Phân tích dư lượng kháng sinh β–lactam trong thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao với detector khối phổ (LC-MS/MS)

Để kiểm soát dư lượng thuốc kháng sinh, đã có nhiều phương pháp phân tích được nghiên cứu và ứng dụng. Nhưng với những đặc điểm ưu việt và độ chính xác cao nên các phương pháp phân tích sắc ký khối phổ (GC-MS, LC-MS) được coi là phương pháp phân tích khẳng định, có giá trị pháp lý để phát hiện và định lượng nồng độ các chất tồn dư ở lượng vết hay siêu vết.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phân tích dư lượng kháng sinh β–lactam trong thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao với detector khối phổ (LC-MS/MS) Trường Đại học Y Dược Thái Nguyên Bản tin Y Dược học miền núi số 1 năm 2016 PHÂN TÍCH DƢ LƢỢNG KHÁNG SINH β –LACTAM TRONG THỰC PHẨM BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC K LỎNG HIỆU NĂNG CAO VỚI DETECTOR KHỐI PHỔ (LC-MS/MS) Nguyễn Ngọc Minh Trường Đại học Y Dược Thái Nguyên 1. MỞ ĐẦU An toàn vệ sinh thực phẩm luôn là vấn đề được quan tâm của toàn xã hội. Nguồn thực phẩm không đảm bảo vệ sinh ngày càng khó kiểm soát và ảnh hưởng mạnh mẽ đến sức khỏe con người… Trong khoảng 10 năm trở lại đây, các ngành nghề chăn nuôi được mở rộng, năng suất và sản lượng các sản phẩm chăn nuôi ngày càng cao. Tuy nhiên, do sự thiếu kiểm soát chặt chẽ trong quy trình chăn nuôi, cùng với sự thiếu hiểu biết nên người chăn nuôi coi hóa chất và thuốc thú y là giải pháp duy nhất để tăng năng suất và sản lượng. Điều đó, đồng nghĩa với việc hóa chất và thuốc thú y được sử dụng thường xuyên hơn, thậm chí lạm dụng quá mức cần thiết. Việc lạm dụng, sử dụng bất hợp pháp hoặc sử dụng sai nguyên tắc thuốc có thể gây hiện tượng nhờn thuốc, gây tồn dư trong thực phẩm, ảnh hưởng xấu đến sức khỏe cộng đồng, môi trường và hiệu quả điều trị bệnh... . Để kiểm soát dư lượng thuốc kháng sinh, đã có nhiều phương pháp phân tích được nghiên cứu và ứng dụng. Nhưng với những đặc điểm ưu việt và độ chính xác cao nên các phương pháp phân tích sắc ký khối phổ (GC-MS, LC-MS) được coi là phương pháp phân tích khẳng định, có giá trị pháp lý để phát hiện và định lượng nồng độ các chất tồn dư ở lượng vết hay siêu vết. Xuất phát từ tính cấp thiết của xã hội và tính ưu việt của phương pháp phân tích, chúng tôi xây dựng phương pháp nghiên cứu: Phân tích dư lượng kháng sinh β – lactam trong thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao bằng Detector khối phổ (LC-MS MS)”. Mục tiêu của thực hiện đề tài nghiên cứu là: - Xây dựng phương pháp xác định hàm lượng của một số kháng sinh nhóm β - lactam trong thực phẩm bao gồm: + Khảo sát các điều kiện xử lí mẫu và phân tích. + Thẩm định phương pháp đã xây dựng. - Áp dụng phương pháp xác định dư lượng kháng sinh nhóm β - lactam trong thực phẩm trên địa bàn Hà Nội. 2. ĐỐI TƢỢNG, MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 2.1. Đối tƣợng, mục tiêu và nội dung nghiên cứu 2.1.1. Đối tƣợng và mục tiêu nghiên cứu Hiện nay, các chỉ tiêu về chất lượng, dư lượng các chất độc hại là một vấn đề cấp thiết đang được quan tâm. Trong đó chỉ tiêu về dư lượng kháng sinh trong thực phẩm là một mảng đề tài rất thực tế và quan trọng. Như chúng tôi đã đề cập trong đề tài này, vấn đề lạm dụng không đúng hàm lượng kháng sinh đem lại rất nhiều tác hại và ảnh hưởng đến sức khoẻ con người. Trong đề tài này, chất phân tích mà chúng tôi chọn để nghiên cứu 5 kháng sinh nhóm β-Lactam là penicillin (PENG), cloxacillin (CLO), oxacilin (OXA) ampicillin (AMP), amoxicillin (AMO), cephalexin (CEP), cefixim (CEF) trong thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ LC-MS/MS. 2.1.2. Nội dung nghiên cứu - Khảo sát phương pháp bao gồm: + Điều kiện tách chiết mẫu. + Điều kiện vận hành máy LC-MS/MS. -Thẩm định phương pháp: + Giới hạn phát hiện LOD, giới hạn định lượng LOQ. Trường Đại học Y Dược Thái Nguyên Bản tin Y Dược học miền núi số 1 năm 2016 + Khoảng tuyến tính. + Độ chụm (độ lặp lại) + Độ đúng (độ lệch, độ thu hồi) 2.2. Phƣơng pháp nghiên cứu Chúng tôi chọn phương pháp phân tích là sắc ký lỏng hai lần khối phổ (LC-MS MS) kết hợp với phương pháp xử lí mẫu bằng chiết pha rắn (SPE) để xác định dư lượng một số kháng sinh trong nhóm β-Lactam trong thực phẩm. Các bước tiến hành trong quá trình chiết pha rắn + Hoạt hoá chất hấp phụ pha rắn + Mẫu và chất phân tích được chảy qua cột + Loại bỏ các chất gây ảnh hưởng ra khỏi cột + Giải hấp chất phân tích bằng dung môi thích hợp 2.3. Hóa chất và thiết bị 2.3.1. Hóa ch t Các loại hóa chất sử dụng đều thuộc loại tinh khiết phân tích. Chất chuẩn β – lactam gồm: Phenoxymethylpenicillin (PenV), Penicillin G (Pen G), Ampicillin (Ampi), Oxacillin (Oxa), Cloxacillin (Clox) được cung cấp bởi Sigma (USA). + Acetonitrile được cung cấp bởi Merck (Đức). + Methanol được cung cấp bởi Merck (Đức). + Axit acetic, Amoni acetate được cung cấp bởi Merck (Đức). + KH2PO4, K2HPO4, NaCl, Na2SO4 được cung cấp bởi Merck (Đức). 2.3.2 . Thiết bị - Hệ thống sắc ký lỏng HPLC của Shimazu (Nhật Bản) gồm: bộ phận bơm dung môi, bộ loại khí, bộ phận điều nhiệt, cột sắc ký C18 của Dionex (150mm × 2,1mm × 3μm) ghép nối với detector khối phổ MS/MS Triple Quad 5500 của AB Sciex (Hoa Kì) và máy tính. + Cột chiết pha rắn SPE Polymeric, C18, HLB Oasis. + Máy lắc vortex. + Má ...