Định danh và nghiên cứu một số yếu tố ảnh hưởng lên khả năng sinh tổng hợp protease ngoại bào của Bacillus subtilis DC5

Bài viết tập trung nghiên cứu tuyển chọn chủng B. subtilis DC5 có khả năng sinh protease ngoại bào cao và xác định điều kiện thích hợp để chủng này sinh tổng hợp protease ngoại bào cao nhất.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Định danh và nghiên cứu một số yếu tố ảnh hưởng lên khả năng sinh tổng hợp protease ngoại bào của Bacillus subtilis DC5TAPCHISINHHOC2015,37(1se):177183 DOI:10.15625/08667160/v37n1se. ĐỊNHDANHVÀNGHIÊNCỨUMỘTSỐYẾUTỐẢNHHƯỞNGLÊNKHẢ NĂNGSINHTỔNGHỢPPROTEASENGOẠIBÀOCỦABacillussubtilisDC5 ĐỗThịBíchThủy*,PhanThịBé,ĐoànThịThanhThảo TrườngĐạihọcNôngLâmHuế,*dothibichthuy@huaf.edu.vn TÓMTẮT:ChủngBacillussubtilisDC5cókhảnăngsinhtổnghợpamylasevàproteasengoại bàocaođượcđịnhdanhbằngphươngphápgiảitrìnhtựgene16SrDNA.Hoạtđộproteasetrong môitrườngnuôicấychủngnàytrongmôitrườngcótinhbột(0,423HP/ml)caohơnsovớicác nguồncacbonkhác.Caonấmlànguồnnitơ thíchhợpnhấtđể chủngnàysinhproteasecaoso vớicácnguồnnitơ khác,hoạttínhđạt0,528HP/ml.Kếtquả khảosátkếthợpbổ sungcác nguồncacbonvànitơ đềukhôngcaohơnsovớiviệcbổ sungriêngrẻ nguồntinhbộtvàcao nấm.Hoạtđộproteaseđạtcaonhất(0,649HP/ml)khimôitrườngnuôicấycó0,75%tinhbột. ChủngB.subtilisDC5cókhảnăngsinhproteasecaonhấtkhinuôicấyởmôitrườngcópHban đầulà7,0;nhiệtđộ35oCtrongmôitrườngthíchhợp.Thờigianthunhậnenzymetốtnhấtsau22 giờnuôicấy. Từkhóa:BacillussubtilisDC5,hoạtđộprotease,proteasengoạibào,sinhtổnghợpamylase.MỞĐẦU bột, glucose được cung cấp bởi hãng Merk, Proteasechiếm2/3lượngenzymesửdụng Đức.trong các ngành công nghiệp khác nhau. Phântíchtrìnhtựgen16SrDNAEnzymenàycó ứngdụngrộngrãitrongnhiều Tách DNA tổng số của vi khuẩn: dịchlĩnhvực,đặcbiệtlà trongcôngnghiệpthực huyền phù vi khuẩn được cho vào ốngphẩm[2]vàcôngnghiệpydược[3,5].Donhu Eppendorf1,5cầungàycàngtăng,việcnghiêncứusảnxuấtenzymecôngnghiệpnàyđangtrở nênrấtcầnthiết. Người ta có thể thu nhận protease từnhiềunguồnkhácnhau,trongđó,visinhvậtlàđối tượng chính để sản xuất enzyme nóichungvàproteasenóiriêngvớisốlượngnhiềuvàgiáthànhrẻ.Nhữngkếtquảđạtđượctronglĩnh vực nghiên cứu về protease vi sinh vật chủyếutậptrungvàoBacillussp.[9,10].Vớimụcđíchgópphầnvàoviệckhaitháccácchếphẩmenzymetừ visinhvật,trongcôngtrìnhnày,chúngtôiđãtuyểnchọnchủngB.subtilisDC5cókhả năngsinhproteasengoạibàocaovàxácđịnhđiềukiệnthíchhợpđể chủngnàysinhtổnghợpproteasengoạibàocaonhất.VẬTLIỆUVÀPHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Vật liệu nghiêncứulàchủngDC5đượctuyểnchọntừcácchủngvikhuẩnphânlậptừdưa cải. Các hợp chất sử dụng làm môitrườngnhưpepton,caothịt,caonấmmen,tinh 177 mlđãcósẵn200μldungdịchInstageneTM sóng750nm.Dựa vàođồ thị chuẩntyrosine, MaxTrix (Biorad),lắc đều(vortex)trong10 để tínhsảnphẩmtạothànhtương ứngdưới giâyvàsauđólytâm(spindown), ủ ở 56oC tác dụng của enzyme. Một đơn vị hoạt độtrong30phút,sauđó,lắcđềumẫutrong10 proteinase (HP) được định nghĩa là lượnggiây và đun sôi ở 100oC trong 8phút, rồi ủ enzymemàtrongmộtphútở30oCcókhảnăngtrongnướcđátrong5phút.Hỗnhợptiếptục phângiảiproteintạothànhcácsảnphẩmhoàđược lytâm ở 13.200vòng/phúttrong5phút tantrongtricloaceticacid,chophản ứngmàuvàphaloãng10lầndịchnổithuđượcđểthực tươngđươngvới1,0µmoltyrosine.hiệnphảnứngPCR. Nghiêncứuảnhhưởngcủathànhphầnmôi Táchdòngvàgiảitrìnhtự gen16SrDNA: trường nuôi cấy, pH và nhiệt độ lên khả dịchDNAcủavikhuẩnsaukhitáchchiết(5μl) năngsinhtổnghợpproteasengoạibàobởi đượcchovào20μlhỗnhợpPCR (NK16SPCR) B. subtilis DC5 và xác định thời gian thu (CôngtyNamKhoa,ThànhPhốHồChíMinh) nhậnenzymethíchhợp.và thực hiện phản ứng PCR, theo chu trìnhnhiệtnhưsau:1chukỳ95 oCtrong10phút;40 Banđầu,thínghiệmđượcthựchiệnbằngchukỳgồmcácgiaiđoạn:94oCtrong30giây, cáchnuôicấyB.subtilisDC5trong ...