Luận văn : NGHIÊN CỨU MỘT SỐ VIRUS TRÊN KHOAI TÂY (PVX, PVY, PLRV) TẠI ĐÀ LẠT BẰNG KỸ THUẬT ELISA, RT-PCR VÀ GIẢI TRÌNH TỰ part 3

Ở cả hai trường hợp, các phân đoạn DNA sẽ được phân tách thông qua điện di trên gel polyacrylamide hay polymer trong các mao quản có khả năng phân tách hai đoạn DNA chỉ chênh lệch nhau một nucleotide. Với việc sử dụng một loại nucleotide có đánh dấu, kết quả trình tự cần xác định được đọc từ bản điện di. (Hồ Huỳnh Thùy Dương, 2002). 2.4 Những nghiên cứu trong và ngoài nước về virus PVX, PVY và PLRV trên khoai tây 2.4.1 Nghiên cứu trong nước về virus PVX, PVY và PLRV Những nghiên cứu về...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Luận văn : NGHIÊN CỨU MỘT SỐ VIRUS TRÊN KHOAI TÂY (PVX, PVY, PLRV) TẠI ĐÀ LẠT BẰNG KỸ THUẬT ELISA, RT-PCR VÀ GIẢI TRÌNH TỰ part 3 12 Ở cả hai trường hợp, các phân đoạn DNA sẽ được phân tách thông qua điện ditrên gel polyacrylamide hay polymer trong các mao quản có khả năng phân tách haiđoạn DNA chỉ chênh lệch nhau một nucleotide. Với việc sử dụng một loại nucleotidecó đánh dấu, kết quả trình tự cần xác định được đọc từ bản điện di. (Hồ Huỳnh ThùyDương, 2002).2.4 Những nghiên cứu trong và ngoài nước về virus PVX, PVY và PLRV trênkhoai tây2.4.1 Nghiên cứu trong nước về virus PVX, PVY và PLRV Những nghiên cứu về bệnh virus thực vật nói chung và trên khoai tây nói riêng ởViệt Nam ngày càng phong phú và đa dạng, tuy nhiên phần lớn các nghiên cứu này chỉtập trung vào việc chẩn đoán và xác định bệnh. - Năm1967 Nguyễn Hữu Thụy (Ban điều tra cơ bản côn trùng bệnh cây) đã xácđịnh sự có mặt của virus X khoai tây. - Từ năm 1973 – 1985, Vũ Triệu Mân đã xác định 7 virus chính gây hại trênkhoai tây ở Việt Nam là PVY, PVX, PVA, PVS, PVM, PAMV, PLRV bằng phươngpháp cây chỉ thị, phương pháp ELISA, phương pháp hiển vi điện tử. - Các tác giả Nguyễn Viết Tùng, Nguyễn Văn Viết, Nguyễn Kim Oanh đã nghiêncứu các môi giới truyền bệnh ở vùng Gia Lâm (Hà Nội) – vùng Xuân Mai (Hòa Bình)truyền bệnh virus khoai tây. - Từ năm 1980 – 1985, đề tài cấp nhà nước chống bệnh virus, đã tổ chức phòngtrừ bằng chọn lọc vệ sinh cho nhiều vùng sản xuất khoai tây ở miền bắc (Hà Nam,Nam Định, Hà Bắc, Hải Dương, Hưng Yên). - 1985 – 1992, Trường Đại học Nông Nghiệp 1 đã đề xuất việc sản xuất khoai tâygiống trên vùng cách li địa hình ngay ở đồng bằng sông Hồng chống bệnh virus cóhiệu quả ở vùng Hà Tây. - Các virus PVX, PVY, PMV và một số virus khác đã được nghiên cứu và sảnxuất thử kháng huyết thanh tại trường Đại học Nông Nghiệp 1 Hà Nội. Kỹ thuậtELISA được sử dụng từ năm 1990, kỹ thuật PCR bắt đầu áp dụng từ năm 1995 đểchẩn đóan bệnh. - Tại Trung tâm Nghiên cứu khoai tây Đà Lạt chỉ mới dừng lại ở kiểm tra ELISAtrên các giống do Trung tâm sản xuất. 13 - Các kỹ thuật RT-PCR, giải trình tự chưa được áp dụng phổ biến trong công tácchẩn đoán virus PLRV.2.4.2 Nghiên cứu nước ngoài về virus PVX, PVY, PLRV - Nie và Singh (2002) đã dùng kỹ thuật RT-PCR trong việc xác định trình tựnucleotide của PVY ở Châu Âu và Bắc Mỹ (PVYNTN gây đốm hoại tử ở củ ). Thôngqua nghiên cứu này, họ muốn xác định khoảng cách di truyền và phương pháp phânbiệt các chủng PVY, đồng thời cũng giúp xác định những trình tự mới xuất hiện ởnhững vùng địa lí khác nhau do biến chủng từ PVYNTN. Nghiên cứu này dựa trên sựkhác biệt ở đoạn gen P1 và 5’ - UTR. - Nie, Xianzhou, Singh và Rudra (2003) đã dùng kỹ thuật multiplex RT-PCR đểphân biệt các chủng PVYN, PVYO và PVYNTN. - Nie và Singh (2000) đã sử dụng các primer ngẫu nhiên cho multiplex RT-PCRnhằm mục đích xác định sự hiện diện của virus và viroid trong rệp, lá và củ - Singh, Kurz, Boiteau và Moore (1997) đã dùng kỹ thuật PT-PCR để xác định sựhiện diện của PLRV trong rệp bắt từ ruộng khoai tây. Trong nghiên cứu này 3 loại rệplà Myzus persicae: green peach aphid; buckthorn aphid và potatoaphid Macrosiphumeuphorbiae được lấy từ ruộng cây khoai tây thương mại New Brunswick (1988-1994)đều cho kết quả dương tính với PLRV. - Singh, Nie, Sing, Coffin và Duplessis (2002) cho rằng phản ứng RT-PCR bị ứcchế bởi hợp chất phenolic từ mô cây. Nghiên cứu này xác định việc bổ sung Na 2SO3trong bước cho dung dịch đệm li trích RNA có thể nâng cao hiệu quả của RT-PCR.Bởi vì Na2SO3 (Sodium sulphite) có khả năng ức chế hợp chất phenolic hiện diệntrong quá trình ly trích RNA. - Công ty Monsanto Canada Inc đã thành công trong việc tạo ra giống khoai tây“Newleaf-plusTM Russet Burbank” với các dòng RBMT 21-129, RBMT21-350 vàRBMT22-082 có khả năng kháng lại PLRV. Bằng cách chuyển gen CryIIIA từBacillus thuringensis và hai trình tự ORF1, ORF2 từ PLRV , quá trình chuyển genđược thực hiện nhờ Agrobacterium. 14PHẦN 3. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu Đề tài được thực hiện từ ngày 21 tháng 03 đến ngày 15 tháng 07 năm 2005 tạiTrung tâm Phân tích Thí nghiệm Trường Đại Học Nông Lâm Thành phố Hồ ChíMinh.3.2 Vật liệu nghiên cứu3.2.1 Vật liệu dùng trong kỹ thuật ELISA để phát hiện PVX, PVY và PLRV a. Nguồn mẫu thí nghiệm Tất cả các mẫu thí nghiệm được lấy từ năm phường (5, 8, 9, 11 và 12) tại Đà Lạt,được bảo quản trong điều kiện -20oC. b. Hóa chất: Các loại hóa chất cần cho quá trình chẩn đoán được cung cấp đầy đủ trong các bộkit Potato virus X - PVX test kit 480 test, potato virus Y - PVY test kit 480 ...