Phân lập và tuyển chọn vi khuẩn lactic có họat tính kháng Vibrio parahaemolyticus từ nội tạng tôm thẻ chân trắng (Litopenaeus vannamei)

Nghiên cứu này nhằm thu nhận một số chủng vi khuẩn lactic có hoạt tính kháng Vibrio parahaemolyticus từ tôm Thẻ chân trắng (Litopenaeus vannamei) ở huyện Nhơn Trạch, tỉnh Đồng Nai làm cơ sở sản xuất chế phẩm sinh học cho tôm.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phân lập và tuyển chọn vi khuẩn lactic có họat tính kháng Vibrio parahaemolyticus từ nội tạng tôm thẻ chân trắng (Litopenaeus vannamei) Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản Số 4/2019 THOÂNG BAÙO KHOA HOÏC PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN VI KHUẨN LACTIC CÓ HỌAT TÍNH KHÁNG Vibrio parahaemolyticus TỪ NỘI TẠNG TÔM THẺ CHÂN TRẮNG (Litopenaeus vannamei) ISOLATION AND SELECTION OF LACTIC ACID BACTERIA AGAINST Vibrio parahaemolyticus FROM GASTROINTESTINAL TRACT OF PACIFIC WHITE SHRIMP (Litopenaeus vannamei) Đoàn Thị Tuyết Lê¹*,Đỗ Minh Anh¹, Lê Thị Thu Hương¹ Ngày nhận bài: 20/5/2019; Ngày phản biện thông qua: 16/12/2019; Ngày duyệt đăng: 24/12/2019 TÓM TẮT Các chủng vi khuẩn lactic (LAB) được sử dụng để tạo chế phẩm sinh học trong nuôi tôm nhờ những đặc tính có lợi như hỗ trợ tiêu hóa và ức chế các vi khuẩn gây bệnh. Nghiên cứu này nhằm thu nhận một số chủng vi khuẩn lactic có hoạt tính kháng Vibrio parahaemolyticus từ tôm Thẻ chân trắng (Litopenaeus vannamei) ở huyện Nhơn Trạch, tỉnh Đồng Nai làm cơ sở sản xuất chế phẩm sinh học cho tôm. Các chủng có khả năng sinh acid được phân lập nhanh bằng cách tăng sinh mẫu trên môi trường tiền chọn lọc MRS Broth + 50mg/l Nystatin, rồi chọn lọc trên môi trường MRS agar có bổ sung 0,5% CaCO3 và định tính acid lactic bằng thuốc thử Uffelmann; các chủng có hoạt tính kháng Vibrio parahaemolyticus cao được tuyển chọn; định danh bằng sinh hóa và sinh học phân tử. Kết quả khảo sát khả năng kháng Vibrio parahaemolyticus của các chủng đã được định danh thu được ba chủng Lactobacillus salivarius LIITA1.2.2, Lactobacillus reuteri LIVTA2.4.1 và Lactobacillus plantarum LVIITA3.3.9 có khả năng tiết acid lactic và kháng V. parahaemolyticus ở mật độ 105 cfu/ml, 106 cfu/ml và 107 cfu/ml. Từ khóa: Probiotic, lactic acid bacteria (LAB), Vibrio parahaemolyticus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus reuteri, Litopenaeus vannamei ABSTRACT The lactic acid bacteria (LAB) are used to create probiotics in shrimp farming due to beneficial effects such as supporting digestion and inhibiting pathogenic bacteria in shrimp. This study aims to acquire certain strains of lactic acid bacteria against Vibrio parahaemolyticus from gut of White leg shrimp (Litopenaeus vannamei) in Nhon Trach district, Dong Nai province in order to produce probiotic for the shrimp basically. The research was carried out by isolating some strains on pre-selective medium MRS Broth + 50mg/l Nystatin and seletive medium MRS agar + 0,5% CaCO3; determining lactic acid by the Uffelmann reagent; selecting strains with high antibacterial activity; identifying by biochemical and molecular biology methods. Next, Vibrio parahaemolyticus antibacterial ability of the identified strains was investigated. The results showed that Lactobacillus salivariu LIITA1.2.2, Lactobacillus reuteri LIVTA2.4.1 and Lactobacillus plantarum LVIITA3.3.9 were selected. These strains could produce lactic acid and resistant to V. parahaemolyticus in density of 105 cfu /ml, 106 cfu/ml and 107 cfu/ml. Keywords: Probiotic, lactic acid bacteria (LAB), Vibrio parahaemolyticus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus reuteri, Litopenaeus vannamei ¹ Khoa Kỹ thuật Hóa học và Môi trường, Trường Đại học Lạc Hồng TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 181 Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản Số 4/2019 I. MỞ ĐẦU mục tiêu xây dựng quy trình phân lập, tuyển Trong những năm gần đây, ngành nuôi trồng chọn, định danh vi khuẩn lactic đơn giản, dễ thủy sản nói chung và nuôi tôm nói riêng phát thực hiện, không trùng lặp với các quy trình triển mạnh mẽ do nhu cầu các sản phẩm thủy đã công bố và khảo sát hoạt tính kháng Vibrio hải sản gia tăng. Việc lạm dụng thuốc kháng parahaemolyticus từ tôm thẻ chân trắng ở sinh và chất khử trùng trong nuôi trồng thủy Nhơn Trạch, tỉnh Đồng Nai. Trên cơ sở đó góp sản để ngăn chặn, kiểm soát dịch bệnh đã gây phần chủ động về nguồn giống sản xuất chế nhiều hậu quả nghiêm trọng, ảnh hưởng đến phẩm sinh học cho tôm, nâng cao hiệu quả nuôi sức khỏe người tiêu dùng (Dorsey, Robertson, tôm thẻ chân trắng. 2013). Hiện nay, probiotics được sử dụng để II. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP thay thế chất kháng sinh trong thủy sản, giúp 1. Vật liệu tăng tỉ lệ sống và phát triển của động vật thủy Mẫu: 60 mẫu nội tạng tôm thẻ chân trắng sản (Reyes-Becerril và cs, 2014; Swain và cs, (Litopenaeus vannamei) khỏe mạnh từ 10 2009). Trong số vi sinh vật probiotics, các ao nuôi tôm ở huyện Nhơn Trạch, tỉnh Đồng chủng vi khuẩn lactic đóng vai trò quan trọng Nai. Chủng vi sinh vật kiểm định Vibrio trong đường tiêu hóa của vật chủ do cải thiện parahaemolyticus được phân lập từ ao tôm khả năng miễn dịch, cân bằng hệ vi sinh đường bệnh chết (được cung cấp bởi Trung tâm Công ruột và tiết ra chất kháng khuẩn như acid lactic, nghệ Sinh học thành phố Hồ Chí Minh). acid acetic, bacteriocin… ức chế sự phát triển Môi trường và hóa chất: MRSA (Man, của các vi khuẩn gây bệnh (Ige, 2013; Maeda Rogosa, Sharpe Agar) xuất xứ: Biokar - Pháp; và cs, 2014). Những nghiên cứu gần đây cho MRSB (Man, Rogosa, Sharpe Broth) xuất xứ: thấy khi bổ sung các chủng vi khuẩn lactic Biokar - Pháp; NA (Nutrient Agar) xuất xứ: vào thức ăn tôm đã hỗ trợ tăng sức đề kháng, Biokar - Pháp; APW: peptone 10g, NaCl 10g, chống lại vi khuẩn gây bệnh giúp tôm sinh nước cất vừa đủ 1 lít, Nystatin 100.000 UI trưởng khỏe mạnh (Võ Thị Thứ, 2006; Khuất ...