Nghiên cứu tính đa dạng của allele hla - DQA1 bằng kỹ thuật polymerase chain reaction sequence specific primers (PCR - SSP) ở dân tộc kinh miền trung - Việt Nam

Hệ kháng nguyên bạch cầu người (HLA,human lymphocyte antigen) nằm trênnhiễm sắc thể thứ 6, đây là một hệ khángnguyên rất phức tạp, và đa dạng. Hệ HLAkhông những là tiêu chí di truyền của mỗingười mà đồng thời còn liên hệ chặt chẽ vớichức năng điều hoà miễn dịch và các bệnhtật khác. Những người không cùng một loạihình phân bố các allele của HLA thì tínhcảm thụ hay sức đề kháng với một số bệnhkhông giống nhau. Nhiều tác giả nướcngoài đã nghiên cứu sự khác biệt về phânbố allele HLA - DQA1 trong quần thể ngườiđã phát...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu tính đa dạng của allele hla - DQA1 bằng kỹ thuật polymerase chain reaction sequence specific primers (PCR - SSP) ở dân tộc kinh miền trung - Việt Nam Nghiªn cøu tÝnh ®a d¹ng cña allele hla - DQA1 b»ng kü thuËt polymerase chain reaction sequence specific primers (PCR - SSP) ë d©n téc kinh miÒn trung - ViÖt Nam TrÇn §×nh B×nh1, Wang Linlin2, Lin Weixiong2 vµ céng sù 1 Bé m«n Vi sinh vËt Y häc, §¹i häc Y khoa HuÕ 2 Tr−êng §¹i häc Y khoa Qu¶ng T©y, Trung Quèc Sö dông kü thuËt khuyÕch ®¹i chuçi gen Polymerase Chain Reaction Sequence SpecificPrimers (PCR - SSP) ®Ó nghiªn cøu tÝnh ®a d¹ng cña sù ph©n bè allel HLA - DQA1 ë 214thanh thiÕu niªn khoÎ m¹nh d©n téc Kinh, miÒn Trung ViÖt Nam, kÕt qu¶ cho thÊy: 10 allele HLA-DQA1 ®· ®−îc t×m thÊy, trong ®ã DQA1*0104 lµ phæ biÕn nhÊt víi tÇn suÊtlµ 25.8% vµ thÊp nhÊt lµ DQA1*0601 (1%). KÕt qu¶ nghiªn cøu chØ ra r»ng tÝnh ®a d¹ng allele HLA-DQA1 ë d©n téc Kinh miÒn trungViÖt Nam cã tÝnh ®Æc tr−ng d©n téc vµ kh¸c víi c¸c d©n téc kh¸c ë Trung Quèc, ë Th¸i Lan. I. §Æt vÊn ®Ò vÊn ®Ò nµy, nh−ng cho ®Õn nay ch−a cã b¸o c¸o nµo vÒ ph©n bè allele HLA - DQA1 HÖ kh¸ng nguyªn b¹ch cÇu ng−êi (HLA, ë ViÖt Nam. Chóng t«i ¸p dông kü thuËthuman lymphocyte antigen) n»m trªn DCSVkhuyÕch ®¹i chuçi gen PolymerasenhiÔm s¾c thÓ thø 6, ®©y lµ mét hÖ kh¸ng Chain Reaction Sequence Specific Primersnguyªn rÊt phøc t¹p, vµ ®a d¹ng. HÖ HLA (PCR - SSP) ®Ó nghiªn cøu tÝnh ®a d¹ngkh«ng nh÷ng lµ tiªu chÝ di truyÒn cña mçi cña sù ph©n bè allel HLA - DQA1 ë d©n técng−êi mµ ®ång thêi cßn liªn hÖ chÆt chÏ víi Kinh, miÒn Trung ViÖt Nam ®Ó gãp phÇnchøc n¨ng ®iÒu hoµ miÔn dÞch vµ c¸c bÖnh nghiªn cøu sù kh¸c biÖt vÒ di truyÒn gi÷atËt kh¸c. Nh÷ng ng−êi kh«ng cïng mét lo¹i c¸c d©n téc kh¸c nhau.h×nh ph©n bè c¸c allele cña HLA th× tÝnhc¶m thô hay søc ®Ò kh¸ng víi mét sè bÖnh II. §èi t−îng vµ ph−¬ng ph¸pkh«ng gièng nhau. NhiÒu t¸c gi¶ n−íc nghiªn cøungoµi ®· nghiªn cøu sù kh¸c biÖt vÒ ph©n 1. §èi t−îng nghiªn cøu:bè allele HLA - DQA1 trong quÇn thÓ ng−êi Lµ 214 thanh thiÕu niªn khoÎ m¹nh, tuæi®· ph¸t hiÖn mét sè ng−êi mang nh÷ng tõ 7 - 36, d©n téc Kinh, c− tró t¹i c¸c tØnhallele nµy sÏ cã kh¶ n¨ng c¶m thô, hay ®Ò Thõa Thiªn HuÕ, Qu¶ng TrÞ vµ Qu¶ng B×nhkh¸ng víi mét sè bÖnh tËt nhÊt ®Þnh. Trong tû lÖ nam n÷: 1: 1, tuæi b×nh qu©n lµ 14.thùc tÕ, mçi d©n téc cã mçi bèi c¶nh di 2. T¸ch DNA: trªn mçi ®èi t−îng lÊy 2mltruyÒn, yÕu tè di truyÒn kh¸c nhau, cïngmét d©n téc nh−ng kh¸c nhau vÒ vÞ trÝ ®Þa m¸u tÜnh m¹ch, thªm 0,5ml Natri citratelý... th× sù ph©n bè c¸c alleles cña hÖ HLA 3,8% chèng ®«ng vµ dïng ph−¬ng ph¸pcòng kh¸c nhau [3, 7]. ë Trung Quèc ®· cã chiÕt t¸ch DNA kinh ®iÓn cã c¶i tiÕn lµnhiÒu nghiªn cøu vÒ hÖ HLA, nhÊt lµ sù Phenol/chloroform. C¸c b−íc nh− sau:ph©n bè cña allele HLA - DQA1 trªn nhiÒu Víi 2ml m¸u chèng ®«ng, thªm 5mld©n téc nh− H¸n, Choang, Bè y, Duy Ng«, dung dÞch gelatine 3%, trén ®Òu ñ ëNhÜ, M·n... Th¸i Lan còng ®· cã b¸o c¸o vÒ 370C/10 phót, t¸ch lÊy phÇn dÞch phÝa trªn,46ly t©m 3500 rpm/5 phót, bá phÇn dÞch phÝa C¸c cÆp måi ®èi chiÕu: mçi lÇn tiÕn hµnhtrªn, thªm 2ml dung dÞch TES 2mm, trén PCR ®Òu dïng mét ®«i måi ®èi chiÕu lµ®Òu, thªm 0,5ml dung dÞch 10% SDS, trén Ctr1 1 (5 TAT CAT GCC TCT TTG CAC®Òu, thªm 2ml dung dÞch Phenol b·o hoµ CAT TC3, 23 mer, TM 660C) Ctrl 2 (AATtrong TES. Trén ®Òu, ly t©m 3500 rpm/5 GCA CTG AAC TCC CAC ATT CC3, 23phót, t¸ch lÊy phÇn dÞch ë trªn (cã thÓ tiÕn mer, Tm 700C) ®Ó kiÓm so¸t vµ ®èi chiÕuhµnh b−íc nµy thªm mét lÇn n÷a), thªm ph¶n øng khuyÕch ®¹i PCR.2ml dung dÞch Chloroform/Isoamylic (v/v: Kü thuËt PCR - SSP: Dùa vµo ph−¬ng24/1) trén ®Òu, ly t©m 3500 rpm/5 phót. ph¸p cña O. Olerup ®Ó tiÕn hµnh, cô thÓ lµ:T¸ch lÊy phÇn n−íc trong ë trªn, thªm 5ml mçi èng tiÕn hµnh PCR chøa 10µl gåm cã:dung dÞch cån Ethylic 95%, nhÑ nhµng quay 75ng tiªu b¶n DNA, dung dÞch ®Öm 5 xèng nghiÖm ®Ó c¸c sîi DNA xo¾n l¹i, dïng PCR (50mmol KCl; 1.5mmol MgCl2;èng hót nhá nhÑ nhµng hót lÊy DNA vµ b¶o 10mmol Tris-HCl (pH 8.3); 0,001% (w/v)qu¶n ë mét èng kh¸c trong dung dÞch cån Gelatin) 1% BSA, 200µl dNTPs chÝnh lµ c¸c75%. Khi sö dông cã thÓ dïng dung dÞch dATP, dGTP, dCTP vµ dTTP; 0,25 µM c¸cTE hoÆc n−íc cÊt ®Ó hoµ tan DNA. ®«i måi ®Æc hiÖu, 0,05 µM ®«i måi ®èi chiÕu 3. Kü thuËt PCR ®Ó ph©n tÝch allele vµ 0,50 IU Taq DNA polymerase. TiÕn hµnhHLA - DQA1. 30 chu kú, mçi chu kú nh− sau: BiÕn tÝnh C¸c cÆp måi ®Æc hiÖu (specifiec 940C/30 gi©y => gi¶m nhiÖt 620C/30 gi©y =>primers) c¨n cø vµo b¶ng c¸c nucleotides nèi dµi 720C/90 gi©y. S¶n phÈm thu ®−îccña c¸c alleles cña hÖ HLA II n¨m 2002 vµ sau PCR ®−îc tiÕn hµnh ®iÖn di ë trongdùa vµo c¸c Primers ®Æc hiÖu cña th¹ch Agarose 1,5% víi ®iÖn ¸p 100V trongO.Olerup, chóng t«i thÊy c¸c Primers ®Æc 15 phót. Xem vµ ...