Khảo sát một số điều kiện ảnh hưởng đến khả năng biểu hiện enterocin E-760 tái tổ hợp trong Pichia pastoris X33

Bài viết trình bày kết quả khảo sát một số yếu tố ảnh hưởng đến khả năng biểu hiện enterocin E-760 dung hợp protein SUMO của chủng nấm men tái tổ hợp P. pastoris X33. Enterocin E-760 trong dịch ngoại bào được thu nhận và xác định khả năng kháng một số loài vi khuẩn bao gồm cả vi khuẩn Gram dương và Gram âm. Hoạt tính kháng khuẩn của enterocin E-760 sau khi xử lý nhiệt và pH cũng được xác định làm cơ sở để thực hiện các nghiên cứu tiếp theo.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Khảo sát một số điều kiện ảnh hưởng đến khả năng biểu hiện enterocin E-760 tái tổ hợp trong Pichia pastoris X33 TNU Journal of Science and Technology 229(01): 18 - 27INVESTIGATION OF EXPRESSION CONDITIONS OF RECOMBINANTENTEROCIN E-760 IN Pichia pastoris X33To Lan Anh1, Do Thi Huyen2, Le Thi Thu Hong2, Nguyen Thi Tam Thu1, Nguyen Khanh Hoang Viet1*1Institute of New Technology - Academy of Military Science and Technology2Institute of Biotechnology - Vietnam Academy of Science and Technology ARTICLE INFO ABSTRACT Received: 25/5/2023 Enterocin E-760 is one of the few bacteriocins that demonstrates a high activity against gram-negative and gram-positive bacteria, especially some Revised: 17/10/2023 food pathogen bacteria such as Listeria monocytogenes, Escherichia coli, Published: 18/10/2023 Salmonella... However, Enterococcus sp. bacteria producing enterocin E- 760 can release toxins and take foreign genes especially antibiotic resistance genes. Therefore, the expression of recombinant enterocin E-KEYWORDS 760, as well as other potential bacteriocins, using the safe expressedEnterococcus sp systems has been achieved significant attention. In this article, some culture conditions of recombinant Pichia pastoris X33 for producingEnterocin E-760 enterocin E-760 were investigated. The suitable culture medium for proteinBacteriocin expression was BMMY, pH 7. The recombinant strain was induced atAntibacterial activity OD600=20-30 with a final concentration of 0,5% methanol. The antibacterial peptide maintained stability at 100ºC for 15 minutes and at pHFood preservation range from 4 to 9. At the best condition, enterocin E-760 were 11-12 kDa and exhibited the highest anti-listerial activity of 160 AU/mL. The recombinant peptide also possessed great activity against Salmonella enteritidis ATCC 13076 (640 AU/mL). These results were the initial step to produce enterocin E-760 on a large-scale and use it as a bio-preservative in food preservation.KHẢO SÁT MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN ẢNH HƯỞNG ĐẾN KHẢ NĂNG BIỂU HIỆNENTEROCIN E-760 TÁI TỔ HỢP TRONG Pichia pastoris X33Tô Lan Anh1, Đỗ Thị Huyền2, Lê Thị Thu Hồng2, Nguyễn Thị Tâm Thư1, Nguyễn Khánh Hoàng Việt1*1Viện Công nghệ mới - Viện Khoa học và Công nghệ quân sự2 Viện Công nghệ sinh học - Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam THÔNG TIN BÀI BÁO TÓM TẮT Ngày nhận bài: 25/5/2023 Enterocin E-760 là một trong số ít các bacterocin kháng khuẩn phổ rộng, kháng cả vi khuẩn Gram dương và Gram âm, đặc biệt là một số loại vi Ngày hoàn thiện: 17/10/2023 khuẩn gây ngộ độc thực phẩm như Listeria monocytogenes, Escherichia Ngày đăng: 18/10/2023 coli, Salmonella... Tuy nhiên, vi khuẩn Enterococcus sp. sinh tổng hợp enterocin E-760 lại có khả năng tiết độc tố và thu nhận các gen ngoại lai như các gen kháng kháng sinh. Do đó, việc tạo ra enterocin E-760 cũng như cácTỪ KHÓA bacteriocin khác bằng con đường tái tổ hợp, sử dụng hệ biểu hiện an toànEnterococcus sp. nhận được nhiều sự quan tâm của các nhà khoa học. Trong nghiên cứu này, một số điều kiện nuôi cấy nấm men Pichia pastoris X33 cho quá trình thuEnterocin E-760 nhận enterocin E-760 được khảo sát. Môi trường được lựa chọn để biểu hiệnBacteriocin enterocin E-760 là BMMY ở pH 7. Chủng nấm men tái tổ hợp được cảmHoạt tính kháng khuẩn ứng bằng methanol đến nồng độ cuối là 0,5% khi mật độ tế bào đạt OD600 là 20-30. Enterocin E-760 bền ở 100ºC trong 15 phút, hoạt tính ổn định ở pHBảo quản thực phẩm từ 4 đến 9. Enterocin E-760 có khối lượng khoảng 11-12 kDa, thể hiện hoạt tính kháng khuẩn mạnh với chủng Gram âm Salmonella enteritidis ATCC 13076 (640 AU/mL) và chủng Gram dương L. monocytogenes ATCC 35152 (160 AU/mL). Các kết quả trên là cơ sở bước đầu để sản xuất enterocin E- 760 ứng dụng trong bảo quản thực phẩm.DOI: https://doi.org/10.34238/tnu-jst.8013* ...