Định enotyp và phát hiện đột biến YMDD kháng lamivudine của HBV bằng kỹ thuật giải trình tự vùng gene rt của HBV

Đặt vấn đề: Thất bại trong điều trị nhiễm HBV bằng lamivudine là do virus có đột biến gần và/hay ngay tạiYMDD chính là vị trí tác động thuốc trên gene polymerase của HBV. Có 4 đột biến giúp HBV kháng lamuvidine đãđược chứng minh; đó là rtV173L, rtL180M, rtM204I/V, và rtV207I.Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng kỹ thuật giải trình tự để định genotype HBV và phát hiện đột biến YMDD khánglamivudine của HBV...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Định enotyp và phát hiện đột biến YMDD kháng lamivudine của HBV bằng kỹ thuật giải trình tự vùng gene rt của HBVĐịnh genotype và phát hiện đột biến YMDD kháng lamivudine c ủa HBV b ằng k ỹ thu ật gi ảitrình tự vùng gene rt của HBV Phạm Hùng Vân*(1), Nguyễn Thị Minh Thư(2), Võ Đức Xuyên An(2), Lê Thị Phi Yến(2), Đỗ Thị Thanh Thủy(1)Tóm tắtĐặt vấn đề: Thất bại trong điều trị nhiễm HBV bằng lamivudine là do virus có đột biến gần và/hay ngay tạiYMDD chính là vị trí tác động thuốc trên gene polymerase của HBV. Có 4 đột biến giúp HBV kháng lamuvidine đãđược chứng minh; đó là rtV173L, rtL180M, rtM204I/V, và rtV207I.Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng kỹ thuật giải trình tự để định genotype HBV và phát hiện đột biến YMDD khánglamivudine của HBVPhương pháp nghiên cứu: Các tác giả đã thiết kế được kỹ thuật PCR nhân bản một đọan DNA của gen rt vàgiải trình tự đọan DNA này nhờ đó phát hiện được các đột biến trên. Ngòai ra, các tác giả cũng đã xây dựng đượcmột thư viện HBV-DNA để xác định được genotype của HBV khi truy cập đọan trình tự đã giải trên thư viện này.Kết quả nghiên cứu: Áp dụng vào chẩn đóan, trong thời gian từ 10/7/2006 đến 7/10/2006, các tác giả đã giảiđược trình tự 87mẫu huyết thanh lấy từ bệnh nhân nhiễm HBV đáp ứng kém với điều trị lamivudine, kết quả chothấy 57 trường hợp thuộc genotype B, 30 trường hợp thuộc genotype C. Có 54% được ghi nhận có đột biến tại vịtrí 204 và/hoặc 180 là hai đột biến quan trọng nhất được ghi nhận là giúp HBV kháng lamivudine. Xét về tần sốcác kiểu gen đột biến; 2.3% (2/87) mang một kiểu gen đột biến với 1.1% (1/87) rtM204I, 1.1% rtM204Ih; 31%(27/87) mang hai kiểu gene đột biến với 4.6% (4/87) rtL180M-rtM204V, 1.1% rtL180M-M204I, 9.2% (8/87)rtL180Mh-rtM204I, 2.3% (2/87) rtL180Mh-rtM204Vh, 1.1% rtL180Mh-rtM204Ih, 3.4% (3/87) rtV173Lh-M204I, và9.2% rtV173Lh-rtM204Ih; 20.7% (18/87) mang ba kiểu gene đột biến với 1.1% rtV173L-rtL180M-rtM204V, 1.1%rtV173Lh-rtL180M-rtM204I, 12.6% (11/87) rtV173Lh-rtL180M-rtM204V, 1.1% rtV173Lh-rtL180Mh-rtM204I, 4.6%(4/87) rtV173Lh-rtL180M-rtM204Ih. Chúng tôi không ghi nhận có đột biến rtV207I. Có 40 trường hợp không ghinhận có đột biến nào, với 23 thuộc genotype B và 17 thuộc genotype C.Kết luận: Các kết quả nghiên cứu cho phép các tác giả nhận định là hiện nay tình trạng HBV kháng lamivudinetại Việt Nam có lẽ khá cao do virus tự nhiên kháng thuốc trong quá trình điều trị và cũng có thể do b ệnh nhânkhông tuân thủ quá trình điều trị bằng lamivudine do bác sĩ đưa ra. Nhưng dù thế nào đi nữa thì với tình trạng này,các nhà điều trị phải nghĩ đến phương án thay thế lamivudine bằng thuốc kháng virus khác trong điều tr ị bệnhnhân HBV.AbstractSequencing the rt gene of HBV for genotyping and detecting YMDD mutations that help HBV resistant tolamivudine.Background: Lamivudine failed in the treatment of HBV infection was caused by the mutations that happened in ornear the YMDD of the rt region of polymerase gene. Four mutations related to lamivudine resistance weredemonstrated: rtV173L, rtL180M, rtM204I/V, and rtV207I.Objectives: Set up the sequencing method for genotyping of HBV and detecting YMDD mutations resistant tolamuvidine.Methods: The authors have developed the PCR that can amplify one fragment of DNA of the rt gene and thensequence this PCR product to detect these mutation thank to the aligment to the referent sequence collected from thewild type in the gene bank. Besides the mutation detection, the authors have constructed the HBV genotype library thatcan help the user to detect the genotype of the HBV by submitted the collected sequence to this library.Results: Apply on the clinical sera collected from HBV infected patients who were poorly responded to lamivudinetreatment, from 10 of July 2006 to 07 October 2006, the authors sequenced 87 samples and the received resultsreported that 57 were belong to genotype B and 30 genotype C. Fouty-seven HBV (54%) with mutations were reportedat the 180 and/or 204 position. Analyze the prevalene of the mutation patterns, the results reported: 2.3% carried onemutation with 1.1% (1/87) rtM204I, and 1.1% rtM204Ih; 31% carried two mutations with 4.6% (4/87) rtL180M-rtM204V, 1.1% rtL180M-M204I, 9.2% (8/87) rtL180Mh-rtM204I, 2.3% (2/87) rtL180Mh-rtM204Vh, 1.1%rtL180Mh-rtM204Ih, 3.4% (3/87) rtV173Lh-M204I, và 9.2% rtV173Lh-rtM204Ih; 20.7% carried three mutationswith 1.1% rtV173L-rtL180M-rtM204V, 1.1% rtV173Lh-rtL180M-rtM204I, 12.6% rtV173Lh-rtL180M-rtM204V,1.1% rtV173Lh-rtL180Mh-rtM204I, and 4.6% rtV173Lh-rtL180M-rtM204Ih. No rtV207I was reported. Forty caseswere reported without any mutations with 23 were belong to genotype B and 17 were belong to genotype C.Conclusions: From these results, the authors can alarm the ratio of lamivudine resistance among HBV in Vietnam, andthis high ratio may be came from the selectivity effect of the lamivudine treatment that occurs naturally or because ofthe not-compliance of the treatment ...