Luận văn : THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT KHÁNG HUYẾT THANH KHÁNG VI KHUẨN E. coli part 6

PHẦN 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN4.1. KẾT QUẢ 4.1.1. Định tính Để xác định thời điểm xuất hiện và thời gian tồn tại của kháng thể trong kháng huyết thanh (KHT) ta thực hiện phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính với KHT thu được sau khi li tâm tách huyết thanh. 4.1.1.1. Qui trình ngắn ngày (35 ngày) Thỏ được tiêm kháng nguyên với liều tăng dần từ 0,5 ml đến 2 ml dịch vi khuẩn. Khoảng cách giữa 2 lần tiêm là 5 ngày. Sau khi tiêm mũi nhắc lại thứ 4 tiến hành lấy máu...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Luận văn : THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT KHÁNG HUYẾT THANH KHÁNG VI KHUẨN E. coli part 6 33 PHẦN 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN4.1. KẾT QUẢ 4.1.1. Định tính Để xác định thời điểm xuất hiện và thời gian tồn tại của kháng thể trong khá nghuyết thanh (KHT) ta thực hiện phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính với KHTthu được sau khi li tâm tách huyết thanh. 4.1.1.1. Qui trình ngắn ngày (35 ngày) Thỏ được tiêm kháng nguyên với liều tăng dần từ 0,5 ml đến 2 ml dịch vi khuẩn.Khoảng cách giữa 2 lần tiêm là 5 ngày. Sau khi tiêm mũi nhắc lại thứ 4 tiến hành lấymáu thu kháng thể, lấy máu 3 lần mỗi lần cách nhau 5 ngày và lần cuối cùng lấy hếtmáu. Trước khi gây miễn dịch và sau mỗi lần tiêm kháng nguyên vi khuẩn 4 ngày tiếnhành lấy máu kiểm tra kháng thể bằng phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính, kếtquả được trình bày bảng 4.1. Bảng 4.1 Kết quả thử phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính với kháng huyết thanh của thỏ 1 và thỏ 2 Thỏ Thỏ 1 Thỏ 2 Lấy máu Trước khi tiêm - - Sau mũi mẫn cảm - - Sau mũi nhắc lại 1 - - Sau mũi nhắc lại 2 + + Sau mũi nhắc lại 3 + + Sau mũi nhắc lại 4 + + (lấy máu lần 1) Lấy máu lần 2 + + Lấy máu lần 3 + + Ghi chú:  Lấy máu lần 1: 5 ngày sau khi tiêm nhắc lại lần 4  Lấy máu lần 2: 10 ngày sau khi tiêm nhắc lại lần 4  Lấy máu lần 3: 15 ngày sau khi tiêm nhắc lại lần 4 34 Dựa vào bảng kết quả ta thấy qui trình ngắn ngày được áp dụng trong nghiên cứuđã gây được đáp ứng miễn dịch trên thỏ, tạo kháng thể phát hiện được bằng phản ứngngưng kết nhanh trên phiến kính. Kháng thể xuất hiện trong kháng huyết thanh saumũi nhắc lại lần 2 (sau khi tiêm mũi mẫn cảm 14 ngày) và vẫn tồn tại cho đến lần lấymáu lần 3 (15 ngày sau khi tiêm nhắc lại lần cuối – mũi 4 ). 4.1.1.2. Qui trình dài ngày (154 ngày) Thỏ được tiêm kháng nguyên với liều từ cao xuống thấp. Khoảng cách giữa 2 lầntiêm là 28 ngày. Kể từ khi tiêm mũi nhắc lại thứ 3 tiến hành lấy máu thu kháng thể saumỗi lần tiêm kháng nguyên 14 ngày. Trước khi tiêm và sau khi tiêm mũi mẫn cảm, các mũi nhắc lại 14 ngày tiến hànhlấy máu để thử phản ứng ngưng kết xác định sự hiện diện của kháng thể trong khánghuyết thanh. Kết quả được trình bày qua bảng 4.2. Bảng 4.2 Kết quả thử phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính với kháng huyết thanh của thỏ 3, thỏ 4 và thỏ 5 Thỏ Thỏ 3 Thỏ 4 Thỏ 5 L.máu (liều tiêm 1 ml) (liều tiêm 1,5 ml) (liều tiêm 2 ml) Trước khi tiêm - - - Sau mũi mẫn cảm ± ± - Sau mũi nhắc lại 1 ± ± Chết Sau mũi nhắc lại 2 ± ± Sau mũi nhắc lại 3 ± + Sau mũi nhắc lại 4 + ++ Kết quả cho thấy sau khi tiêm mũi mẫn cảm 14 ngày thì kháng thể xuất hiện vàphản ứng ngưng kết thấy rõ hơn khi tiêm mũi gây mẫn cảm với liều cao hơn. Ở cácmũi nhắc lại tiếp theo thì phản ứng ngưng kết thấy càng rõ. Qui trình dài ngày được ápdụng trong nghiên cứu cũng đã tạo đáp ứng miễn dịch trên thỏ với kháng thể có thểphát hiện được bằng phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính 4.1.2. Định lượng Để xác định hiệu giá kháng thể ta thực hiện phản ứng ngưng kết chậm trong ốngnghiệm với KHT lúc đầu và KHT đã thẩm tích (KHT tủa trong ammonium sulfate vàthẩm tích) ở các độ pha loãng khác nhau. 35 Trong thí nghiệm này chỉ tiến hành định hiệu giá kháng thể của KHT thu được ởlần lấy máu thứ 1,2,3 sau mũi nhắc lại 4 (qui trình ngắn ngày) và sau mũi nhắc lạithứ 3, thứ 4 (qui trình dài ngày). 4.1.2.1. Qui trình ngắn ngày Bảng 4.3 Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể ngưng kết của kháng huyết thanh thỏ 1 và thỏ 2 Thỏ Thỏ 1 Thỏ 2 Trung bình Lấy máu Huyết thanh ...