Nghiên cứu chẩn đoán nhanh Staphylococci và tính đề kháng Methicillin của chúng bằng kỹ thuật PCR đa mồi

Đê tài “Nghiên cứu chân đoán nhanh Staphylococci và tính đề kháng Methiciliin của chúng bằng kỹ thuật PCR đa mồi” nhằm mục tiêu xây dựng quy trình chẩn đoán nhanh staphylococci, xác định gen mã hóa FemA, yếu tố độc !ực Coagulase và tính đề kháng kháng sinh Methicillin của chúng bằng kỹ thuật PCR và so sánh với các phương pháp chẩn đoán Staphylococci phòng thí nghiệm truyền thống, phát hiện Coagulase và tính đề kháng kháng sinh Methicillin của chúng.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu chẩn đoán nhanh Staphylococci và tính đề kháng Methicillin của chúng bằng kỹ thuật PCR đa mồi NGHIÊN cứ u CHẨN ĐOÁN NHANH STAPHYLOCOCCI VÀ TÍNH ĐÈ KHÁNG METHICILLIN CỦA CHÚNG BẰNG KỸ THUẬT PCR ĐA MỒI Những người thực hiện: Trần Thanh Loan, Trương Đình An Sơn Bộ môn Vi sinh, Trường Đại học Kỹ thuật Y Dược Đà Nắng Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS. Trần Đình Bỉnh Bộ môn Vi sinh, Trường Đại học Y Dược Huế ĐẶT VÁN ĐỀ - Các loại môi trường nuôi cáy và thực hiện kháng stảphyỉococci ỉà một tác nhân gây nhiều nhiễm sinh đồ: Môi trường nuôi cấy: íhạch máu, thạch khuẩn thường gặp, chúng có thể gây nên nhiều bệnh thưởng, Chapman, BHI, Muelíer HỈnton Agar, môi lý khác nhau như nhiễm khuẩn tiêu hóa, nhiễm khuẩn ỉrường sinh vậí hóa học... da, nhiễm khuẳn đường tiết niệu, nhiêm khuẩn vết - Các loại vật iíệu khác: Thuốc nhuộm Gram, Huyết thương, vết bỏng, viêm nội tâm mạc, nhiễm khuẩn tương thỏ, H20 2 3%, Nước muối sinh lý vô khuẩn, các huyểt, viêm tủy xương.,.[2], [3], [4], [5]. Các nhiễm loại đĩa kháng sinh Oxacillin và Cefocitin. khuần do staphyiococci thương điều irị khó khăn do vi - Các loại hóa chất để thực hiện PCR: Agarose, khuển kháng íhuốc, rất nhiều cac staphylococci kháng duncj dịch điện di, Ethidium Bromide, thang DNA thuốc, đa kháng thuốc được phân lập từ bệnh nhân. chuan. Các vi khuẩn kháng Methiciliỉn íhường kháng với nhiều 2.2. Thiết bị, dụng cụ thuốc khác, nên nó được xem như là “siêu vi - Các loại thiết bị: Tu ấm 350C và 370C, máy iắc khuẩn”[2], [3], [6]. Việc chẩn đoản sớm sự nhiễm rung (Vortex), tủ lạnh, các loại máy ly tâm, tủ an íoàn khuẩn do staphylococci và tính kháng thuốc của sinh học, máy luân nhiệt, buồng điện di, bàn đèn đọc chúng có vai trò rất quan trọnp trong điều trị. Nhiều kết quả điện di... nghiên cứu ứng dụng các yểu to tạo nên độc lực mạnh - Các loại dụng cụ: Đèn cồn, kẹp đĩa kháng sinh, cua Staphylococci như các yếu tố xâm nhiêm, sinh độc thước đo đường kính vỏng ức chế, khuyên cấy, tăm íố, sinh các men phân huy protein, chất diệt bạch bông vô khuẩn, các loại vật iỉệu đề thực hiện PCR... cầu...Trong đó, FemA, Coagulase là những chỉ thị 3. Phương pháp nghiên cứu thường dùng để phát hiện các staphylococci có độc 3.1. Kỹ thuật nuôĩ cắy và định danh vi khuẩn lực ờ các phòng thí nghiệm. Staphylococci Tại Việt Nam, các nghiên cửu liên quan đến chần Các bệnh phẩm được cấy trên các môi trường đặc, đoán, phát hiện độc lực của các staphylococci và tính lỏng tùy theo yêu cầu kỹ thuật của từng loại mẫu kháng Methỉciliin bằng các phương pháp truyền thống, ngNệm. Khi có khuẩn lạc nghi ngờ (màu vàng trên tuy nhiên các nghiên cứu ve kỹ thuạt sinh học phân tư Chapman, tan máu B trên thạch máu...), làm phiến đe phát hiện gen mã hóa FemA, yếu tố độc iực của phếí nhuộm Gram kiểm tra hình thải. Tiến hành phân các Staphylococci như Coagulase hoặc gen mecA đề lập và định danh theo quy trình truỵền thống chẩn kháng Methicillin của các staphylococci chưa có nhiều đoán các Staphylococci là: cầu khuan Gram dương t2]. ~ đứng đám, catalase dương tính, xác định Đê tài: “Nghiên cứu chân đoán nhanh Staphylococci khi có các tiêu chuẩn sau: sắc íố vàng, Staphylococci và tính đề kháng Methiciliin của chúng lên men đường mannit, có coagulase dương tính. Các bằng kỹ thuật PCR đa mồi” nham mục tiêu xây dựng Síaphyiococci coagulase âm tính khi có hay không lên quy trỉnh chẩn đoán nhanh staphylococci, xác định men đường mannit, coaguỉase âm [2J,[33- gen mã hóa FemA, yếu íố độc !ực Coagulase và tinh 3.2. Kỹ thuật phát hiện vi khuẩn staphylococci đề kháng kháng sinh Methicillin của chúng bằng kỹ kháng Methicillin qua trung gian mecA bằng kỹ thuật PCR và so sánh với các phương pháp chẩn thuật sử dụng đĩa Cefoxitin (Theo CLSl 2011): Với đoán Staphylococci phòng thí nghiệm truyền thống, khoanh giấy cefoxitin 30ụg tren môi trường Mueiler phát hiện Coagulase và tính đe kháng kháng sinh Hinton Agar, trong Điều kiện nuôi cấy: 33-35 °c/16 - Methicilỉin của chúng. 18 giờ. Đọc kết quả: ắ 21 mm = mecA diPơng tính; ằ ĐÓI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 22 mm = mecA âm tính. [1] 1 . Đối tượng nghiên cứu 3.3. S ử dụng kỹ thuật PCR tìm gen mã hóa - 80 chủng VI khuẩn của các staphylococci gồm 45 FemA, Coagulase và gen mecA chủng S.aureus và 35 chủng staphyococci coaguỉase - Tách chiết DNA từ khuẩn lạ ...