Nghiên cứu chế tạo test thử nhanh phát hiện độc tố vi khuẩn tả

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm chế tạo que thử nhanh phát hiện độc tố vi khuẩn tả. Kết quả nghiên cứu cho thấy học viện Quân y đã bước đầu chế tạo thành công que thử nhanh phát hiện độctố CTX của vi khuẩn tả. Que thử nhanh có giá thành thấp, dễ sử dụng, khả năng áp dụng cao.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu chế tạo test thử nhanh phát hiện độc tố vi khuẩn tảTẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2015NGHIÊN CỨU CHẾ TẠO TEST THỬ NHANH PHÁT HIỆNĐỘC TỐ VI KHUẨN TẢPhạm Đức Minh*; Hoàng Văn Lương*TãM T¾TMục tiêu: chế tạo que thử nhanh phát hiện độc tố vi khuẩn tả (VKT). Đối tượng và phươngpháp nghiên cứu: sử dụng kháng thể đơn dòng kháng độc tố CTX của VKT. Que thử dựa trênnguyên lý phản ứng miễn dịch kháng nguyên - kháng thể xảy ra trên màng mỏng. Có đối chiếuvới kỹ thuật ELISA trên mẫu nhiễm CTX. Kết quả: que thử có khả năng phát hiện được độc tốCTX ở nồng độ 50 ng/ml và có độ đặc hiệu 100%. Ở nồng độ 50 ng/ml và 25 ng/ml của độc tốCTX trên mẫu thử, que thử có độ nhạy lần lượt là 95% và 53% so với kỹ thuật ELISA. Que thửnhanh có giá thành thấp, dễ sử dụng, khả năng áp dụng cao trong thực tiễn y học và cộngđồng. Kết luận: Học viện Quân y đã bước đầu chế tạo thành công que thử nhanh phát hiện độctố CTX của VKT. Que thử nhanh có giá thành thấp, dễ sử dụng, khả năng áp dụng cao.* Từ khóa: Vibrio cholerae; Độc tố tả; Que thử nhanh.Studying Development of Rapid Test to Detect Vibrio Cholerae ToxinSummaryObjective: Production of test strips for rapid detection of Cholera toxin. Subjects and methods:The study used monoclonal antibodies against CTX toxin of Vibrio cholerae. The strips basedon the principle of antigen-antibody immune response occur on thin films. The result will becompared to ELISA in samples infected with CTX. Results: The strips have the ability to detectCTX toxin at concentrations of 50 ng/mL and a specificity of 100%. At the concentration of50 ng/mL and 25 ng/mL of CTX toxin in the sample, the test strip has a sensitivity of 95%and 53%, respectively, compared to ELISA. The strips are low cost, easy to use, and have highapplicability in medicine practice and community. Conclusion: Military Medical University hasinitial successfully made the rapid test strips to detect CTX toxin of Vibrio cholerae. The stripsare low cost, easy to use, and have high applicability in medicine practice and community.* Key words: Vibrio cholerae; CTX; Rapid test.ĐẶT VẤN ĐỀVi khuẩn tả là một trong những mầmbệnh nguy hiểm, do nó có thể sinh ra độctố gây dịch tiêu chảy cấp [1, 7]. Độc tố VKTcòn có nguy cơ sử dụng trực tiếp như làmột vũ khí sinh học nguy hiểm [4]. Hiệntại Việt Nam đã có vắcxin phòng bệnh tả,nhưng hiệu quả chỉ đạt từ 66 - 90% [6]và chưa phổ biến. Chẩn đoán nhanh và* Häc viÖn Qu©n yNgười phản hồi (Corresponding): Ph¹m §øc Minh (drminh103@yahoo.com)Ngày nhận bài: 15/01/2015; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 22/01/2015Ngày bài báo được đăng: 26/01/201518TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2015chính xác mẫu có chứa độc tố CTX củaVKT sẽ giúp ích cho quá trình phát hiện,điều trị và dự phòng ngộ độc do độc tốcủa VKT [3, 4]. Hiện nay, que thử nhanhđã và đang chiếm ưu thế trong ứng dụngy học và các lĩnh vực liên quan [3].Que thử nhanh được Singer J M vàPlotz C M (1956) [8] nghiên cứu và pháttriển, cho đến nay đã cải tiến nhiểu. Vớiưu điểm giá thành thấp, dễ áp dụng, độchính xác cao, que thử nhanh đang làmục tiêu của nhiều phòng thí nghiệmcũng như các công ty sản xuất sản phẩmliên quan đến sinh học phân tử. Học việnQuân y đang quản lý một dây chuyền sảnxuất que thử nhanh. Hệ thống này đượcnhập từ Công ty Arista (Hoa Kỳ), có khảnăng hoạt động tự động hoàn toàn hoặcbán tự động.Hiện tại có một số phương pháp thườngdùng để phát hiện VKT và độc tố trongthực phẩm, bao gồm nuôi cấy, phươngpháp ELISA, phương pháp khuếch đạigen (PCR), que thử nhanh... [1, 3, 4].Trong đó, que thử có ưu thế trong sànglọc và được ưu tiên sử dụng. Xuất phát từnhững yêu cầu đó, đề tài này thực hiệnnhằm: Chế tạo que thử nhanh phát hiệnđộc tố CTX của VKT.ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU1. Đối tượng nghiên cứu.Trong nghiên cứu này chúng tôi chọncác nhóm vi khuẩn sau:- Độc tố chuẩn: CTX code G-117 Lot #P5351 (Enza Life Sciences).19- Độc tố đối chứng: độc tố không chịunhiệt LT (heat labile toxin) của vi khuẩn E. coli;độc tố ruột SEB (Staphylococcal enterotoxinB) của vi khuẩn Staphylococcus aureus.2. Vật liệu nghiên cứu.* Dụng cụ, thiết bị:Dụng cụ và thiết bị chuyên dụng củaKhoa Vi sinh vật và Trung tâm nghiên cứuY Dược học - Học viện Quân y. Hệ thốngsản xuất que thử nhanh của Hãng Arista(Hoa Kỳ).* Kháng thể:Bảng 1: Các kháng thể sử dụng trongnghiên cứu.TÊNKHÁNG THỂVẬTCHỦTYPE:KÝ HIỆUISOTOPE (Catalog #)MAb to CholeraToxinMonoclonalAntibody toCholera Toxinbeta subunitMAb to CholeraToxinMonoclonalAntibody toCholera Toxinbeta subunitChuộtMAb-IgG1 C01593M MeridianChuộtMAb-IgG1 C01594M MeridianAnti Mouse IgGDêIgGABCAM0500HÃNGSẢNXUẤTABCAMCó 3 kháng thể được gắn lên màng:kháng thể phát hiện (KT1), kháng thể bắtgiữ (KT2) và kháng thể kiểm tra (KT3).Kháng thể phát hiện (Detection Antibody)là C01594M, sẽ được gắn với hạt vàng,sau đó gắn lên màng chứa cộng hợp(Conjugate pad) ...