Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Nghiên cứu tạo phôi lợn bằng phương pháp thụ tinh trong ống nghiệm

Đề tài đặt ra ba nội dung để giải quyết là: Thử nghiệm tạo phôi in vitro từ trứng lợn thu từ lò mổ; thử nghiệm cải thiện chất lượng phôi lợn bằng cách bổ sung dịch nang buồng trứng lợn vào môi trường nuôi thành thục trứng; thử nghiệm bảo quản phôi lợn thụ tinh in vitro bằng đông lạnh trong ni tơ lỏng.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Nghiên cứu tạo phôi lợn bằng phương pháp thụ tinh trong ống nghiệm ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN ---------------------------------- Nguyễn Thị Hương NGHIÊN CỨU TẠO PHÔI LỢNBẰNG PHƯƠNG PHÁP THỤ TINH TRONG ỐNG NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: TS. Nguyễn Lai Thành Hà Nội - 2010Luận văn Thạc sỹ Khoa Sinh học LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới GS.TS. Nguyễn Mộng Hùngnguyên Trưởng phòng Công nghệ tế bào Động vật – Trung tâm nghiên cứukhoa học sự sống – Khoa Sinh học – Trường Đại học Khoa học Tự nhiên.Thầy là người đầu tiên đã thu nhận và hướng dẫn tôi khi tôi bắt đầu tiếnhành luận văn cao học này. Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới TS. Nguyễn Lai Thành, Chủ nhiệmbộ môn Tế bào – Mô phôi – Lý sinh, Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoahọc Tự nhiên. Thầy là người trực tiếp hướng dẫn tôi trong suốt khóa học.Thầy đã tận tình chỉ bảo và giúp đỡ tôi rất nhiều trong thời gian nghiên cứucũng như hoàn thành luận văn cao học này. Tôi xin gửi lời cảm ơn tới TS. Đào Đức Thà và Ths. Nguyễn Thị Thoa,Ths. Lưu Ngọc Anh cùng các đồng nghiệp phòng Thí nghiệm Trọng điểmcông nghệ tế bào động vật, Viện Chăn nuôi. Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ths Phạm Việt Quỳnh cùng cácem Phòng Công nghệ Tế bào Động vật, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới các thầy, cô trong khoa Sinh học,Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà nội và đặc biệt làcác thầy cô giáo trong bộ môn Tế bào – Mô phôi – Lý sinh đã truyền đạt chotôi những kiến thức trong suốt thời gian học tập và nghiên cứu vừa qua. Cuối cùng tôi muốn gửi lời cảm ơn sâu sắc nhất tới toàn thể gia đìnhtôi, những người đã luôn ủng hộ và là nguồn động viên lớn lao giúp tôi cóthể hoàn thành khóa học này. Hà Nội tháng 11/2010 Học viên Nguyễn Thị HươngNguyễn Thị Hương i Cao học K16 Sinh họcLuận văn Thạc sỹ Khoa Sinh học DANH MỤC TỪ VIẾT TẮTAMP: Adenosine monophosphateBSA: Bovine serum albumin ( Albumin huyết thanh bò)DMSO: Demethyl sulfoxideDNA: Deoxyribonucleic acid (Axit Deoxyribonucleic)eCG: equine chorionic gonadotropin (Huyết thanh thai ngựa)FCS: Fetal calf serum (Huyết thanh bê)FSH: Follicle stimulating hormone (Hóc môn kích thích nang trứng)GV: Germinal vesicle (Túi mầm)hCG: Human chorionic gonadotropin (Chorionic gonadotropin người)ICM: Inner cells mass ( Nút phôi)ICSI: Intracytoplasmic sperm injectionIVF: In vitro fertilization (Thụ tinh ống nghiệm)IVM: In vitro maturation (Nuôi thành thục trong ống nghiệm)IVC: In vitro culture (Nuôi cấy ống nghiệm)LH: Luteinizing hormone (hóc môn gây rụng trứng)NCSU: North Carolina State UniversityPBS: Phosphate buffer solution (Dung dịch đệm phot phat)PFF: Porcine follicular fluid (Dịch nang trứng lợn)SOD: Superoxide dismutaseTTON: Thụ tinh trong ống nghiệmZP: Zona pellucida (Màng sáng)TCN: Tiêu chuẩn nuôiNguyễn Thị Hương ii Cao học K16 Sinh họcLuận văn Thạc sỹ Khoa Sinh học MỤC LỤC TrangDANH MỤC TỪ VIẾT TẮT _____________________________________ iiMỤC LỤC ___________________________________________________ iiiMỤC LỤC HÌNH ______________________________________________ vMỞ ĐẦU _____________________________________________________ 1Chương 1. TỔNG QUAN ________________________________________ 3 1.1 Buồng trứng và sự tạo trứng _________________________________ 3 1.1.1 Cấu tạo và hoạt động của buồng trứng ________________________ 3 1.1.2 Cấu tạo và sự hình thành tế bào trứng ________________________ 6 1.2 Cấu tạo và hoạt động của ống dẫn trứng ______________________ 11 1.3 Cấu tạo tinh trùng và quá trình hình thành tinh trùng ___________ 13 1.3.1 Cấu tạo tinh trùng ______________________________________ 13 1.3.2 Quá trình sinh tinh ______________________________________ 14 1.4 Sự thành thục tế bào trứng trong ống nghiệm (IVM) và vai trò của môi trường ____________________________________________ 15 1.4.1 Sự thành thục của tế bào trứng _____________________________ 16 1.4.2 Vai trò của tế bào nang __________________________________ 17 1.4.3 Vai trò của việc bổ sung dịch nang trứng và FCS trong môi trường nuôi thành thục trứng ________________________________________ 18 1.5 Sự hoạt hóa tinh trùng _____________________________________ 20 1.5.1 Khái niệm hoạt hóa tinh trùng _____________________________ 20 1.5.2 Sự hoạt hóa tinh trùng in vitro _____________________________ 21 1.5.3 Các phương pháp sàng lọc làm tăng chất lượng tinh trùng ________ 22 1.6 Thụ tinh trong ống nghiệm _________________________________ 24 1.6.1 Sự thụ tinh ____________________________________________ 24 1.6.2 Quá trình thụ tinh trong ống nghiệm ________________________ 24 1.6.3 Hiện tượng thụ tinh đa tinh trùng trong thụ tinh ống nghiệm ______ 25 1.7 Nuôi phôi trong ống nghiệm ________________________________ 26 1.7.1 Quá trình phát triển phôi _________________________________ 26 1.7.2 Môi trường nuôi phôi sau thụ tinh __________________________ 28 1.8 Cất giữ lạnh phôi _________________________________________ 29 1.9 Giải đông phôi _________ ...