PHÂN LẬP VIRUS PRRS TRÊN MÔI TRƯỜNG TẾ BÀO MARC-145 VÀ XÁC ĐỊNH VIRUS BẰNG KỸ THUẬT RT-PCR

Từ nhiều năm nay, ngành chăn nuôi chiếm một vai trò quan trọng trong nền kinh tế ở nước ta vì nước ta là một nước nông nghiệp. Nó đã cung cấp một phần nhu cầu thực phẩm thiết yếu của cuộc sống con người. Trong đó ngành chăn nuôi heo không ngừng phát triển để cung cấp đủ số lượng cũng như chất lượng cho người tiêu dùng. Do nhu cầu xã hội phát triển nên số lượng heo nuôi ngày càng tăng cao....
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
PHÂN LẬP VIRUS PRRS TRÊN MÔI TRƯỜNG TẾ BÀO MARC-145 VÀ XÁC ĐỊNH VIRUS BẰNG KỸ THUẬT RT-PCR iii BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆPPHÂN LẬP VIRUS PRRS TRÊN MÔI TRƢỜNG TẾ BÀO MARC-145 VÀ XÁC ĐỊNH VIRUS BẰNG KỸ THUẬT RT-PCR Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa: 2003 – 2007 Sinh viên thực hiện: VÕ NGỌC THƠ Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 09/2007 iv BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP VIRUS PRRS TRÊN MÔI TRƢỜNG TẾ BÀO MARC-145 VÀ XÁC ĐỊNH VIRUS BẰNG KỸ THUẬT RT-PCRGiáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện:ThS. TRẦN THỊ BÍCH LIÊN VÕ NGỌC THƠBSTY. HOÀNG THANH HẢI Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 09/2007 LỜI CẢM ƠN  Chân thành cảm ơn: Ban giám hiệu Trường Đại Học Nông Lâm Tp.Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệmBộ Môn Công Nghệ Sinh Học cùng tất cả quý Thầy Cô đã truyền đạt kiến thức chotôi trong suốt quá trình học tập tại trường. Các Thầy Cô và anh chị tại Trung Tâm Phân Tích Thí Nghiệm Trường ĐạiHọc Nông Lâm Tp.Hồ Chí Minh đã tận tình chỉ bảo và tạo mọi điều kiện tốt nhấtcho tôi trong suốt quá trình thực tập tốt nghiệp. Thầy Hải, Cô Hà và các Thầy Cô Bộ Môn Vi Sinh-Truyền Nhiễm đã tận tìnhgiúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài. Anh Lê Hồng Phong ở Cục Thú Y vùng 6 đã rất tận tình chỉ bảo và giúp đỡtôi trong suốt thời gian thực hiện khoá luận. Anh Uyên đã động viên và chia sẻ vấn đề của tôi. Các bạn lớp Công Nghệ Sinh Học 29 (nhất là các bạn trong phòng 14A, cưxá B) đã động viên và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập.  Đặc biệt tôi xin gởi lời biết ơn sâu sắc đến Cô Trần Thị Bích Liên và AnhHoàng Thanh Hải đã rất tận tình dạy bảo, hướng dẫn, giúp đỡ và động viên tôi trongsuốt quá trình nghiên cứu và thực hiện khóa luận.  Con xin gởi lòng mang ơn đặc biệt nhất đến với cha mẹ, những người sinhthành, nuôi dưỡng, dạy dỗ và luôn cho con một tinh thần thoải mái để luôn chú tâmvào chuyện học.  Và lời cám ơn đặc biệt nhất tôi xin gởi đến người bạn thân thiết nhất, NguyễnMinh Khôi, đã luôn luôn bên tôi, an ủi và động viên để tôi làm tốt nhất. Xin cám ơn,cám ơn từ tận đáy lòng tôi. Thủ Đức, tháng 8 năm 2007 iii Võ Ngọc Thơ TÓM TẮTĐề tài: “Phân lập virus PRRS trên môi trường tế bào MARC-145 và xác định virusbằng kỹ thuật RT-PCR”. Đề tài được thực hiện từ tháng 3/2007 đến tháng 8/2007tại phòng Vi Sinh Truyền Nhiễm Khoa Chăn Nuôi Thú Y và tại Trung Tâm PhânTích Thí Nghiệm Hóa Sinh Trường Đại Học Nông Lâm Tp.Hồ Chí Minh. Mục tiêu của đề tài là phân lập virus từ các loại mẫu khác nhau và xác định sựhiện diện của virus bằng kỹ thuật RT-PCR. Nội dung nghiên cứu gồm:  Hồi phục tế bào và xác định thời gian một lần cấy chuyển (thời gian tế bàophát triển đầy bề mặt nuôi cấy tạo thành tế bào một lớp) trên bình nuôi cấy 25cm2với những lượng tế bào là 7.105 và 106.  Khảo sát bệnh tích tế bào MARC-145 sau khi nuôi cấy phân lập từ các loạimẫu khác nhau: huyết thanh, hạch amiđan, phổi, hạch phổi.  Xác định sự hiện diện của virus PRRS từ bệnh tích tế bào MARC-145 sau gâynhiễm bằng kỹ thuật RT-PCR (Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction).Sau thời gian thực hiện, chúng tôi có các kết quả sau: o Thời gian một lần cấy chuyển ở lọ 25cm2 với những lượng tế bào: 7.105, 106 lần lượt là 72,56 giờ và 46 giờ. o Tế bào MARC-145 sau khi được hồi phục từ nitơ lỏng vẫn phát triển bình thường. o Phân lập virus PRRS từ hạch phổi, phổi, huyết thanh trên môi trường tế bào MARC-145. Ghi nhận được 3 mẫu có biểu hiện bệnh tích tế bào là 2 mẫu hạch phổi và 1 mẫu phổi chiếm tỷ lệ 27,27% (3/11). o Bằng kỹ thuật RT-PCR, trong 3 mẫu có bệnh tích tế bào có 1 mẫu cho kết quả dương tính chiếm tỷ lệ 33,33% trên mẫu xét nghiệm. iv SUMMARYGraduating thesis: Isolating PRRS virus by MARC-145 cell and confirming thevirus by RT-PCR technology. The thesis have been done from March to August,2007 at Microbiology And Infectious Diseases Dept. of Faculty Of Animal ScienceVeterinary and Center For Chemical And Biological Analysis And Experiment ofNong Lam university Hồ Chí Minh city. Purpose of this reseach: Isolate PRRS virus from different specimens anddetermine its appearance by RT-PCR technology. The contain is concerned about:  Reviewing the cell and determine how long once transfer, length of time forcells grows to make monolayer, in flash with the amount of 7.105 and 106.  Observating MARC-145 cell`s pathology after infecting the cells withdifferent specimens such as: serum, lung, lympho nodes.  Determine virus` appearance from MARC-145 cells pathology after dayspostinfection by RT-PCR technology (Reverse Transcriptase-Polymerase ChainReaction).Finally, we have results: o The average period of one transfer with the amount of 7.105 cells is 72,565 hours, 106 cells is 46 hours. o MARC-145 after reviewing from liquid nitrogen grow normally. o Isolating PRRS virus from lung, lympho nodes, serum in MARC-145 cell invironment. 3 specimens have MARC-145 cells pathology postinfection: 2 lymphonotes, 1 lung (3/11 specimens). o We detect the positive form of PRRS RN ...