Nghiên cứu phát triển hệ thống sắc kí miễn dịch cạnh tranh phát hiện nhanh các độc tố ruột tụ cầu trong sữa

Trong nghiên cứu này, các tác giả nghiên cứu chế tạo que thử phát hiện nhanh đồng thời năm loại độc tố ruột tụ cầu thường gặp là SEA, SEB, SEC1, SED và SEE trong sữa dựa trên kỹ thuật sắc ký miễn dịch cạnh tranh sử dụng kháng thể đa dòng IgY do chúng tôi tự sản xuất. Ưu điểm cơ bản của kháng thể IgY so với IgG là có thể sản xuất với liều lượng lớn, giá thành rẻ và đặc biệt là không có phản ứng với protein A
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu phát triển hệ thống sắc kí miễn dịch cạnh tranh phát hiện nhanh các độc tố ruột tụ cầu trong sữa Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên và Công nghệ, Tập 31, Số 1 (2015) 23-31 Nghiên cứu phát triển hệ thống sắc kí miễn dịch cạnh tranh phát hiện nhanh các độc tố ruột tụ cầu trong sữa Trần Thị Sao Mai1,*, Nguyễn Thị Khánh Trâm2, Lê Quang Hòa3 1 Trường Đại học Kỹ thuật Y tế Hải Dương 2 Viện Dinh dưỡng Quốc gia 3 Viện Công Nghệ Sinh học và Công Nghệ Thực Phẩm, Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội Nhận ngày 8 tháng 01 năm 2015 Chỉnh sửa ngày 22 tháng 01 năm 2015; Chấp nhận đăng ngày 20 tháng 3 năm 2015 Tóm tắt: Các độc tố ruột của tụ cầu là một trong những nguyên nhân chủ yếu gây ngộ độc thực phẩm trên thế giới. Mục tiêu của nghiên cứu này là tạo que thử phát hiện nhanh và đồng thời các độc tố ruột tụ cầu thường gặp, bao gồm SEA, SEB, SEC1, SED và SEE trong sữa dựa vào kỹ thuật sắc ký miễn dịch cạnh tranh. Để đạt mục tiêu này, độc tố ruột tụ cầu SEC1 được sản xuất và tinh sạch bằng con đường tái tổ hợp và sau đó được cố định lên hạt nano cac bon để tạo cộng hợp phát hiện. Bên cạnh đó, kháng thể đa dòng IgY kháng các độc tố ruột tụ cầu (SEA, SEB, SEC1, SED và SEE) và IgY kháng Bovine serum albumin (BSA) cũng được tạo ra và tinh sạch trước khi được in lên vạch thử nghiệm và vạch kiểm chứng của que thử sắc ký miễn dịch cạnh tranh. Các kết quả nghiên cứu về việc sản xuất SEC1 trong tế bào Escherichia coli BL21 đã chỉ ra rằng điều kiện thích hợp để thu nhận độc tố này là nuôi lắc 150 vòng/phút ở 30oC; nồng độ chất cảm ứng isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) là 0,5 mM; thời gian cảm ứng là 8 giờ. Các thông số thích hợp để tạo que thử cũng đã được xác định là: lượng kháng thể IgY kháng các độc tố ruột tụ cầu (SEA, SEB, SEC1, SED và SEE) cần cố định tại vạch thử nghiệm là 0,6 µg/que thử có độ rộng 4 mm; lượng kháng nguyên cộng hợp cần sử dụng là 2 µl. Ngưỡng phát hiện của que thử đối với các độc tố SEA, SEB và SED trong sữa là 30 ng/ml; đối với SEC1 và SEE là 9 ng/ml. Toàn bộ thời gian phân tích diễn ra trong 30 phút. Từ khóa: Độc tố ruột tụ cầu, kỹ thuật sắc ký miễn dịch, sữa, que thử. 1. Đặt vấn đề∗ nay, 22 loại độc tố ruột tụ cầu đã được thống kê bao gồm các độc tố có hoạt tính gây nôn và các Nguyên nhân ngộ độc thực phẩm do tụ cầu protein giống độc tố ruột tụ cầu chưa được kiểm là người bị ngộ độc đã tiêu thụ các độc tố ruột tra hoạt tính gây nôn [1]. Trong số các độc tố tụ cầu (staphylococcal enterotoxin - SE) tồn tại ruột tụ cầu trên, 5 loại độc tố ruột tụ cầu bao sẵn trong thực phẩm, do các chủng tụ cầu có gồm SEA, SEB, SEC, SED và SEE được biết là coagulase dương tính, đặc biệt là tụ cầu vàng nguyên nhân chủ yếu gây ngộ độc thực phẩm. (Staphylococcus aureus) tổng hợp nên. Cho đến Theo thống kê ở Anh từ năm 1969 đến 1990, _______ 79% các ca ngộ độc thực phẩm có nguyên nhân ∗ Tác giả liên hệ. ĐT: 84-936391579. do độc tố ruột tụ cầu: chỉ tính riêng độc tố SEA Email: t.saomai@yahoo.com.vn 23 24 T.T.S. Mai và nnk. / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên và Công nghệ, Tập 31, Số 1 (2015) 23-31 đã gây ra 56,9% các vụ ngộ độc thực phẩm, cả của tụ cầu (SEC1) được cung cấp bởi phòng hai độc tố SEA và SED (15,4%), SEB (3,4%), Công nghệ Gen, Trung tâm Nghiên cứu và Phát SEC (2,5%), cả SEB và SED (1,1%) [2]. triển Công nghệ Sinh học, Viện Công nghệ Hiện nay, để phát hiện độc tố ruột tụ cầu, Sinh học và Công nghệ Thực phẩm, Trường người ta thường sử dụng các sinh phẩm thương Đại học Bách khoa Hà Nội. Các độc tố ruột tụ mại dựa trên kỹ thuật ELISA như cầu chuẩn SEA, SEB, SEC1, SED và SEE có RIDASCREEN SET (R-Biopharm, Darmstadt, nguồn gốc từ Toxin Technology, Mỹ. Các hóa Đức) và VIDAS (BioMérieux, Marcy L´Etoile, chất tinh khiết khác có nguồn gốc từ Sigma. Pháp) [3]. Những sinh phẩm này thường sử 2.2. Phương pháp nghiên cứu dụng kháng thể đa dòng và kháng thể đơn dòng từ thỏ, từ chuột [4]. Tuy nhiên, vùng Fc của 2.2.1. Biểu hiện và tinh sạch protein SEC1 kháng thể IgG từ thỏ và chuột phản ứng mạnh ...