Nghiên cứu tác dụng bảo vệ của kháng thể IgY kháng vi khuẩn tả và kháng độc tố tả trên chuột nhất trắng sơ sinh

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm khảo sát tác dụng bảo vệ của kháng thể IgY nguồn gốc lòng đỏ trứng gà gây miễn dịch với kháng nguyên vi khuẩn tả và kháng nguyên độc tố tả trên chuột nhắt trắng sơ sinh nhiễm vi khuẩn tả thực nghiệm.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu tác dụng bảo vệ của kháng thể IgY kháng vi khuẩn tả và kháng độc tố tả trên chuột nhất trắng sơ sinhTẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2015NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG BẢO VỆ CỦA KHÁNG THỂ IgYKHÁNG VI KHUẨN TẢ VÀ KHÁNG ĐỘC TỐ TẢTRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG SƠ SINHHoàng Trung Kiên*; Lê Thu Hồng**; Nguyễn Đặng Dũng*TÓM TẮTMục tiêu: đánh giá tác dụng bảo vệ của kháng thể IgY kháng vi khuẩn tả (VKT) và IgY khángđộc tố tả (ĐTT) trên động vật nhiễm VKT V. cholerae thực nghiệm. Phương pháp: chuột nhắttrắng sơ sinh (3 - 5 ngày tuổi) được gây nhiễm VKT theo đường tiêu hóa, sau đó uống dungdịch chứa kháng thể IgY kháng VKT hoặc kháng ĐTT Đánh giá tác dụng bảo vệ của kháng thểIgY bằng tỷ lệ và thời gian sống thêm của nhóm chuột nhiễm VKT được uống kháng thể so vớinhóm đối chứng (không uống kháng thể). Kết quả: 60 giờ sau khi gây nhiễm VKT, 40% chuộtuống kháng thể IgY kháng VKT và 23,3% chuột uống kháng thể IgY kháng ĐTT còn sống (so với0% chuột trong nhóm đối chứng). Kết luận: kháng thể IgY kháng VKT và IgY kháng ĐTT có tácdụng bảo vệ đối với chuột nhắt trắng sơ sinh nhiễm VKT.* Từ khóa: IgY; Vi khuẩn tả; Độc tố tả; huột nhắt sơ sinhProtective Effect of Anti - V. cholerae and Anti-choleratoxin IgYs inSuckling Mice Challenged with Live V. choleraeSummaryObjectives: To evaluate in vivo protective effect of anti - V. cholerae and anti-choleratoxinIgYs in suckling mice challenged with live V. cholerae. Methods: IgY antibodies was extractedfrom eggs laid of hens immunized with V.cholerae or with choleratoxin antigens. Protectiveeffect of the antibodies in suckling mice orally infected with live V. cholearae were investigatedusing recorded survival time of mice receiving the antibodies or placebo at the time point that allnegative control mice died. Results: 60 hours subsequent to being infected with V. cholerae,100% of mice receiving placebo died, meanwhile 40% of mice receiving anti - V. cholerae IgYand 23.6% of mice receiving anti-choleratoxin IgY still survived. Conclusions: Anti - V. cholerae IgYand anti-choleratoxin IgY exerted protective effect on suckling mice challenged with live V. cholerae.* Key words: IgY; V. cholerae; Choleratoxin.ĐẶT VẤN ĐỀBệnh tả là bệnh truyền nhiễm do VKT(Vibrio cholerae) gây ra sau khi nhiễmVKT vào cơ thể người theo đường tiêu hóaTheo thống kê của Tổ chức Y tế Thế giới(WHO) (2014), trong năm 2013 đã ghi nhận129 064 trường hợp mắc bệnh tả tại 47quốc gia thuộc tất cả các châu lục, với 2.102trường hợp tử vong, tỷ lệ tử vong là 1,63% [3]* Häc viÖn Qu©n y** Bệnh viện Quân y 103Người phản hồi (Corresponding): Nguyễn Đặng Dũng (dzungmd@yahoo.com)Ngày nhận bài: 10/01/2015; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 22/01/2015Ngày bài báo được đăng: 29/01/201526TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2015Trong những năm gần đây, Việt Namlà một trong những quốc gia có sự lưuhành của bệnh tả: năm 2008 có 853 cabệnh tả; năm 2009 có 479 ca, trong đó cómột người chết; năm 2010 có 606 ca vànăm 2011 có 3 ca mắc tả được báo cáo[4]. Sử dụng kháng sinh trong điều trịnhiễm VKT góp phần làm giảm thời gianđiều trị Tuy nhiên, đã xuất hiện một sốchủng VKT kháng thuốc kháng sinh [5, 6]Việc nghiên cứu phát triển các biện phápdự phòng và điều trị bệnh tả luôn là mộttrong những hướng nghiên cứu đượcquan tâmKháng thể IgY là lớp kháng thể quantrọng có trong huyết thanh các loài giacầm, được vận chuyển sang lòng đỏtrứng gia cầm. Nhiều nhóm nghiên cứuđã thu được kháng thể IgY đặc hiệu vớikháng nguyên bằng cách gây miễn dịchcho gà mái, sau đó phân lập kháng thểIgY từ trứng gà được gây miễn dịch.Nghiên cứu của chúng tôi cũng đã thànhcông trong việc chế tạo IgY đặc hiệu vớimột số vi sinh vật gây bệnh trên người vàđộng vật bằng phương pháp phân lậpkháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà đượcgây miễn dịch với kháng nguyên vi sinhvật Nghiên cứu này nhằm: Khảo sát tácdụng bảo vệ của kháng thể IgY nguồngốc lòng đỏ trứng gà gây miễn dịch vớikháng nguyên VKT và kháng nguyên ĐTTtrên chuột nhắt trắng sơ sinh nhiễm VKTthực nghiệm.ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU1. Đối tượng, vật liệu nghiên cứu.- Chuột nhắt trắng sơ sinh từ 3 - 5ngày tuổi (150 con) không phân biệt giới,27do an ung cấp Động vật th nghiệm,Học viện Quân y cung cấp- VKT (chủng V50) do Khoa Vi sinh Y học,Bệnh viện Quân y 103 cung cấp, đượcphân lập từ phân của BN mắc bệnh tả tạiViệt Nam năm 2006- Phân lập lần lượt lgY từ lòng đỏtrứng gà đã gây miễn dịch với VKT, ĐTT,với tá chất Freund và gà không gây miễndịch Tách chiết IgY từ lòng đỏ trứng theophương pháp kết tủa trong nước cất lạnhvà muối amoni sulfate, quy tr nh này đượcmô tả trong nghiên cứu trước đây củachúng tôi [1]- Protein GM1, ĐTT chuẩn, kháng thểcộng hợp HRP-IgG cừu kháng IgY (Sigma,Hoa Kỳ).- ác hóa chất thông thường khácdùng cho phản ứng ELISA.2. Phương pháp nghiên cứu.* Kiểm tra hoạt tính in vitro của khángthể IgY:Khảo sát hoạt t nh kháng thể IgYkháng VKT và IgY kháng ĐTT bằng kỹthuật ELISA: kháng nguyên VKT siêunghiền hoặc ĐTT chuẩn gắn vào cácgiếng của khay phản ứng ELISA 96giếng; pha loãng 100 l dung dịch khángthể IgY ở nồng độ khác nhau, bổ sungvào các giếng phản ứng Kháng thể IgYđặc hiệu kháng nguyên được phát hiệnbằng cộng hợp kháng thể cừu kháng IgYgà đánh dấu enzym HRP, với sự có mặtcủa cơ chất tạo mầu OPD; đo mật độquang học của dung dịch phản ứng trongtừng giếng tại bước sóng 450 nm bằngmáy đo quang phổ DTX 880 (BeckmanCoulter, Hoa Kỳ).TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2015* Khảo sát tác dụng bảo vệ của khángthể IgY đặc hiệu với VKT và với ĐTT trênmô hình gây bệnh tả thực nghiệm:Khảo sát tác dụng bảo vệ của khángthể IgY đặc hiệu với VKT và với ĐTTbằng mô h nh gây bệnh tả thực nghiệmtrên chuột nhắt trắng sơ sinh (3 - 5 ngàytuổi) theo mô tả của Kazuyuki và S(2010) [2] Tách 150 chuột nhắt trắngsơ sinh khỏi chuột mẹ trước khi tiếnhành th nghiệm 3 giờ, sau đó chia thành5 nhóm (mỗi nhóm 30 con) 4 trong số5 nhóm chuột được uống ...