Phát triển và xác định giá trị sử dụng của phương pháp xác định dư lượng kháng sinh nhóm aminoglycosides trong sữa và sản phẩm sữa

Hiện nay, các hợp chất kháng sinh nhóm aminoglycosides được sử dụng nhiều trong chăn nuôi nhằm kích thích sự tăng trưởng, phòng ngừa và điều trị bệnh. Sử dụng kháng sinh quá liều hoặc không tuân thủ thời gian ngưng thuốc là nguyên nhân làm cho các kháng sinh này còn tồn dư trên các sản phẩm chăn nuôi. Để kiểm soát dư lượng kháng sinh nhóm aminoglycosides cần phương pháp kiểm nghiệm có độ chọn lọc và độ nhạy đáp ứng được yêu cầu về giới hạn dư lượng tối đa cho phép (MRL) của các hợp chất này.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phát triển và xác định giá trị sử dụng của phương pháp xác định dư lượng kháng sinh nhóm aminoglycosides trong sữa và sản phẩm sữaNghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 5 * 2016 PHÁT TRIỂN VÀ XÁC ĐỊNH GIÁ TRỊ SỬ DỤNG CỦA PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG KHÁNG SINH NHÓM AMINOGLYCOSIDES TRONG SỮA VÀ SẢN PHẨM SỮA Lê Anh Tuấn*, Đỗ Hoàng Ngọc Mai*TÓM TẮT Đặt vấn đề: Hiện nay, các hợp chất kháng sinh nhóm aminoglycosides được sử dụng nhiều trong chăn nuôinhằm kích thích sự tăng trưởng, phòng ngừa và điều trị bệnh. Sử dụng kháng sinh quá liều hoặc không tuân thủthời gian ngưng thuốc là nguyên nhân làm cho các kháng sinh này còn tồn dư trên các sản phẩm chăn nuôi. Đểkiểm soát dư lượng kháng sinh nhóm aminoglycosides cần phương pháp kiểm nghiệm có độ chọn lọc và độ nhạyđáp ứng được yêu cầu về giới hạn dư lượng tối đa cho phép (MRL) của các hợp chất này. Mục tiêu nghiên cứu: Triển khai quy trình xác định dư lượng kháng sinh nhóm aminoglycosides trong sữavà sản phẩm sữa bằng phương pháp LC-MS/MS. Phương pháp nghiên cứu: Kháng sinh aminoglycoside được chiết bằng hỗn hợp gồm KH2PO4 10 mM;EDTA 0,4 mM và TCA 2% trong nước, làm sạch và làm giàu bằng cột WCX. Các kháng sinh aminoglycosideđược phân tách bằng kỹ thuật sắc ký lỏng pha đảo ghép cặp ion với cột tách C18 và hệ pha động gồm ACN vànước có chứa chất ghép cặp ion HFBA ở nồng độ 10 mM. Quá trình định lượng được thực hiện trên đầu dò khốiphổ hai lần (MS/MS) với kỹ thuật ion hóa phun điện tử (ESI) ở chế độ ion dương. Kết quả nghiên cứu: Phương pháp có giới hạn phát hiện là 18 μg/kg, 18 μg/kg, 20 μg/kg, 90 μg/kg, 90μg/kg và 450 μg/kg lần lượt cho gentamycin C1, gentamycin C1a, gentamycin C2+C2a, streptomycin,duhydrostreptomycin và neomycin. Độ lặp lại và độ tái lặp nội bộ phòng thí nghiệm của phương pháp có RSD <15% và hiệu suất thu hồi trong khoảng 91 – 113%. Kết luận: Đã phát triển được phương pháp cho phép xác định được đồng thời 4 hợp chất kháng sinh nhómaminoglycoside. Phương pháp đã được xác nhận giá trị sử dụng và các thông số xác định đều thỏa mãn yêu cầucủa một phương pháp xác định dư lượng. Từ khóa: Aminoglycosides, LC-MS/MS, gentamycin, neomycin, streptomycin, dihydrostreptomycin.ABSTRACT DEVELOPMENT AND VALIDATION OF A METHOD FOR DETERMINATION OF AMINOGLYCOSIDE ANTIBIOTIC RESIDUES IN MILK AND DAIRY PRODUCTS Le Anh Tuan, Do Hoang Ngoc Mai * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Supplement of Vol. 20 - No 5 - 2016: 284 - 289 Background: Aminoglycoside antibiotics have been widely used in livestock, not only to treat or preventinfections but also to promote growth. Antibiotic abuse or withdrawal periods disobeyed has resulted in antibioticresidues in food-producing animals. A highly selective and sensitive method efficient for the detection ofaminoglycosides at maximum residue limits (MRLs) is developed to control these antibiotic residues effectively. Objectives: To develop and validate a method for the determination of aminoglycoside antibiotic residues inmilk and dairy products by liquid chromatography tandem mass spectrometry. Methods: Aminoglycosides were extracted from samples with buffered aqueous solution containing 10mM * Viện Y tế Công cộng Thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: ThS. Lê Anh Tuấn ĐT: 01283508481 Email: leanhtuanmc@gmail.com284 Chuyên Đề Y Tế Công CộngY Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 5 * 2016 Nghiên cứu Y họcpotassium dihydrogen phosphate (KH2PO4); ethylene-diamine-tetraacetic acid (EDTA) 0,4 mM andtrichloroacetic acid (TCA) 2% (w/v) followed by centrifugation and cleanup using solid phase extraction (SPE)procedure on a weak cation exchange (WCX) column. The separation was performed by C18 HPLC column in agradient elution using mobile phases containing ion pair reagent: 10 mL HFBA in Acetonitrile (A) and 10 mLHFBA in water (B). The quantitation was carried out using mass tandem spectrometry (MS/MS) with theelectrospray ionization (ESI) technique in positive mode. Results: The limits of detection were 18 μg/kg, 18 μg/kg, 20 μg/kg, 90 μg/kg, 90 μg/kg and 450 μg/kg forgentamycin C1, gentamycin C1a, gentamycin C2+C2a, streptomycin, dihydrostreptomycin and neomycin,respectively. The precisions of method were respected with RSD < 15% for both repeatability and within-laboratory reproducibility. The recoveries were in the range of 91 – 113%. Thus, validation parameters fulfilledcriteria of AOAC. Conclusion: A LC-MS/MS method for simultaneous determination of four aminoglycoside antibiotics wasdeveloped, validated and ...