thời điểm 1 tuần sau tiêm). - Chuột nhắt trắng BALB/c được nuôi trong phòng thí nghiệm, chăm sóc theo - Phát hiện vật liệu di truyền của Ad- hướng dẫn tại Viện Nghiên cứu Y-Dược IL12 trong một số tạng chuột bằng phản học Quân sự, Học viện Quân y. ứng PCR (sau 3 tuần tiêm). Thành phần và điều kiện tối ưu cho phản ứng PCR - Chế phẩm Adenovirus tái tổ hợp khuếch đại đoạn gen IL-12 người bao mang gen IL-12 (Ad-IL12) và Adenovirus gồm: 12,5 mcl 2X PCR Master mix; 10 pM tái tổ hợp không chứa gen mã hóa IL-12 (Ad), do Khoa Sinh học Phân tử, Bệnh mồi xuôi và mồi ngược; 5 mcl ADN tổng viện Trung ương Quân đội 108 cung cấp. số; bổ sung nước vô trùng đến 25 mcl. Chu kỳ nhiệt cho phản ứng PCR được 2. Hóa chất, phương tiện nghiên cứu. thực hiện như sau: 95°C, 5 phút; 35 chu kỳ - Cặp mồi pORF-IL12 forward, [95°C, 20 giây; 58°C, 30 giây; 72°C, 1 phút]; 5’-TGGGAGTACCCTGACACCT-3’ và pORF-IL12 72°C, 5 phút; giữ nhiệt ở 4oC. Sản phẩm reverse, 5’-GTACCCCTACTCCAGGAAC-3’ của phản ứng PCR được phát hiện khi được sử dụng để khuếch đại trình tự cho sản phẩm điện di trên gel agarose 1%. đoạn gen mã hóa IL-12. - Máy soi gel & chụp ...