Nghiên cứu hình thái vi thể khối u biểu mô thanh quản người trên chuột thiếu hụt miễn dịch

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết này nhằm đánh giá đặc điểm hình thái vi thể mô u trên chuột thiếu hụt miễn dịch mang khối ung thư biểu mô thanh quản người. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết của tài liệu.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu hình thái vi thể khối u biểu mô thanh quản người trên chuột thiếu hụt miễn dịchTẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2013NGHIÊN CỨU HÌNH THÁI VI THỂ KHỐI U BIỂU MÔTHANH QUẢN NGƢỜI TRÊN CHUỘT THIẾU HỤT MIỄN DỊCHNguyễn Văn Ba*TÓM TẮTUng thư biểu mô thanh quản là bệnh ác tính thường gặp trong ung thư đầu cổ. Vớinghiên cứu này, chúng tôi đã ghép tế bào (TB) ung thư thanh quản người dòng Hep-2vào dưới da đùi để tạo khối ung thư phát triển trên chuột thiếu hụt miễn dịch “nude mice”.Kết quả cho thấy chuột hình thành khối u sau 1 tuần ghép 106 TB ung thư. Hình thái vi thểtrên tiêu bản nhuộm HE 4 tuần sau gây u cho thấy mô u có hình ảnh ung thư biểu mô TBvảy thanh quản, chưa có di căn tới các cơ quan.* Từ khóa: Ung thư biểu mô thanh quản Hep-2; Chuột thiếu hụt miễn dịch; Ghép dị loài.MORPHOLOGICAL STUDY OF TUMOR TISSUE IN NUDE MICEBEARING HUMAN LARYNGEAL CARCINOMASUMMARYLaryngeal carcinoma is a common malignancy in head and neck cancers. In this study,we have implanted human laryngeal carcinoma cells (Hep-2 cells line, supplied by ATCC,the USA) into athymic mice (Bal B/c immudeficient mice, namey Foxn1nu, purchaged fromCharles-River Co., the USA) by subcutaneous injection of the cancer cells (with 1 x 106cells per one mouse) on one thigh of the mice. The results showed that one week afterimplatation, a tumor developed at the side of injection; histological analysis of the tumortissue (H&E staining) 4 weeks after implatation showed typical features of laryngeal squamouscell carcinoma, without spread of the implanted cancer cells to other organs (liver, lung,kidney and spleen) of the animal.* Key words: Human laryngeal carcinoma Hep-2; Nude mice; Genograft.ĐẶT VẤN ĐỀUng thư thanh quản là bệnh lý ác tínhthường gặp đứng thứ hai trong ung thưvùng đầu cổ sau ung thư vòm. Ở Mỹ,ung thư thanh quản chiếm 2% với khoảng3.700 người chết năm 2002 [3]. Tại ViệtNam, ung thư thanh quản đứng hàng thứchín (3%) trong các ung thư toàn thân.Bệnh thường gặp nhiều ở nam (80%) lứatuổi 40 - 60, nhưng xu hướng hiện nay tỷlệ người trẻ mắc bệnh ngày càng nhiều [2].* Học viện Quân yNgười phản hồi (Corresponding): Nguyễn Văn Ba (bsnguyenvanba@yahoo.com)Ngày nhận bài: 10/9/2013; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 20/10/2013Ngày bài báo được đăng: 8/11/201398TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2013Mô hình ghép dị loài ung thư mô tếbào vảy thanh quản có vai trò quan trọngtrong nghiên cứu ung thư. Năm 2009,Myers và CS [5] tạo thành công khốiung thư loại biểu mô TB vảy thanh quảnbằng cách tiêm dòng TB Hep-2 lấy từkhối u trên người vào lưỡi của chuộtnude và nhận thấy có sự di căn đến hạchbạch huyết vùng cổ và di căn phổi.Các tác giả thấy khi tiêm TB vào lưỡichuột, khối u có kích thước lớn hơn sovới tiêm dưới da chuột nude.Tại Việt Nam, chưa có nhiều nghiêncứu nhiều về mô hình ung thư thanhquản. Do vậy, để đáp ứng yêu cầu phụcvụ nghiên cứu tiền lâm sàng ung thưthanh quản, chúng tôi tiến hành đề tàinhằm: Đánh giá đặc điểm hình thái vi thểmô u trên chuột thiếu hụt miễn dịch mangkhối ung thư biểu mô thanh quản người.ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU1. Đối tượng nghiên cứu.- 10 chuột nhắt BALB/c thiếu hụt miễndịch, không có TB lympho T (nude mice,Foxn1nu) được nhập khẩu từ Công tyCharles-River (Hoa Kỳ).- Môi trường nuôi cấy và bảo quảnTB: môi trường EMEM (Eagles MinimumEssential Medium), Catalog No. 30-2003,ATCC bổ sung 10% FBS và 1% khángsinh penicillin và streptomycine.- Dòng TB ung thư biểu mô thanh quảnngười Hep-2, mua từ công ty ATCC,Hoa Kỳ.2. Phương pháp nghiên cứu.* Nuôi cấy và ghép TB ung thư vàochuột:Nuôi cấy TB ung thư biểu mô thanhquản người trong môi trường EMEM,bổ sung 10% FBS và 1% kháng sinhpenicillin và streptomycine. Mỗi chainuôi cấy diện tích 75 cm2 chứa 106 TB.Nuôi cấy tăng sinh TB và thay môitrường 3 lần/tuần ở điều kiện nhiệt độ370C, CO2 5%. Khi TB phát triển đạt75 - 80% diện tích, tiến hành cấy chuyểnsang chai mới. Trước ghép, rửa TB 2 lầnbằng dung dịch PBS 1X, sau đó, táchbằng dung dịch Trypsin-EDTA 1X. Hútdung dịch, cấy TB ung thư biểu mô thanhquản người đã chuẩn bị vào bơm tiêm1 ml với số lượng 107/ml. Cố định chuộtnude và tiêm 0,1 ml dưới da đùi phải(106 TB/chuột). Quá trình thao tác thựchiện trong điều kiện vô trùng tuyệt đối.* Theo dõi và xác định sự hình thànhkhối ung thư trên chuột:- Đánh giá khối u, theo dõi sự pháttriển tại vị trí tiêm (đùi phải) 2 lần/tuần,bằng quan sát, sờ nắn và đo kích thướckhối u bằng thước chính xác NSK.- Xác định kích thước khối u: đo khốiu theo hai kích thước dài x rộng bằngthước chính xác NSK (Nhật Bản), 2 lần/tuần. Xác định kích thước u theo phươngpháp của Yamaura và CS [8].101TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2013- Theo dõi trọng lượng chuột 2 lần/tuần,xác định biến đổi trọng lượng chuột giữacác lần cận kế tiếp.* Xác định hình thái vi thể khối ungthư trên chuột:- Sau 4 tuần tiến hành giết chuột, bóctách khối u và các tạng (ga ...