Tách chiết và phân lập promoter OsNAC6 từ các giống lúa Việt Nam

Bài viết trình bày kết quả bước đầu trong việc tách chiết và phân lập promoter OsNAC6 từ các giống lúa Việt Nam; Lắp ráp đoạn OsNAC6 promoter vào vector pSK và nhân dòng trong E.coli; Lắp ráp đoạn OsNAC6 Promoter vào vector biểu hiện pBIH.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Tách chiết và phân lập promoter OsNAC6 từ các giống lúa Việt Nam T¹p chÝ khoa häc vµ c«ng nghÖ n«ng nghiÖp ViÖt Namđộ của chế phẩm NAA trong hỗn hợp Vũ Công Hậu, Lê Quang Mai, Đinh Văn Đức (1982), Trồng cây ăn quả trong vườn, NXB Nông nghiệp, TP Hồ2. Đề nghị Tiếp tục thực hiện thí nghiệm trên một Phạm Thị Hương, Trần Thế Tục,số giống xoài khác và sử dụng thêm một số Nguyễn Quang Thạch (2001),chế phẩm điều hòa sinh trưởng mới, nhằm và những điều cần biếttìm ra chế phẩm có hiệu lực tốt nhất trong nghiệp, Hà Nội.việc nâng cao năng suất xoài. Dương Minh, Võ Thanh Hoàng, LêTÀI LIỆU THAM KHẢO Nông nghiệp, TP Hồ Chí Minh. Nguyễn Minh Châu (1998). Cây ăn quả Viện Nghiên cứu cây ăn quả miền Nam. Nam bộ. Thông tin Khuyến nông Việt Các chỉ tiêu cần theo dõi cho việc khảo Nam, Bộ Nông nghiệp & PTNT số sát một số giống cây ăn quả. Vũ Công Hậu (1999), Trồng cây ăn quả Người phản biện ở Việt Nam, NXB Nông nghiệp, TP Hồ PGS. TS. Nguyễn Văn Viết TÁCH CHIẾT VÀ PHÂN LẬP PROMOTER OsNAC6 TỪ CÁC GIỐNG LÚA VIỆT NAM Nguyễn Văn Đồng SUMMARY EXTRACTING AND ISOLATING OsNAC6 PROMOTER FROM VIET NAM RICE VARIETIESThe new trend is continuous activation promoters replaced by induction promoter system that helpto effective control the activity of the transform-genes into plant. In this study, we extractedOsNAC6 promoter from the Vietnam rice varieties that grown under artificial drought condition for aweek. It is used for inserting into pSK cloning vector in E.coli. Then it will be inserted into the pBIHexpression vector and transferred into Agrobacterium tumefaciens strains EHA105 and AGL1. ThePCR analysis positive clonies that grown on LB-agar selection medium plates (50mg/l kanamycin,50mg/l hygromycin) with primers for gus gene (1786bp), hpt gene (514bp) and OsNAC6 promoter(1507bp) tested successfully.Keywords: Agrobacterium tumefaciens, rice, OsNAC6 nhưI. §ÆT VÊN §Ò Promoter thường được sử dụng hiện 2005) đã khắc phục được tình trạng sinhnay trong công nghệ sinh học là dạng hoạt trưởng yếu của cây chuyển gen. Xu hướnghóa liên tục promoter với này đang là vấn đề thời sự trong các promoter với lúa và ngô dẫn đến nghiên cứu áp dụng giống cây trồngviệc khó kiểm soát hàm lượng protein của chuyển gen có khả năng kháng với bất lợigen điều khiển. Vấn đề này đã được giải thời tiết. Bài báo này trình bày kết quảquyết bằng việc thay thế các promoter hoạt bước đầu trong việc tách chiết phân lậphóa liên tục bằng các promoter cảm ứng ở lúa.T¹p chÝ khoa häc vµ c«ng nghÖ n«ng nghiÖp ViÖt NamII. VËT LIÖU Vµ PH¦¥NG PH¸P NGHI£N CøU 0,1M. Chia vào các ống eppendorf, bổ sung glycerol 60%, làm lạnh nhanh bằng1. Vật liệu nghiên cứu nitơ lỏng và giữ ở C tới khi làm biến Các chủng vi sinh vật: DH5α; nạp. : Thực hiện biến nạp vàodòng lúa của Việt Nam: CH1 và CH2 có bằng phương pháp sốc nhiệt và vàonguồn gốc từ Viện Di truyền Nông nghiệp. tế bào bằng phương pháp điện xung.2. Phương pháp nghiên cứu: Phương pháp tách chiết ADN plasmid Tách chiết ADN từ mẫu lá theo phương từ vi khuẩn:pháp của IRRI. ADN plasmid được tách theo phương Sử dụng mẫu lá lúa của 2 dòng CH1 và pháp của Sambrook & cs. Kiểm tra ADNCH2 để tách ADN tổng số theo phươngpháp của IRRI. Thực hiện phản ứng PCR Phương pháp cắt ADN bằng enzymevới mẫu ADN tổng số thu được với chu kỳ hạn chế.như sau: Ban đầu 94 C (2 phút), tiếp đó30 chu kỳ trong đó có 94 Sử dụng 2 enzyme HI để C (90giây); cuối cùng là 72 cắt đoạn ADN. Điện di sản phẩm ADN cắt(10 phút). Sản phẩm PCR được phân tích trên gel agarose 1% để kiểm tra.bằng điện di trên agarose. Phương pháp giải trình tự Lắp ráp đoạn promote ...