Nghiên cứu sự phát triển phôi sau sinh thiết để chẩn đoán di truyền trước chuyển phôi

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm khảo sát sự phát triển phôi sau sinh thiết. Qua nghiên cứu cho thấy phát triển của 50 phôi ngày 3 sau sinh thiết một phôi bào không ảnh hưởng đến phát triển phôi tại các ngày 4 và 5. Còn 20 phôi túi sau sinh thiết được đông lạnh bằng phương pháp thuỷ tinh hoá có tỷ lệ sống cao sau rã đông.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu sự phát triển phôi sau sinh thiết để chẩn đoán di truyền trước chuyển phôiTẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 6-2015NGHIÊN CỨU SỰ PHÁT TRIỂN PHÔI SAU SINH THIẾTĐỂ CHẨN ĐOÁN DI TRUYỀN TRƢỚC CHUYỂN PHÔINguyễn Thanh Tùng*; Nguyễn Ngọc Diệp*; Dương Đình Hiếu*Nguyễn Đình Tảo*; Quản Hoàng Lâm*TÓM TẮTMục tiêu: khảo sát sự phát triển phôi sau sinh thiết. Đ i tượng: 50 phôi ngày 3 và 20 phôi túiđược sinh thiết. Phương pháp: nghiên cứu tiến cứu mô tả. Kết quả: 32/50 phôi ngày 3 sau sinhthiết phát triển thành phôi túi (64%). Tỷ lệ sống sau rã đông của 20 phôi túi sinh thiết được đônglạnh bằng phương pháp thuỷ tinh hoá đạt 95%. Kết luận: sinh thiết một phôi bào của phôi giaiđoạn phân chia ngày 3 không ảnh hưởng đến sự phát triển phôi tại ngày 4 và 5. Phôi túi sinhthiết được đông lạnh bằng phương pháp thuỷ tinh hoá có tỷ lệ sống cao sau rã đông.* Từ khóa: Phôi túi; Phôi ngày 3; Sinh thiết; Tỷ lệ sống sau rã đông; Chuyển phôi; Chẩn đoándi truyền.Study on Embryo Development after Biopsy for Genetic Diagnosisprior Embryo TransferSummaryObjective: To investigate the invitro development of embryos after biopsy. Subjects: 50 embryoson day 3 and 20 blastocysts were biopsied. Research method: Description progressiveresearch. Result: At day 5, 32 of 50 embryos after biopsy reached the blastocyst stage (64%).The survival rate of post-thawing 20 biopsied blastocysts was 95%. Conclusion: The one-cellbiopsy from cleavage embryo at day 3 did not affect the embryo development on day 4 and day5. By vitrification, the post - thawing survival rate of the biopsied blastocyst was high.* Key words: Blastocyst; Day 3 embryo; Biopsy; Post-thawing survival rate; Embryo transfer;Genetic diagnosis.ĐẶT VẤN ĐỀPhương pháp thụ tinh trong ống nghiệmđóng một vai trò quan trọng trong lĩnh vựchỗ trợ sinh sản và ngày càng được pháttriển rộng khắp trên thế giới. Tuy nhiên, tỷlệ thành công trong hỗ trợ sinh sản mớichỉ đạt khoảng 30 - 40%, lĩnh vực này cònnhiều vấn đề cần được tiếp tục nghiên cứu.Hiện nay, hầu như việc lựa chọn phôiđều dựa trên những tiêu chuẩn về hìnhthái của phôi. Tuy nhiên, việc đánh giá vềhình thái chưa phản ánh đầy đủ chấtlượng thực của phôi, nếu chỉ dựa vàocác thông số về hình thái thì kết quả thụtinh ống nghiệm vẫn còn những hạn chế.* Học viện Quân yNgười phản hồi (Corresponding): Nguyễn Thanh Tùng (tung_ttcnp@yahoo.com)Ngày nhận bài: 06/05/2015; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 24/06/2015Ngày bài báo được đăng: 08/07/201545TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 6-2015Để nâng cao tỷ lệ thành công và trẻ sinhsống khoẻ mạnh khi thụ tinh trong ốngnghiệm, việc chẩn đoán di truyền trướcchuyển phôi (Preimplantation GeneticDiagnosis - PGD) và sàng lọc di truyềntrước chuyển phôi (Preimplantation GeneticScreening - PGS) là một trong những yêucầu quan trọng, cấp thiết và thực tiễn. Đểthực hiện kỹ thuật này, trước tiên cầnsinh thiết phôi, cung cấp vật liệu di truyềncho chẩn đoán. Đây là kỹ thuật xâm lấnphôi có thể ảnh hưởng đến sự phát triểncủa phôi sau sinh thiết. Do vậy, chúng tôitiến hành nghiên cứu này nhằm: Khảo sátsự phát tri n phôi sau sinh thiết.ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU1. Đối tượng nghiên cứu.70 phôi người còn dư khi thụ tinh trongống nghiệm, chia thành 2 nhóm:- Nhóm I: 50 phôi ngày 3.- Nhóm II: 20 phôi ngày 5.* Tiêu chuẩn lựa chọn phôi đ sinh thiết:- Phôi ngày 3 có ít nhất 6 phôi bào, tỷ lệmảnh vỡ bào tương < 10%.- Phôi ngày 5 đạt tiêu chuẩn 3AA, 3AB [1].2. Phương pháp nghiên cứu.Nghiên cứu tiến cứu mô tả cắt ngang.* K thuật sinh thiết phôi:- Chuẩn bị:+ Kính hiển vi soi ngược trang bị bộ vithao tác có gắn hệ thống laser.trong 30 phút. Các phôi sinh thiết sẽ đểtrong giọt sinh thiết trong 10 phút trướckhi sinh thiểt.- Quy trình sinh thiết phôi ngày 3:+ Lựa chọn phôi bào nhỏ, nhìn rõ nhânđể sinh thiết.+ Xoay phôi để đưa phôi bào sinh thiếtvề vị trí 3 giờ và giữ cố định phôi bằngkim giữ tại vị trí 9 giờ.+ Dùng laser tạo lỗ thủng trên màngtrong suốt của phôi tại vị trí 3 giờ, kíchthước lỗ khoảng một nửa kính thước phôibào có hình chữ V hoặc hình chêm.+ Đưa kim sinh thiết đường kính 30µm qua lỗ thủng, vừa hút vừa kéo phôibào sinh thiết (tránh làm vỡ phôi bào).+ Röa phôi bào sinh thiết bằng môitrường PBS, chuyển vào tuýp eppendorfcùng với thể tích PBS 2 - 3 µm.- Quy trình sinh thiết phôi ngày 5:+ Phôi ngày 5 được tạo lỗ thủng 10 µmtrên màng trong suốt khi phôi được 3 ngày.+ Khi phôi túi hình thành, chờ khi có 6- 10 tế bào lá nuôi chui qua lỗ thủng màngtrong suốt tiến hành sinh thiết.+ Xoay phôi túi để đưa các tế bào lánuôi chui qua lỗ thủng ở vị trí 3 giờ.+ Cố định phôi bằng kim giữ tại vị trí9 giờ.+ Dùng kim sinh thiết đường kính 20 µmvừa hút vừa kéo tế bào lá nuôi, khi khôngđứt thì dùng laser cắt rời khỏi phôi túi.+ Kim sinh thiết có đường kính trong30 µm và 20 µm.+ Rửa các tế bào lá nuôi sinh thiếtbằng môi trường PBS, chuyển vào tuýpeppendorf cùng với thể tích PBS ...