Môi trường nuôi cấy vi sinh vật

Sự sinh trưởng của quần thể vi khuẩn trong môi trường dinh dưỡng nhân tạo được gọi là nuôi cấy (cultivation). Một kiểu nuôi cấy chỉ chứa một loại vi sinh vật được gọi là nuôi cấy thuần khiết (pure culture). Nuôi cấy hỗn hợp (mixed culture) là một loại nuôi cấy chứa nhiều hơn một loại vi sinh vật.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Môi trường nuôi cấy vi sinh vật Môi trường nuôi cấy vi sinh vậtSự sinh trưởng của quần thể vi khuẩn trong môi trường dinh dưỡng nhân tạođược gọi là nuôi cấy (cultivation). Một kiểu nuôi cấy chỉ chứa một loại visinh vật được gọi là nuôi cấy thuần khiết (pure culture). Nuôi cấy hỗn hợp(mixed culture) là một loại nuôi cấy chứa nhiều hơn một loại vi sinh vật.Các bước cần thiết cho nuôi cấy vi sinh vật là như sau:- Chuẩn bị môi trường nuôi cấy cho phép vi sinh vật có thể sinh trưởng tốtnhất.- Khử trùng môi trường để loại bỏ tất cả các cơ thể sống có trong bình nuôicấy.- Cấy vi sinh vật vào trong môi trường đã chuẩn bị.Để nuôi cấy vi sinh vật, môi trường nuôi cấy phải được chuẩn bị trong nhữngloại bình nuôi được sử dụng phổ biến nhất, chẳng hạn ống nghiệm, bình tamgiác, đĩa petri hoặc nồi lên men. Có hai loại môi trường nuôi cấy chính: môitrường tự nhiên (dựa trên kinh nghiệm) và môi trường tổng hợp (thành phầnhóa học xác định). Nói chung, các môi trường dinh dưỡng rất khác nhau vềhình thái (dạng rắn hoặc lỏng) và thành phần, tùy thuộc vào loại vi sinh vậtđược nuôi cấy và mục đích nuôi cấy.1. Môi trường tự nhiênLà những loại môi trường dựa trên cơ sở của kinh nghiệm, mà không dựa trênsự hiểu biết chính xác về thành phần các chất dinh dưỡng và tác động củachúng. Môi trường tự nhiên thường chứa peptone, dịch chiết thịt bò, hoặcdịch chiết nấm men. Khi sử dụng môi trường rắn, có thể bổ sung các tác nhânlàm rắn vào môi trường như gelatin hoặc agar. Ví dụ về môi trường rắn vàmôi trường lỏng dùng cho sinh trưởng của nhiều loại vi sinh vật dị dưỡng làtương đối đơn giản, phổ biến là canh dinh dưỡng (nutrient broth) và agar dinhdưỡng (nutrient agar). Thành phần của chúng như sau:- Canh dinh dưỡng: 3 g nước chiết thịt bò, 5 g peptone, 5 g dịch chiết nấmmen và nước bổ sung tới 1 L.- Agar dinh dưỡng: cùng thành phần như canh dinh dưỡng nhưng có thêm 15g agar và nước bổ sung tới 1 L.2. Môi trường tổng hợpMôi trường chứa các dung dịch pha loãng của hóa chất tinh khiết, được biếtlà các hợp chất hữu cơ và/hoặc vô cơ. Chúng thường được sử dụng cho cácmục đích nghiên cứu hơn là để sản xuất. Môi trường có thể đơn giản như làmuối ammonium vô cơ cộng với các muối khoáng và đường, hoặc phức tạpnhư là casein tinh sạch được bổ sung thêm các vitamin, muối khoáng vàđường.3. Khử trùngMôi trường dinh dưỡng thích hợp được chọn để nuôi cấy một loại vi sinh vậtđặc biệt sẽ được rót vào các bình nuôi cấy. Nếu sử dụng các ống nghiệm hoặcbình tam giác, thì chúng phải được úp bằng một nắp đậy thích hợp cho phépcó sự trao đổi khí với khí quyển nhưng vẫn ngăn cản các cơ thể ngoại lai rơivào môi trường. Các loại nắp khác nhau được dùng trong phòng thí nghiệmbao gồm: nút bông, bọt plastic, nắp vặn, nắp kim loại và giấy nhôm.Môi trường sau đó phải được khử trùng để loại bỏ tất cả các cơ thể sống trongbình chứa môi trường. Phương pháp khử trùng phổ biến nhất là khử trùngbằng hơi nước dưới áp suất cao trong nồi khử trùng (autoclave). Nói chung,autoclave hoạt động ở áp suất 15 psi ở 121oC. Thời gian khử trùng tùy thuộcvào bản chất của nguyên liệu, loại bình chứa và thể tích của môi trường. Vídụ, đối với ống nghiệm chứa môi trường lỏng có thể khử trùng từ 15-20 phútở 121oC.4. Nuôi cấyNuôi cấy là sự tiếp mẫu (vi sinh vật) vào bình chứa môi trường dinh dưỡngvô trùng. Sự tiếp mẫu khi nuôi cấy trên môi trường rắn có agar được thựchiện bằng que cấy có vòng kim loại ở đầu (metal wire hoặc loop) được khửtrùng nhanh trước khi sử dụng bằng cách đốt nóng trên đèn cồn.Cấy chuyển trong nuôi cấy lỏng thường được thực hiện bằng Pasteur pipette.Sự tiếp mẫu thường được tiến hành trong tủ cấy vô trùng (laminar flowcabinet) để giảm thiểu nguy cơ nhiễm bẩn. Điều quan trọng là phải nắm vữngcác kỹ thuật hút pipette thích hợp cho việc tiếp mẫu và lấy mẫu trong quátrình nuôi cấy.