Dịch chiết nang trứng chín thúc đẩy quá trình chín sinh lý và phát triển phôi heo trinh sản

Bài viết "Dịch chiết nang trứng chín thúc đẩy quá trình chín sinh lý và phát triển phôi heo trinh sản" nghiên cứu sự ảnh hưởng của dịch chiết nang trứng lên khả năng chín sinh lý và phát triển của phôi heo trinh sản. Mời các bạn cùng tham khảo!
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Dịch chiết nang trứng chín thúc đẩy quá trình chín sinh lý và phát triển phôi heo trinh sản DỊCH CHIẾT NANG TRỨNG CHÍN THÚC ĐẨY QUÁ TRÌNH CHÍN SINH LÝ VÀ PHÁT TRIỂN PHÔI HEO TRINH SẢN Nguyễn Bá Tư1 1. Viện Phát triển Ứng dụng. Email: tunb@tdmu.edu.vnTÓM TẮT Dịch chiết nang trứng chín có ảnh hưởng quan trọng đến sự phát triển của trứng heo invitro, khả năng kích hoạt trứng và phát triển phôi heo trinh sản. Các kết quả nghiên cứu chothấy, sau 42 giờ nuôi cấy tỷ lệ trứng heo chín có sự khác biệt ý nghĩa trong tỷ lệ trứng chíngiữa môi trường bổ sung dịch chiết nang trứng heo chín và dịch chiết nang trứng heo có kíchthước 4-6 mm (lần lượt là 87% và 62%). Ngoài ra, dịch chiết nang trứng chín đã giúp nângcao tỷ lệ trứng chín rất tốt từ 30% (nang kích thước 4-6 mm) lên 53% (nang trứng chín), đồngthời kết quả đã giảm đáng kể tỷ lệ trứng xấu từ 24% (nang kích thước 4-6 mm) xuống 10%(nang trứng chín). Tỷ lệ trứng kích hoạt thành công cũng như phát triển phôi heo trinh sản đếngiai đoạn phôi nang (blastocyst) đã làm rõ vai trò của dịch chiết nang trứng chín đến chấtlượng của phôi heo trinh sản. Trong đó, dịch chiết nang trứng chín đã giúp nâng cao tỷ lệ phôinang từ 37% (nang kích thước 4-6 mm) lên 71% (nang trứng chín). Kết quả này góp phần hoànthiện quy trình nuôi chín trứng heo in vitro. Từ khóa: Dịch chiết nang trứng heo; môi trường in vitro; nang trứng chín; phôi heo trinh sản1. ĐẶT VẤN ĐỀ Dịch chiết nang trứng đã được chứng minh có các thành phần dinh dưỡng đặc biệt baogồm đầy đủ các yếu tố sinh trưởng, phát triển, vi khoáng, vitamin, hormone , vv, cung cấp chotrứng phát triển theo từng giai đoạn từ GV đến giai đoạn chín sinh lý (Park và nnk., 2021). Hiệnnay, trong quy trình nuôi trứng heo in vitro, việc bổ sung dịch chiết nang trứng heo đã trở nênthường quy và hầu hết các quy trình đều thống nhất lấy dịch chiết nang trứng có kích thước 4-6mm để bổ sung với hàm lượng 10% vào môi trường TCM199 đã giúp cải thiện chất lượngtrứng chín in vitro và phát triển phôi (Pawlak và nnk., 2018). Tuy nhiên, khi nang trứng đạtkích thước 4-6mm thì trứng bên trong mới gần đạt kích thước tối đa, và thường sẽ phát triển rấtchậm ở giai đoạn này về kích thước mà chủ yếu phát triển về sinh lý giúp đến giai đoạn chuyểntừ giảm phân 1 sang giảm phân 2. Việc ức chế tạm thời quá trình phân chia nhân được đảmnhiệm bởi hàm lượng cAMP vốn được tiết ra từ lớp tế bào Granulosa cells. Chính vì vậy, trongnuôi cấy in vitro, nếu dùng dịch chiết nang trứng giai đoạn này sẽ có một phần hiện hữu hàmlượng cAMP sẽ cản trở quá trình chín sinh lý của trứng hoặc ít nhất sẽ kéo dài thời gian chíncủa trứng hơn 38 giờ thậm chí hơn 42 giờ nuôi cấy (Pawlak và nnk., 2018). Thời gian nuôi cấycàng kéo dài thì chất lượng trứng càng bị ảnh hưởng, quá trình già hóa càng nhanh, chất lượngtrứng chín càng kém (Pawlak và nnk., 2018). Thực tế cho thấy tỷ lệ trứng chín in vitro so vớichín in vivo chỉ đạt 60-70%, đặc biệt là tỷ lệ phát triển phôi thường chỉ đạt 35-40% đến giai 248đoạn phôi nang (blastocyst), điều này được giải thích bắt nguồn chủ yếu từ quá trình nuôi trứngheo in vitro còn rất xa so với quá trình chín sinh lý bên trong nang trứng heo. Chính vì vậy, việcthiết lập quy trình nuôi trứng heo in vitro sao cho có thành phần môi trường gần giống nhất vớimôi trường in vivo sẽ đóng vai trò quyết định đến chín sinh lý của trứng heo, ảnh hưởng trựctiếp đến phát triển phôi heo sau khi kích hoạt. Dựa trên sự khác biệt cơ bản về hàm lượng cAMPgiữa dịch chiết nang trứng có kích thước 4-6 mm và nang trứng chín, chúng tôi tiến hành nghiêncứu sự ảnh hưởng của dịch chiết nang trứng lên khả năng chín sinh lý và phát triển của phôiheo trinh sản.2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1. Vật liệu Hóa chất, môi trường sử dụng trong nghiên cứu này được cung cấp từ hãng Sigma-Aldrich(St. Louis, MO) Buồng trứng heo được lấy từ lò mổ Tân Bình, Phường Tân Bình, Thị xã Dĩ An, tỉnh Bình Dương. 2.2. Phương pháp Nuôi trứng chín Buồng trứng heo được thu từ lò mổ tại địa phương, được bảo quản trong dung dịch PBS-PVA trong quá trình vận chuyển về phòng thí nghiệm tái biệt hoá tế bào, Đại học Quốc tế, Đạihọc Quốc gia Tp. Hồ Chí Minh, Việt Nam. Phức hợp tế bào hạt và trứng được thu nhận bằngphương pháp cắt các nang trứng có kích thước 4-6 mm. Trứng được lựa chọn có đủ lớp tế bàohạt (cumulus) và kích thước như nhau trong tất cả các lô thí nghiệm và đối chứng. Sử dụng môi trường TCM 199 (Sigma Chemical Co., USA) bổ sung 10% dịch chiết nangtrứng, 10 IU/ml hCG (Human chorionic gonadotropin) để nuôi trứng. Chuyển 20-30 trứng (tuỳthí nghiệm) vào nuôi trong vi giọt lớn (floating drop) 500 µl/ giọt trong đĩa 60 mm phủ dầu ởđiều kiện 5% CO2 tại 38,5oC. Sau 38- 42 giờ nuôi cấy, trứng chín được loại bỏ tế bào hạt bởienzyme h ...