Khảo sát điều kiện lên men sinh tổng hợp hPDGF-BB tái tổ hợp từ chủng Pichia pastoris

Bài viết tiến hành nghiên cứu khảo sát điều kiện nhiệt độ và pH cho quá trình lên men sinh tổng hợp rhPDGF-BB của chủng P. pastoris X33::pdgf-b bằng hệ thống bồn lên men 1 lít. Mời các bạn cùng tham khảo.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Khảo sát điều kiện lên men sinh tổng hợp hPDGF-BB tái tổ hợp từ chủng Pichia pastoris TAP CHI SINH HOC 2015, 37(1se): 255­260  DOI:     10.15625/0866­7160/v37n1se. KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN LÊN MEN SINH TỔNG HỢP  hPDGF­BB (HUMAN PLATELET­DERIVED GROWTH FACTOR BB)  TÁI TỔ HỢP TỪ CHỦNG Pichia pastoris Dương Long Duy, Phạm Minh Vũ, Nguyễn Trí Nhân,  Trần Linh Thước, Đặng Thị Phương Thảo* Trường Đại học Khoa học tự nhiên, ĐHQG tp. Hồ Chí Minh, *thaodp@hcmus.edu.vn TÓM TẮT:  hPDGF­BB (human platelet­derived growth factor BB) là nhân tố  tăng trưởng có   nguồn gốc từ tiều cầu đóng vai trò quan trọng trong quá trình lành hóa vết thương đã được Cục   quản lý Thực phẩm và Dược phẩm Hoa Kỳ  (Food and Drug Administration ­ FDA) chỉ  định   điều trị biến chứng lở loét chi ở  bệnh nhân đái tháo đường. Với mục tiêu sản xuất lượng lớn   rhPDGF­BB nhằm mục đích điều trị bệnh và nghiên cứu, chúng tôi tiến hành khảo sát điều kiện   lên men mẻ  bổ  sung (fed­batch) trong bồn lên men 1 lít để  sản xuất hPDGF­BB tái tổ  hợp  (rhPDGF­BB) từ chủng Pichia pastoris X33::pdgf­b tái tổ hợp mang đa bản sao gen mã hóa cho  hPDGF­BB. Quá trình lên men mẻ  bổ  sung được tiến hành qua ba giai đoạn: mẻ  glycerol, bổ  sung glycerol và bổ  sung methanol (cảm  ứng biểu hiện protein mục tiêu). Giai đoạn mẻ và bổ  sung glycerol tiến hành ở điều kiện nhiệt độ 30oC và pH 5,0. Giai đoạn bổ sung methanol nhằm  cảm  ứng biểu hiện protein được khảo sát  ở  hai giá trị  nhiệt độ  25oC và 30oC, và ba giá trị pH  3,5; 5,0 và 6,5. Kết quả cho thấy, cảm ứng biểu hiện ở các điều kiện nhiệt độ và pH khác nhau   không  ảnh hưởng nhiều đến sức sống của chủng tái tổ  hợp. Cảm  ứng biểu hiện rhPDGF­BB   đạt sản lượng cao nhất, 686,69 mg/l, ở điều kiện nhiệt độ 30 oC và pH 6,5 ­ cao gấp 7,63 lần so   với nuôi cấy lắc. Từ khóa: Pichia pastoris, bồn lên men 1 lít, lên men mẻ bổ sung, rhPDGF­BB  MỞ ĐẦU X33::pdgf­b  mang 16 bản sao gen mã hóa cho  PDGF­B có khả năng tiết nhân tố PDGF­BB ra  Nhân   tố   tăng   trưởng   từ   tiểu   cầu   môi   trường   nuôi   cấy  dưới   sự   cảm  ứng   của  (Platelet­derived growth factor ­ PDGF) là một  methanol. Tuy nhiên, việc khảo sát điều kiện  yếu tố  phân bào được sản xuất chủ  yếu từ  lên men sinh tổng hợp hPDGF­BB bằng các hệ  tiểu cầu và giữ  nhiều chức năng trong cơ  thể  thống   fermentor   nhằm   hướng   đến   sản   xuất  như  tham gia điều hòa quá trình phát sinh và  protein   ở   quy   mô   pilot   vẫn   chưa   được   tiến  phát triển của cơ quan, hệ thần kinh, đặc biệt  hành. Theo James (2007) [7], quá trình lên men  là   thúc   đẩy   làm   lành   vết   thương  [2].   Năm  P. pastoris biểu hiện protein tái tổ  hợp  ở  quy  1997, PDGF­BB được tổ chức FDA (Food and   mô pilot có thể  được tiến hành theo phương  Drug Administration) cấp phép sử  dụng điều  pháp   mẻ   bổ   sung   (fed­batch)   và   cần   được  trị  chứng loét chân do đái tháo đường [9]. Tại  khảo   sát   thực   nghiệm   riêng   cho   từng   loại   Việt Nam, việc điều trị  chứng bệnh này rất  protein. Trong nghiên cứu này, chúng tôi tiến  tốn  kém  do nguồn thuốc  điều trị  phải  nhập   hành khảo sát điều kiện nhiệt độ  và pH cho  khẩu với giá thành cao. Đồng thời, việc sản  quá trình lên men sinh tổng hợp rhPDGF­BB   xuất và ứng dụng PDGF để điều trị chứng loét  của   chủng  P.   pastoris  X33::pdgf­b  bằng   hệ  chân do đái tháo đường  cũng như  phát triển   thống bồn lên men 1 lít.  thành các dược phẩm và mỹ phẩm chưa được  nghiên   cứu   rộng  rãi   trong   nước.   Vương   Cát  VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Khánh và nnk. (2014) [4 ...