Luận văn : CHUYỂN GEN gfp (GREEN FLUORESCENT PROTEIN) VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN Pseudomonas fluorescens BẰNG PHƯƠNG PHÁP TIẾP HỢP BA THÀNH PHẦN part 1

Hiện nay, các tác nhân gây bệnh đang trãi rộng trên nhiều loại cây trồng, trong khiđó các biện pháp phòng trừ hóa học ngày càng gây ô nhiễm môi trường. Do đó việc sửdụng biện pháp sinh học nhằm bảo vệ thực vật là yêu cầu ngày càng cấp thiết.Trong bản thân đất và trên cây trồng, vi khuẩn, virus, nấm chúng đã tồn tại sẵn vàcó tính đối kháng, có khả năng ức chế lẫn nhau
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Luận văn : CHUYỂN GEN gfp (GREEN FLUORESCENT PROTEIN) VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN Pseudomonas fluorescens BẰNG PHƯƠNG PHÁP TIẾP HỢP BA THÀNH PHẦN part 1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ MINH BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ***000*** ĐỖ THỊ NGỌC HÂNCHUYỂN GEN gfp (GREEN FLUORESCENT PROTEIN) VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN Pseudomonas fluorescensBẰNG PHƢƠNG PHÁP TIẾP HỢP BA THÀNH PHẦN Luận văn kỹ sư Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 09 / 2006 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ MINH BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ***000***CHUYỂN GEN gfp (GREEN FLUORESCENT PROTEIN) VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN Pseudomonas fluorescensBẰNG PHƢƠNG PHÁP TIẾP HỢP BA THÀNH PHẦN Luận văn kỹ sư Chuyên ngành: Công nghệ sinh họcGiáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện:LÊ ĐÌNH ĐÔN ĐỖ THỊ NGỌC HÂN Khóa: 2002 - 2006 Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 09 / 2006 MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING NONG LAM UNIVERSITY, HCMC DEPARTMENT OF BIOTECHNOLOGY ************TRANSFER gfp (GREEN FLUORESCENT PROEIN) GENE INTO Pseudomonas fluorescens BACTERIAL CELL BY TRIPARENTAL MATING MENTHOD Graduation thesis Major: Biotechnology Professor Student LE DINH DON DO THI NGOC HAN Term: 2002 - 2006 Ho Chi Minh City 09 / 2006 iv LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cám ơn: Gia đình là chỗ dựa về vật chất và tinh thần cho tôi trong suốt thời gian học tập và làmkhóa luận. Ban giám hiệu Trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh. Ban chủ nhiệm cùng thầy cô Bộ Môn Công Nghệ Sinh Học đã truyền đạt mọi kiếnthức, giúp đỡ và tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong thời gian học tập ở trường. Thầy Lê Đình Đôn đã tận tình hướng dẫn tôi trong suốt quá trình thực tập và hoàntất khóa luận tốt nghiệp này. Thầy Zhang Liqun ở Đại Học Nông Nghiệp Trung Quốc đã cung cấp mẫu vi khuẩn E.coliDH5α (λ-pir) chứa plasmid pUT-gfp, vi khuẩn E.coli DH5α (λ-pir) chứa plasmid pRK600 vàcác tài liệu phục vụ cho thí nghiệm. Ban giám đốc cùng các anh chị trực thuộc Trung Tâm Phân Tích – Thí NghiệmHóa Sinh Trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh đã hướng dẫn và chiasẻ cùng tôi những khó khăn trong thời gian thực hiện khóa luận. Anh Nguyễn Văn Lẫm đã nhiệt tình giúp đỡ tôi hoàn thành luận văn này. Tất cả các anh chị thuộc Bộ Môn Bảo Vệ Thực Vật Khoa Nông Học đã giúp đỡ tôitrong quá trình thực hiện đề tài. Các bạn bè lớp Công Nghệ Sinh Học 28 đã giúp đỡ và động viên tôi trong suốtnhững năm học cũng như thời gian thực hiện khóa luận. Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 8 năm 2006 Sinh viên Đỗ Thị Ngọc Hân iv v TÓM TẮT Đỗ Thị Ngọc Hân, Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh, “CHUYỂN GENgfp (GREEN FLUORESCENT PROTEIN) VÀO TẾ BÀO VI KHUẨNPseudomonas fluorescens” BẰNG PHƢƠNG PHÁP TIẾP HỢP BA THÀNHPHẦN. Đề tài được thực hiên ở Trường Đại học Nông Lâm Tp. Hồ Chí Minh, thờigian từ tháng 02/2006 đến tháng 08/2006, dưới sự hướng dẫn cuả Thầy Lê Đình Đôn. Nội dung nghiên cứu Chọn lọc vi khuẩn Pseudomonas fluorescens trên môi trường chọn lọc. Xây dựng quy trình tiếp hợp plasmid pUT- gfp vào vi khuẩn Pseudomonasfluorescens bằng phương pháp tiếp hợp ba thành phần (triparental mating). Tách chiết DNA plasmid pUT-gfp để làm mẫu dò. Tiến hành phương pháp Dot Blot để kiểm tra gen đã chuyển. Xem biểu hiện gen phát sáng trên kính hiển vi có phát huỳnh quang. Kết quả đạt được Thiết lập được quy trình tiếp hợp Plasmid pUT- gfp vào vi khuẩn Pseudomonasfluorescens bằng phương pháp tiếp hợp ba thành phần (triparental mating). Hoàn thiện quy trình kiểm tra gen đã chuyển bằng phương pháp Dot Blot và xemlại trên kính hiển vi phát huỳnh quang. v ...