Luận văn : Cố định enzyme – amylase bằng gel alginate part 5

Cho hổn hợp trên nhỏ từng giọt xuống dung dịch Ca 0.2M từ khoảng cách 20cm tạo thành các hạt có kích thước từ 0.5–4 mm. Để yên trong 2 giờ để các hạt gel tủa lại. Enzyme đã được bao bọc bên trong hạt gel. Phương pháp đánh giá hoạt tính enzyme Chỉ tiêu theo dõi, đánh giá hoạt tính enzyme đường maltose sinh ra sau phản ứng Wihstatetter Schudel : a. Dụng cụ và hoá chất Dụng cụ Buret 2ml, 5ml, 10ml Erlen 250ml Hóa chất Dung dịch tinh bột 0.5% trong dung dịch đệm pH 5.6 Na2S2O3...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Luận văn : Cố định enzyme – amylase bằng gel alginate part 5 41 –Cho hoån hôïp treân nhoû töøng gioït xuoáng dung dòch Ca 0.2M töø khoaûngcaùch 20cm taïo thaønh caùc haït coù kích thöôùc töø 0.5–4 mm. Ñeå yeân trong 2 giôø ñeå caùchaït gel tuûa laïi. Enzyme ñaõ ñöôïc bao boïc beân trong haït gel. Sô ñoà thöïc hieän: Sodium alginate Nöôùc Khuaáy, ñeå yeân trong 30 phuùt Dung dòch enzyme tæ leä 1:1 Khuaáy. Loaïi boû boït khí Glutaraldehyde Ñeå yeân trong 6giôø Xilanh nhoû gioït CaCl2 0.2M Loaïi enzyme dö. Ñeå yeân trong 2 giôø Gel 42 3.2.2. Phöông phaùp ñaùnh giaù hoaït tính enzyme amylase coá ñònh Chæ tieâu theo doõi, ñaùnh giaù hoaït tính enzyme amylase döïa treân ñònh löôïngñöôøng maltose sinh ra sau phaûn öùng thuûy phaân tinh boät theo phöông phaùpWihstatetter Schudel : a. Duïng cuï vaø hoaù chaát Duïng cuï Buret 2ml, 5ml, 10ml Erlen 250ml Hoùa chaát Dung dòch tinh boät 0.5% trong dung dòch ñeäm pH 5.6 Na2S2O3 N/20 NaOH N/10 Dung dòch iod N/10 b. Ñònh löôïng ñöôøng maltose Laáy 2 erlen 250ml Erlen thöù nhaát : (Thöû thaät): Cho vaøo 5ml hoãn hôïp caàn xaùc ñònh ñöôøng maltose, 10ml dung dòch iod N/10, 15ml dung dòch NaOH N/10. Thôøi gian nhoû dung dòch NaOH N/10 phaûi keùo daøi gaàn 2 phuùt (nhoû töøng gioït). Ñeå yeân trong toái 20 phuùt. Sau ñoù laáy ra cho theâm vaøo 2ml H2SO4 2N. Ñònh phaân löôïng thöøa 15 baèng dung dòch Na2S2O3 N/20 (duøng hoà tinh boät cho theâm vaøo luùc cuoái phaûn öùng ñònh phaân ñeå laøm chaát chæ thò maøu) . Erlen thöù hai : (thöû khoâng) : thay 5ml hoãn hôïp caàn xaùc ñònh löôïng ñöôøng maltose baèng 5ml nöôùc caát. Caùc böôùc tieán haønh thöïc hieän töông töï nhö ôû bình thöù nhaát. 43 c. Tính keát quaû Löôïng ñöôøng maltose sinh ra do taùc duïng phaân giaûi cuûa amylase (V0 Vt ).342 (*) X (g) 20.10 3.2 V0 : laø theå tích Na2S2O3 N/20 duøng ñònh phaân cho bình thöû khoâng. Vt : laø theå tích Na2S2O3 N/20 duøng ñònh phaân cho bình thöû thaät. 342 : troïng löôïng phaûn öùng cuûa maltose. Hoaït tính cuûa amylase (UI) ñöôïc tính theo coâng thöùc X Hñ A .K (U .I ) (**) m.t X : Löôïng ñöôøng maltose sinh ra do taùc duïng thuûy phaân cuûa amylase. m : Löôïng maãu enzyme söû duïng. K : Heä soá pha loaõng. 3.2.3. Phöông phaùp khaûo saùt hoaït tính enzyme coá ñònh a. Khaûo saùt hoaït tính cuûa enzyme coá ñònh so vôùi enzyme hoøa tan – Söû duïng 25 ml enzyme Termamyl ñaõ ñöôïc pha loaõng vôùi nöôùc caát (heä soápha loaõng laø 2) tieán haønh qui trình coá ñònh vôùi 25ml dung dòch alginate 3% nhö treântaïo ra ñöôïc 50 ml enzyme coá ñònh. – Laáy 10 erlen 250 ml chia thaønh hai loâ, moãi loâ 5 erlen. Moät loâ tieán haønhthí nghieäm vôùi enzyme coá ñònh, moät loâ tieán haønh vôùi dòch enzyme hoøa tan vôùi heä soápha loaõng laø 2 ñeå laáy giaù trò trung bình. – Tieán haønh theo baûng sau : 44 Loâ thöù 1 Loâ thöù 2 100ml hoà tinh boät 0.5% 100ml hoà tinh boät 0.5% 10ml enzyme coá ñònh 5ml dòch enzyme hoøa tan Ñaët teân treân maùy laéc ôû nhieät ñoä thöôøng trong 1 giôø Ñem ñònh löôïng ñöôøng maltose sinh ra ÔÛ moãi erlen laáy ra 25ml hoãn hôïp, theâm 10ml dung dòch NaOH 0 ...